Embryo-gebaseerd chemisch toxiciteitsscherm: effecten op de ontwikkeling van zebravisembryo's beoordelen
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Hao J. et al., Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen. J.Vis. Exp. (2010)
In dit artikel worden zebravisembryo’s gebruikt voor het screenen van chemische toxiciteit. Chemische toxiciteit is gecorreleerd met fenotype-uitlezingen. Het monsterprotocol toont een methodologische benadering van het uitvoeren van de chemische toxiciteitsscreening.
Protocol
1. Overdracht van kleine molecuulbibliotheek Hoewel samengestelde overdracht kan worden geautomatiseerd met robotoverdrachtsmethoden, zullen we de handmatige overdrachtsmethode beschrijven. Kleine molecuulbibliotheken worden meestal geleverd in een 96-well formaat, waarbij elke verbinding wordt opgeslagen in DMSO als een voorraad van 10 mM. Ongeveer 60 minuten voordat de embryo’s het stadium bereiken waarop de verbindingen moeten worden toegevoegd, ontdooit u een gew…
Materials
| Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use. |
|||
| Drierite | W.A. HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH | ||
| 12-channel pipettes, 2-20 μL | Eppendorf | ||
| Aluminum sealing tape for 96-well plates | Nunc, Rochester, NY | ||
| DMSO | Sigma, St. Louis, MO | ||
| Basic incubator, 28.5°C | Fisher Scientific | ||
| Polystyrene 96-well round-bottom assay plates | Corning COSTAR; Lowell, MA | ||
| Stereomicroscope with transmitted light base | Leica Microsystems, Bannockburn, IL | ||
| E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthiocarbamide, Sigma; St. Louis, MO). | PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil. |
Bu Makaleden Alıntı Yapın
Embryo-Based Chemical Toxicity Screen: Assessing Effects on Developing Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20179, doi: (2023).