蛍光顕微鏡用昆虫脚の処理:イメージングのための神経筋構造を保存する方法
Published: April 30, 2023
Abstract
出典: Guan, W., ら . 大人のキューティクルを通して ショウジョウバエ 脚運動ニューロン軸索を視覚化. J. ヴィス・エクス (2018).
このビデオでは、画像分析のために神経筋をそのまま維持しながら、 ショウジョウバエ の成人脚を解剖、固定、および取り付ける方法について説明します。
Protocol
このプロトコルは、Guanらからの抜粋であり、成人キューティクルを通してショウジョウバエ脚運動ニューロン軸索を視覚化する、J.Vis. Exp. (2018). 1. レッグ解剖と固定 ガラスのマルチウェルプレートを取り、70%エタノールで適切な数の井戸を充填します。15~20CO2-麻酔ハエ(性別と年齢のいずれか)を各井戸に加え、ブラシを使用して、ハエ…
Representative Results
図1:顕微鏡スライドに脚を取り付ける手順。この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
Materials
| Ethanol absolute | Fisher | E/6550DF/17 | Absolute analytical reagent grade |
| nonionic surfactant detergent | Sigma-Aldrich | T8787 | Triton X-100, for molecular biology |
| Fine forceps | Sigma-Aldrich | F6521 | Jewelers forceps, Dumont No. 5 |
| Glass multi-well plate | Electron Microscopy Sciences | 71563-01 | 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm |
| PFA | Thermofisher | 28908 | Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free |
| Glycerol | Fisher BioReagents | BP 229-1 | Glycerol (Molecular Biology) |
| Spacers | Sun Jin Lab Co | IS006 | iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep |
| Square 22 mm x 22 mm coverslips | Fisher Scientific | FIS#12-541-B | No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick |
| Mounting Medium | Vector Laboratories | H-1000 | Vectashield Antifade Mounting Medium |
Bu Makaleden Alıntı Yapın
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).