دروسوفيلا تقاطع العصبية والعضلية (NMJ) القياس الكمي: طريقة لتقييم مورفولوجيا متشابك ووظيفة
Published: April 30, 2023
Abstract
المصدر: كاستيلس-نوسبو، أ. وآخرون، خوارزميتان للقياس الكمي عالي الإنتاجية ومتعدد البارامترية لمورفولوجيا تقاطع الأعصاب والعضلية Drosophila. ج. فيس إكسب. (2017).
يتم استخدام التقاطع العصبي العضلي Drosophila (NMJ) كنموذج لدراسة مورفولوجيا ووظيفة نقاط الاشتباك العصبي. يصف هذا الفيديو السمات الهامة التي يحددها الباحثون لتوصيف NMJ. يوضح بروتوكول المثال برنامجا قادرا على إجراء القياس الكمي تلقائيا.
Protocol
هذا البروتوكول هو مقتطف من Castells-Nobau وآخرون. (2017). 1. متطلبات قبل معالجة الصور قم بإجراء تحضيرات كتاب Drosophila المفتوحة ليرقات التجول في النجوم الثالثة (L3) ، كما هو موضح سابقا. المشتركة المناعية Drosophila محطات NMJ باستخدام مزيج من علامتين: DLG-1 أو هرب …
Representative Results
الشكل 1: أمثلة على نتائج تجزئة الماكرو غير الملائمة. نتائج الصور بعد تشغيل”Drosophila NMJ مورفومترس” أو”Drosophila NMJ بوتون مورفومترس”. لا يتم تضمين أجزاء من محطة متشابك في المخطط الأصفر (A). يتم تضمين أجزاء من الخلفية في محطة متشا?…
Materials
| Immunostaining | Dilution | ||
| Mouse anti-discs large 1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | AFFN-DLG1-4D6 | 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Rabbit anti-horseradish peroxidase | Jackson IR | 323-005-021 | 1/500 |
| Rabbit anti-Synaptotagmin | Gift from Hugo Bellen | Jan-00 | |
| Mouse anti-Cysteine string protein | Developmental Studies Hybridoma Bank | DCSP-1(ab49) | 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Mouse anti-Bruchpilot | Developmental Studies Hybridoma Bank | nc82 | Jan-50 |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Life technologies | A11029 | 1/200 |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 | Life technologies | A11011 | 1/500 |
| Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit | ThermoFisher | Z25006 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | ThermoFisher | P36930 | |
| Equipment | |||
| Confocal microscope or fluorescence microscope | Leica SP5 | ||
| Zeiss Axio imager | |||
| Computer | Mac or Pc | ||
| Software | |||
| FIJI |
Bu Makaleden Alıntı Yapın
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).