Verarbeitung von Insektenbeinen für die Fluoreszenzmikroskopie: Eine Methode zur Erhaltung neuromuskulärer Strukturen für die Bildgebung
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Guan, W., et al. Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle. J. Vis. (2018).
Dieses Video beschreibt eine Methode, um das Drosophila Erwachsenenbein zu sezieren, zu fixieren und zu montieren, während seine Neuromuskulatur für die bildgebende Analyse intakt bleibt.
Protocol
Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Beinsektion und Fixierung Nehmen Sie eine Glas-Multi-Well-Platte und füllen Sie die entsprechende Anzahl von Brunnen mit 70% Ethanol. Fügen Sie 15–20 CO2-anästhetisierte Fliegen (entweder Geschlecht und jedes Alter) zu jedem Brunnen hinzu und mit einem Pinsel die Fliegen vorsichtig in die Ethanollösung zu tapp…
Representative Results
Abbildung 1: Verfahren zum Befestigen von Beinen auf Mikroskopschlitten. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Materials
| Ethanol absolute | Fisher | E/6550DF/17 | Absolute analytical reagent grade |
| nonionic surfactant detergent | Sigma-Aldrich | T8787 | Triton X-100, for molecular biology |
| Fine forceps | Sigma-Aldrich | F6521 | Jewelers forceps, Dumont No. 5 |
| Glass multi-well plate | Electron Microscopy Sciences | 71563-01 | 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm |
| PFA | Thermofisher | 28908 | Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free |
| Glycerol | Fisher BioReagents | BP 229-1 | Glycerol (Molecular Biology) |
| Spacers | Sun Jin Lab Co | IS006 | iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep |
| Square 22 mm x 22 mm coverslips | Fisher Scientific | FIS#12-541-B | No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick |
| Mounting Medium | Vector Laboratories | H-1000 | Vectashield Antifade Mounting Medium |
Bu Makaleden Alıntı Yapın
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).