מסך רעילות כימית המבוסס על עובר: הערכת השפעות על פיתוח עוברי זברה
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: האו J. ואח ‘, בקנה מידה גדול זברה על בסיס מסך מולקולה קטנה vivo. ג’יי ויס אקספ. (2010)
במאמר זה, עוברי זברה משמשים להקרנת רעילות כימית. רעילות כימית מתואמת עם קריאות פנוטיפ. פרוטוקול המדגם מראה גישה מתודולוגית של ביצוע ההקרנה רעילות כימית.
Protocol
1. העברת ספריית מולקולות קטנות בעוד העברה מורכבת יכולה להיות אוטומטית עם שיטות העברה רובוטית, נתאר את שיטת ההעברה הידנית. ספריות מולקולות קטנות מסופקות בדרך כלל בתבנית של 96 באר, כאשר כל תרכובת מאוחסנת ב- DMSO כמלאי של 10 מ”מ. כ -60 דקות לפני שהעוברים מגיעים לשלב שבו י…
Materials
| Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use. |
|||
| Drierite | W.A. HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH | ||
| 12-channel pipettes, 2-20 μL | Eppendorf | ||
| Aluminum sealing tape for 96-well plates | Nunc, Rochester, NY | ||
| DMSO | Sigma, St. Louis, MO | ||
| Basic incubator, 28.5°C | Fisher Scientific | ||
| Polystyrene 96-well round-bottom assay plates | Corning COSTAR; Lowell, MA | ||
| Stereomicroscope with transmitted light base | Leica Microsystems, Bannockburn, IL | ||
| E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthiocarbamide, Sigma; St. Louis, MO). | PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil. |
Bu Makaleden Alıntı Yapın
Embryo-Based Chemical Toxicity Screen: Assessing Effects on Developing Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20179, doi: (2023).