Dépistage de la toxicité chimique à base d’embryons : Évaluation des effets sur le développement d’embryons de poisson zèbre
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Hao J. et coll., Grand Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen. J. Vis. Exp. (2010)
Dans cet article, les embryons de poisson zèbre sont utilisés pour le dépistage de la toxicité chimique. La toxicité chimique est corrélée avec les lectures de phénotype. Le protocole de l’échantillon montre une approche méthodologique de l’exécution du dépistage de la toxicité chimique.
Protocol
1. Transfert de la bibliothèque de petites molécules Bien que le transfert composé puisse être automatisé avec des méthodes de transfert robotiques, nous décrira la méthode de transfert manuel. Les bibliothèques de petites molécules sont généralement fournies dans un format de 96 puits, chaque composé étant stocké dans le DMSO sous forme de stock de 10 mM. Environ 60 minutes avant que les embryons n’atteignent le stade où les composés doivent être…
Materials
| Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use. |
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| Drierite | W.A. HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH | ||
| 12-channel pipettes, 2-20 μL | Eppendorf | ||
| Aluminum sealing tape for 96-well plates | Nunc, Rochester, NY | ||
| DMSO | Sigma, St. Louis, MO | ||
| Basic incubator, 28.5°C | Fisher Scientific | ||
| Polystyrene 96-well round-bottom assay plates | Corning COSTAR; Lowell, MA | ||
| Stereomicroscope with transmitted light base | Leica Microsystems, Bannockburn, IL | ||
| E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthiocarbamide, Sigma; St. Louis, MO). | PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil. |
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Embryo-Based Chemical Toxicity Screen: Assessing Effects on Developing Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20179, doi: (2023).