Pantalla de toxicidad química basada en embriones: evaluación de los efectos en el desarrollo de embriones de pez cebra
Published: April 30, 2023
Abstract
Fuente: Hao J. et al., Pantalla in vivo de moléculas pequeñas a base de pez cebra a gran escala. J. Vis. (2010)
En este artículo, los embriones de pez cebra se utilizan para la detección de toxicidad química. La toxicidad química está correlacionada con lecturas de fenotipos. El protocolo de muestra muestra un enfoque metodológico de realizar el cribado de toxicidad química.
Protocol
1. Transferencia de la Biblioteca de Moléculas Pequeñas Aunque la transferencia compuesta se puede automatizar con métodos de transferencia robótica, describiremos el método de transferencia manual. Las bibliotecas de moléculas pequeñas se suministran típicamente en un formato de 96 pozos, con cada compuesto almacenado en DMSO como un stock de 10 mM. Unos 60 minutos antes de que los embriones lleguen a la etapa en la que se añadirán los compuestos, desconge…
Materials
| Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use. |
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| Drierite | W.A. HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH | ||
| 12-channel pipettes, 2-20 μL | Eppendorf | ||
| Aluminum sealing tape for 96-well plates | Nunc, Rochester, NY | ||
| DMSO | Sigma, St. Louis, MO | ||
| Basic incubator, 28.5°C | Fisher Scientific | ||
| Polystyrene 96-well round-bottom assay plates | Corning COSTAR; Lowell, MA | ||
| Stereomicroscope with transmitted light base | Leica Microsystems, Bannockburn, IL | ||
| E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthiocarbamide, Sigma; St. Louis, MO). | PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil. |
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Embryo-Based Chemical Toxicity Screen: Assessing Effects on Developing Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20179, doi: (2023).