Préparation d’échantillons de microscopie à feuilles légères : Montage d’embryons vivants de poisson zèbre pour l’imagerie à long terme
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Icha J., et coll. Utilisant la microscopie de fluorescence de feuille de lumière au développement d’oeil de zebrafish d’image. J. Vis. Exp. (2016).
Cet article décrit la préparation d’échantillon pour la microscopie de fluorescence de feuille de lumière. Il démontre également une méthode pour monter des embryons vivants de poisson zèbre pour l’imagerie à long terme, qui permet l’enregistrement de longs films en accéléré d’embryons vivants dans des conditions quasi physiologiques.
Protocol
1. Préparation de l’échantillon Préparation du mélange Agarose 15 min avant de faire le mélange d’agarose, faire fondre un aliquot de 1 ml d’agarose de point de fusion faible de 1% (dissous dans le milieu E3) dans un bloc chauffant réglé à 70 °C. Une fois que l’agarose est complètement fondue, transférer 600 μl dans un tube frais de 1,5 ml, ajouter 250 μl de milieu E3, 50 μl de 0,4% MS-222 et 25 μl de solution vortexed stock de perles.REMARQUE:</stron…
Materials
| Lightsheet Z.1 microscope | Carl Zeiss Microscopy | ||
| Low melting point agarose | Roth | 6351.1 | |
| Low melting point agarose | Sigma | A4018 or A9414 | |
| Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MESAB/ MS-222/Tricaine) | Sigma | E10521 | |
| 20 μl (1 mm inner diameter, marked black) capilllaries | Brand | 701904 | sold as spare part for transferpettor |
| Teflon tip plungers for 20 μl capillarie | Brand | 701932 | sold as spare part for transferpettor |
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Light Sheet Microscopy Sample Preparation: Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20185, doi: (2023).