In dit artikel worden zebravisembryo’s gebruikt voor het screenen van chemische toxiciteit. Chemische toxiciteit is gecorreleerd met fenotype-uitlezingen. Het monsterprotocol toont een methodologische benadering van het uitvoeren van de chemische toxiciteitsscreening.
Protocol
1. Overdracht van kleine molecuulbibliotheek Hoewel samengestelde overdracht kan worden geautomatiseerd met robotoverdrachtsmethoden, zullen we de handmatige overdrachtsmethode beschrijven. Kleine molecuulbibliotheken worden meestal geleverd in een 96-well formaat, waarbij elke verbinding wordt opgeslagen in DMSO als een voorraad van 10 mM. Ongeveer 60 minuten voordat de embryo’s het stadium bereiken waarop de verbindingen moeten worden toegevoegd, ontdooit u een gew…
Materials
Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until
use.
Drierite
W.A. HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH
12-channel pipettes, 2-20 μL
Eppendorf
Aluminum sealing tape for 96-well plates
Nunc, Rochester, NY
DMSO
Sigma, St. Louis, MO
Basic incubator, 28.5°C
Fisher Scientific
Polystyrene 96-well round-bottom assay plates
Corning COSTAR; Lowell, MA
Stereomicroscope with transmitted light base
Leica Microsystems, Bannockburn, IL
E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthiocarbamide, Sigma; St. Louis, MO).
PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil.