胚ベースの化学毒性スクリーン:ゼブラフィッシュ胚の発症に及ぼす影響の評価
Published: April 30, 2023
Abstract
出典:Hao J. ら, 大規模ゼブラフィッシュベースインビボ小分子スクリーン. J. ヴィス・エクス (2010)
本稿では、ゼブラフィッシュ胚を化学毒性スクリーニングに用いる。化学毒性は表現型の読み出しと相関する。サンプルプロトコルは、化学的毒性スクリーニングを行う方法論的アプローチを示す。
Protocol
1. 小分子ライブラリーの移動 ロボット搬送方式で化合物転送を自動化できますが、手動転送方法について説明します。 小分子ライブラリは通常96ウェル形式で供給され、各化合物は10 mMストックとしてDMSOに保存されます。化合物を添加する段階に達する胚の約60分前に、低分子のアリコートを含む所望の数の96ウェルプレート(ソースプレート)を解凍?…
Materials
| Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use. |
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| Drierite | W.A. HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH | ||
| 12-channel pipettes, 2-20 μL | Eppendorf | ||
| Aluminum sealing tape for 96-well plates | Nunc, Rochester, NY | ||
| DMSO | Sigma, St. Louis, MO | ||
| Basic incubator, 28.5°C | Fisher Scientific | ||
| Polystyrene 96-well round-bottom assay plates | Corning COSTAR; Lowell, MA | ||
| Stereomicroscope with transmitted light base | Leica Microsystems, Bannockburn, IL | ||
| E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthiocarbamide, Sigma; St. Louis, MO). | PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil. |
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Embryo-Based Chemical Toxicity Screen: Assessing Effects on Developing Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20179, doi: (2023).