Embryo-Based Chemical Toxicity Screen: Assessing Effects on Developing Zebrafish Embryos
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Hao J. et al., Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen. J. Vis. (2010)
In diesem Artikel werden Zebrafischembryonen für das Screening chemischer Toxizität verwendet. Chemische Toxizität korreliert mit Phänotyp-Auslesungen. Das Probenprotokoll zeigt einen methodischen Ansatz bei der Durchführung des chemischen Toxizitätsscreenings.
Protocol
1. Übertragung der kleinen Molekülbibliothek Während die Compound-Übertragung mit Robotertransfermethoden automatisiert werden kann, beschreiben wir die manuelle Übertragungsmethode. Kleine Molekülbibliotheken werden in der Regel in einem 96-Well-Format geliefert, wobei jede Verbindung in DMSO als 10 mM-Bestand gespeichert wird. Etwa 60 Minuten, bevor die Embryonen das Stadium erreichen, in dem die Verbindungen zugesetzt werden sollen, tauen Sie eine gewünscht…
Materials
| Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use. |
|||
| Drierite | W.A. HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH | ||
| 12-channel pipettes, 2-20 μL | Eppendorf | ||
| Aluminum sealing tape for 96-well plates | Nunc, Rochester, NY | ||
| DMSO | Sigma, St. Louis, MO | ||
| Basic incubator, 28.5°C | Fisher Scientific | ||
| Polystyrene 96-well round-bottom assay plates | Corning COSTAR; Lowell, MA | ||
| Stereomicroscope with transmitted light base | Leica Microsystems, Bannockburn, IL | ||
| E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthiocarbamide, Sigma; St. Louis, MO). | PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil. |
Bu Makaleden Alıntı Yapın
Embryo-Based Chemical Toxicity Screen: Assessing Effects on Developing Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20179, doi: (2023).