Dissection larvaire des glandes lymphatiques : isoler l’organe producteur d’hémocytes de Drosophila

Published: April 30, 2023

Abstract

Source : Reimels, T. A. et Pfleger, C.M. Méthodes d’examen de la glande lymphatique et des hémocytes chez les larves de Drosophila. J. Vis. Exp. (2016).

Cette vidéo décrit la glande lymphatique de Drosophila — le site principal de l’hématopoïèse dans la larve volante — et montre un protocole d’exemple pour disséquer et monter l’organe pour l’immunohistochimie et l’imagerie fluorescente.

Protocol

Ce protocole est un extrait de Reimels et Pfleger, Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2016). 1. Immunohistochimie larvaire de glande lymphatique REMARQUE: La glande lymphatique est située à environ un tiers de longueur de l’extrémité antérieure d’une larve légèrement en dessous du cerveau sur le côté dorsal. (Voir flèche dans la figure 1…

Representative Results

Figure 1 : Mélanisation in vivo des cellules cristallines. A) Les larves ont été placées individuellement dans des tubes PCR avant le chauffage. Les flèches rouges indiquent les larves qui ne sont pas au fond des tubes. B) Un modèle typique de mélanine de cellules cristallines après chauffage, qui révèle parfois la glande lymphatique (flèche ; côté dorsal montré, l?…

Materials

PBS tablets MP Biomedicals 2810305
dissecting dish Corning 7220-85
microcentrifuge tube Denville C2170
silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit Krayden (distributed through Fisher) NC9644388 (Fisher catalog number) Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions.
stereomicroscope Morrell Instruments (Nikon distributor) mna42000, mma36300 Nikon models SMZ1000 and SMZ645
tissue wipe VWR 82003-820
forceps Electron Microscopy Sciences 72700-DZ
p200 pipette Eppendorf 3120000054
formaldehyde Fisher BP531-500
Triton Fisher BP151-500
Tween 20 Fisher BP337-500
bovine serum albumin Rocky Mountain Biologicals BSA-BSH-01K
normal goat serum Sigma G9023-10ML
normal donkey serum Sigma D9663-10ML
200 proof ethanol VWR V1001
N-propyl gallate MP Biomedicals 102747
glycerol VWR EM-4750
DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) Fisher 62248
microscope cover glass, 18 mm circular Fisher 12-545-100
glass microscope slides Fisher 22-034-980
24-well plate Corning 351147
disposable transfer pipet Fisher 13-711-9AM
fluorescence microscope Zeiss Axio Imager.Z1

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Larval Lymph Gland Dissection: Isolating the Drosophila Hemocyte-Producing Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20117, doi: (2023).

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