Tela de toxicidade química baseada em embriões: avaliando efeitos no desenvolvimento de embriões de zebrafish
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Hao J. et al., Tela de moléculas in vivo baseada em zebrafish em larga escala. J. Vis. Exp. (2010)
Neste artigo, os embriões de zebrafish são usados para a triagem de toxicidade química. A toxicidade química está correlacionada com leituras de fenótipos. O protocolo amostral mostra uma abordagem metodológica de realização do rastreamento de toxicidade química.
Protocol
1. Transferência da Biblioteca de Pequenas Moléculas Embora a transferência de compostos possa ser automatizada com métodos de transferência robótica, descreveremos o método de transferência manual. Bibliotecas de moléculas pequenas são normalmente fornecidas em um formato de 96 poços, com cada composto armazenado em DMSO como um estoque de 10 mM. Cerca de 60 minutos antes dos embriões chegarem ao estágio em que os compostos devem ser adicionados, descon…
Materials
| Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use. |
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| Drierite | W.A. HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH | ||
| 12-channel pipettes, 2-20 μL | Eppendorf | ||
| Aluminum sealing tape for 96-well plates | Nunc, Rochester, NY | ||
| DMSO | Sigma, St. Louis, MO | ||
| Basic incubator, 28.5°C | Fisher Scientific | ||
| Polystyrene 96-well round-bottom assay plates | Corning COSTAR; Lowell, MA | ||
| Stereomicroscope with transmitted light base | Leica Microsystems, Bannockburn, IL | ||
| E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthiocarbamide, Sigma; St. Louis, MO). | PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil. |
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Embryo-Based Chemical Toxicity Screen: Assessing Effects on Developing Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20179, doi: (2023).