Dissection larvaire des glandes lymphatiques : isoler l’organe producteur d’hémocytes de Drosophila
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Reimels, T. A. et Pfleger, C.M. Méthodes d’examen de la glande lymphatique et des hémocytes chez les larves de Drosophila. J. Vis. Exp. (2016).
Cette vidéo décrit la glande lymphatique de Drosophila — le site principal de l’hématopoïèse dans la larve volante — et montre un protocole d’exemple pour disséquer et monter l’organe pour l’immunohistochimie et l’imagerie fluorescente.
Protocol
Ce protocole est un extrait de Reimels et Pfleger, Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2016). 1. Immunohistochimie larvaire de glande lymphatique REMARQUE: La glande lymphatique est située à environ un tiers de longueur de l’extrémité antérieure d’une larve légèrement en dessous du cerveau sur le côté dorsal. (Voir flèche dans la figure 1…
Representative Results
Figure 1 : Mélanisation in vivo des cellules cristallines. A) Les larves ont été placées individuellement dans des tubes PCR avant le chauffage. Les flèches rouges indiquent les larves qui ne sont pas au fond des tubes. B) Un modèle typique de mélanine de cellules cristallines après chauffage, qui révèle parfois la glande lymphatique (flèche ; côté dorsal montré, l?…
Materials
| PBS tablets | MP Biomedicals | 2810305 | |
| dissecting dish | Corning | 7220-85 | |
| microcentrifuge tube | Denville | C2170 | |
| silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit | Krayden (distributed through Fisher) | NC9644388 (Fisher catalog number) | Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions. |
| stereomicroscope | Morrell Instruments (Nikon distributor) | mna42000, mma36300 | Nikon models SMZ1000 and SMZ645 |
| tissue wipe | VWR | 82003-820 | |
| forceps | Electron Microscopy Sciences | 72700-DZ | |
| p200 pipette | Eppendorf | 3120000054 | |
| formaldehyde | Fisher | BP531-500 | |
| Triton | Fisher | BP151-500 | |
| Tween 20 | Fisher | BP337-500 | |
| bovine serum albumin | Rocky Mountain Biologicals | BSA-BSH-01K | |
| normal goat serum | Sigma | G9023-10ML | |
| normal donkey serum | Sigma | D9663-10ML | |
| 200 proof ethanol | VWR | V1001 | |
| N-propyl gallate | MP Biomedicals | 102747 | |
| glycerol | VWR | EM-4750 | |
| DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) | Fisher | 62248 | |
| microscope cover glass, 18 mm circular | Fisher | 12-545-100 | |
| glass microscope slides | Fisher | 22-034-980 | |
| 24-well plate | Corning | 351147 | |
| disposable transfer pipet | Fisher | 13-711-9AM | |
| fluorescence microscope | Zeiss | Axio Imager.Z1 |
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Larval Lymph Gland Dissection: Isolating the Drosophila Hemocyte-Producing Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20117, doi: (2023).