Обработка ног насекомых для флуоресценции микроскопии: метод сохранения нервно-мышечных структур для визуализации
Published: April 30, 2023
Abstract
Источник: Guan, W., et al. Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle. J. Vis. Exp. (2018).
Это видео описывает метод, чтобы вскрыть, исправить, и смонтировать drosophila взрослой ноги, сохраняя при этом его нейромускулатура нетронутыми для анализа изображений.
Protocol
Этот протокол является выдержкой из Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Вскрытие и фиксация ног Возьмите стеклянную пластину из нескольких колодцев и заполните соответствующее количество колодцев 70% этанолом. Добавьте 15-20 CO2…
Representative Results
Рисунок 1: Процедура установки ног на слайдах микроскопа. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Materials
| Ethanol absolute | Fisher | E/6550DF/17 | Absolute analytical reagent grade |
| nonionic surfactant detergent | Sigma-Aldrich | T8787 | Triton X-100, for molecular biology |
| Fine forceps | Sigma-Aldrich | F6521 | Jewelers forceps, Dumont No. 5 |
| Glass multi-well plate | Electron Microscopy Sciences | 71563-01 | 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm |
| PFA | Thermofisher | 28908 | Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free |
| Glycerol | Fisher BioReagents | BP 229-1 | Glycerol (Molecular Biology) |
| Spacers | Sun Jin Lab Co | IS006 | iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep |
| Square 22 mm x 22 mm coverslips | Fisher Scientific | FIS#12-541-B | No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick |
| Mounting Medium | Vector Laboratories | H-1000 | Vectashield Antifade Mounting Medium |
Bu Makaleden Alıntı Yapın
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).