배아 기반 화학 독성 화면: 제브라피시 배아 개발에 미치는 영향 평가
Published: April 30, 2023
Abstract
출처: 하오 J. 외., 대규모 얼룩말 피시 기반 생체 내 소분자 스크린. J. 비스 익스펙. (2010)
이 문서에서, 제브라피시 배아는 화학 독성 검사에 사용됩니다. 화학 독성은 표현형 판독과 상관관계가 있습니다. 샘플 프로토콜은 화학 독성 스크리닝을 수행하는 방법론적 접근법을 보여줍니다.
Protocol
1. 소분자 라이브러리의 이전 복합 전달은 로봇 전송 방법으로 자동화 할 수 있지만, 우리는 수동 전송 방법을 설명합니다. 소분자 라이브러리는 전형적으로 96-well 형식으로 공급되며, 각 화합물은 10mM 스톡으로 DMSO에 저장됩니다. 화합물을 첨가할 때 배아가 단계에 도달하기 약 60분 전에, 작은 분자의 알리쿼트(source plate)를 포함하는 96웰 플레이트의 원하?…
Materials
| Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use. |
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| Drierite | W.A. HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH | ||
| 12-channel pipettes, 2-20 μL | Eppendorf | ||
| Aluminum sealing tape for 96-well plates | Nunc, Rochester, NY | ||
| DMSO | Sigma, St. Louis, MO | ||
| Basic incubator, 28.5°C | Fisher Scientific | ||
| Polystyrene 96-well round-bottom assay plates | Corning COSTAR; Lowell, MA | ||
| Stereomicroscope with transmitted light base | Leica Microsystems, Bannockburn, IL | ||
| E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthiocarbamide, Sigma; St. Louis, MO). | PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil. |
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Embryo-Based Chemical Toxicity Screen: Assessing Effects on Developing Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20179, doi: (2023).