Microiniezione di cellule infermiere Drosophila: un metodo di consegna intracellulare
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Catrina, I. E., et al. J. Vis. Exp. (2019).
A causa delle loro grandi dimensioni e dell’organizzazione relativamente semplice, le cellule infermiere Drosophila sono ideali per gli studi di imaging di cellule vive. Questo video descrive un metodo di microiniezione per la consegna di composti esogeni nelle cellule, e il protocollo in primo piano dimostra la procedura con sonde oligonucleotidi fluorescenti chiamate fari molecolari (MB) utilizzati per visualizzare trascrizioni di mRNA endogeno.
Protocol
Questo protocollo è tratto da Catrina et al., Visualizzando e monitorando mRNA endogeni in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers, J. Vis. Exp. (2019). 1. Progettazione di MB per l’imaging di cellule vive Piegare la sequenza di RNA di destinazione per prevedere la struttura secondaria della destinazione dell’mRNA utilizzando la “forma RNA” dal server mfold (<a href="http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form" target="_bla…
Materials
| Spectrofluorometer | Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon | n/a | Photon counting spectrofluorometer |
| Quartz cuvette | Fireflysci (former Precision Cells Inc.) | 701MFL | |
| Dumont #5 tweezer | World Precision Instruments | 501985 | Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers |
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | |
| Cover slip No.1 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-048 | |
| Dissecting microscope | Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| CO2 fruit fly anesthesia pad | Genesee Scienific | 59-114 | |
| Tris-HCL pH 7.5 | Sigma-Aldrich | 1185-53-1 | |
| Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | 7791-18-6 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | |
| Spinning disc confocal microscope | Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera | Hamamatsu | n/a | |
| PatchMan NP 2 Micromanipulator | Eppendorf Inc. | 920000037 | |
| FemtoJet Microinjector | Eppendorf Inc. | 920010504 | |
| Injection needle: Femtotips II | Eppendorf Inc. | 930000043 | |
| Loading tip: 20 μL Microloader | Eppendorf Inc. | 930001007 | |
| Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-026; 48393-172 | |
| Dry yeast | Any grocery store | n/a | |
| Computer, > 20 GB RAM | Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing |
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Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).