Processando pernas de insetos para microscopia de fluorescência: um método para preservar estruturas neuromusculares para imagem

Published: April 30, 2023

Abstract

Fonte: Guan, W., et al. Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle. J. Vis. Exp. (2018).

Este vídeo descreve um método para dissecar, corrigir e montar a perna adulta Drosophila, preservando sua neuromusculatura intacta para análise de imagens.

Protocol

Este protocolo é um trecho de Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Dissecção e fixação de pernas Pegue uma placa de vidro multi-poço e encha o número apropriado de poços com 70% de etanol. Adicione moscas anestesizadas de 15 a20CO (de ambos os sexos e de qualquer idade) a cada poço e, usando um pincel, desabogue suavemente as moscas na solução de etanol até que as …

Representative Results

Figura 1: Procedimento para montar pernas em lâminas de microscópio. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Materials

Ethanol absolute Fisher E/6550DF/17 Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent Sigma-Aldrich T8787 Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps Sigma-Aldrich F6521 Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate Electron Microscopy Sciences 71563-01 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA Thermofisher 28908 Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol Fisher BioReagents BP 229-1 Glycerol (Molecular Biology)
Spacers Sun Jin Lab Co IS006 iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips Fisher Scientific FIS#12-541-B No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium Vector Laboratories H-1000 Vectashield Antifade Mounting Medium

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Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).

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