Larvale lymfklierdissectie: het isoleren van het Drosophila Hemocyt-producerende orgaan

Published: April 30, 2023

Abstract

Bron: Reimels, T. A. en Pfleger, C.M. Methoden om de lymfklier en hemocyten in drosophilalarven te onderzoeken. J.Vis. Exp. (2016).

Deze video beschrijft de Drosophila-lymfklier – de primaire plaats van hematopoiese in de vlieglarve – en toont een voorbeeldprotocol om het orgaan te ontleden en te monteren voor immunohistochmie en fluorescerende beeldvorming.

Protocol

Dit protocol is een fragment uit Reimels en Pfleger, Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2016). 1. Larvale Lymfklier Immunohistochie OPMERKING: De lymfeklier bevindt zich ongeveer een derde lengte van het voorste uiteinde van een larve iets onder de hersenen aan de dorsale kant. (Zie pijl in figuur 1B.) De lymfeklier flankeert…

Representative Results

Figuur 1: In Vivo Crystal Cell Melanisatie. A) Larven werden vóór het verwarmen afzonderlijk in PCR-buizen geplaatst. Rode pijlen wijzen op larven die zich niet aan de onderkant van de buizen bevinden. B) Een typisch kristalcelmelanisatiepatroon na verhitting, dat soms de lymfeklier onthult (pijl; dorsale kant getoond, voorste is links). Schaalbalk staat voor 1 mm. <a href="htt…

Materials

PBS tablets MP Biomedicals 2810305
dissecting dish Corning 7220-85
microcentrifuge tube Denville C2170
silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit Krayden (distributed through Fisher) NC9644388 (Fisher catalog number) Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions.
stereomicroscope Morrell Instruments (Nikon distributor) mna42000, mma36300 Nikon models SMZ1000 and SMZ645
tissue wipe VWR 82003-820
forceps Electron Microscopy Sciences 72700-DZ
p200 pipette Eppendorf 3120000054
formaldehyde Fisher BP531-500
Triton Fisher BP151-500
Tween 20 Fisher BP337-500
bovine serum albumin Rocky Mountain Biologicals BSA-BSH-01K
normal goat serum Sigma G9023-10ML
normal donkey serum Sigma D9663-10ML
200 proof ethanol VWR V1001
N-propyl gallate MP Biomedicals 102747
glycerol VWR EM-4750
DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) Fisher 62248
microscope cover glass, 18 mm circular Fisher 12-545-100
glass microscope slides Fisher 22-034-980
24-well plate Corning 351147
disposable transfer pipet Fisher 13-711-9AM
fluorescence microscope Zeiss Axio Imager.Z1

Play Video

Bu Makaleden Alıntı Yapın
Larval Lymph Gland Dissection: Isolating the Drosophila Hemocyte-Producing Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20117, doi: (2023).

View Video