Özet

剖析器官的成年斑马鱼

Published: March 04, 2010
doi:

Özet

本协议描述了识别和解剖成年斑马鱼的器官的过程。

Abstract

在过去的20年中,斑马鱼已成为一个强大的模式生物,为了解脊椎动物的发育和疾病。虽然是广泛的胚胎和幼虫的实验分析和形态一直都有详细记载,成年斑马鱼的解剖和发展成人的结构和器官的研究说明,连同与成人工作的技术,所缺乏的。幼虫机关接受在其整体结构,形态,解剖位置,并在向成年过渡的幼虫的重大变化。从外部看,透明的幼虫发展其特点成人条纹色素模式和配对腹鳍,而在内部,机关经过大量增长和重塑。此外,bipotential性腺原基发展成为无论是睾丸或卵巢。该协议确定成人的许多器官和演示脑,性腺,肠胃系统,心脏,和成年斑马鱼的肾脏解剖的方法。可用于原位杂交,分子生物学技术,组织学,免疫组织化学法提取RNA,蛋白质分析,和其他解剖器官。该协议将有助于在斑马鱼在扩大研究范围,包括幼虫器官的重塑,成人器官系统的成年和其他调查机关的具体形态发生。

Protocol

将一只雄性斑马鱼解剖第一,其次是雌鱼。开始剥离之前,麻醉在0.2%Tricaine的鱼,然后安乐死在冰水中的潜伏期为15分钟。 首先,轻轻拍着干纸巾上的鱼放在解剖垫。对外,斑马鱼有单一的背鳍,尾鳍和臀鳍和成对的胸鳍和腹鳍(图1)。 图1。成人男性标有鳍鱼类。 引脚通过解剖垫鱼尾巴的肉质部分和眼圈腹侧部分。 剪断腹鱼的臀鳍前的皮肤。剪切沿着腹部的皮肤和下面的肌肉从臀鳍到鳃盖(硬覆盖在鳃)(图2,第1步)。 图2,在去除皮肤和体壁肌肉暴露内部器官的步骤。 接下来,删除的鳃盖和胸鳍,包括肩带(厚,鳍基骨的区域)(图2,第2步)。切沿一侧的鱼,从现在暴露的鳃后部皮肤及以上潜在的肌肉开始又回落到臀鳍(图2,第3步)。 小心取出从一侧的鱼的皮肤和下面的肌肉。现在许多内部器官可见(图3)。 图3。成年雄鱼体壁肌肉除去,使机关内部的可视化。 睾丸长,白色,配对,连接到背体壁机关。取出睾丸和地方菜的PBS。反射光检查睾丸曲细精管(图4),其中包含各个阶段发展spermatagonia到精子的生殖细胞囊肿(莱亚尔等,2009)可视化。 图4。睾丸解剖。白色圆形的结构,曲细精管。 下一步,清除肠胃系统从鱼的体腔。规模大,叶状形态,tannish颜色,和广泛的血管,肝脏,可确定。胆囊,一个绿色的半透明的充满液体的囊,脾,出现鲜红色,内脏内被发现。 从其他机关单独小肠和伸展出来。高度上皮褶皱(Wallace等人,2005年)的前,中,后肠道内的地区被定义。 将一块在PBS肠道和使用透射光观察上皮褶皱。 接下来,检查的鱼鳔。鳔后房型通过气动管,和前房通过韦伯器具(芬尼等人,2006年),它是连接到内耳,它是连接到食道。 删除和丢弃的鱼鳔。不固定的鱼,并重新针它的腹侧方解剖肾,这是位于沿背侧体壁。肾脏是一种半透明的粉红色的结构与背主动脉和色素细胞相关。肾脏分为头部,身体和尾部区域(图5)。解剖出一块肾脏和地方的PBS。梳理除了肾组织透露肾小管。 图5。头部,身体和尾部沿肾脏背侧体壁的位置。 解剖雌鱼。如前所述,安乐死在冰水中的鱼和寄托解剖垫之前,帕特干燥。正如先前所表现出的鱼从一侧取出皮肤。卵巢是一个bilobed结构,悬浮体腔血管卵巢系膜。 取出卵巢叶,在PBS的地方,并与透射光检查。卵母细胞可以被戏弄除了使用细针,然后上演(图6中,塞尔曼等,1993年)。舞台上我的卵母细胞大约有10 – 150微米的大小和半透明。第二阶段的卵母细胞约150 – 350微米大小和皮质颗粒的外观定义。第三阶段卵母细胞有350 – 750微米大小,由于卵黄的积累,是不透明的。成熟阶段IV和V的卵母细胞是半透明的,一般不会在最近交配的女性卵巢中发现。 图6现场舞台下观察我,二,三卵母细胞。解剖显微镜透射光。 接下来,解剖鱼的心脏。心脏位于鳃后,腹。首先切出心脏和周围组织,并把它在PBS。仔细剖析了心脏周围的组织,小心不要损伤娇嫩的心房。 将解剖林格氏液,观察心脏跳动的心脏。 确定的心房,心室和bulbus动脉(图7,胡锦涛等,2001)。 图7。解剖成人心脏。 完成去除鱼的大脑解剖。 unpinning鱼,用刀片去除头部开始。尽可能从取出的头骨与腹侧方钳尽可能多的软组织。取出的眼睛,用小弹簧剪刀。破开的头骨和消除大脑的腹侧骨。现在放置在头菜的PBS和消除大脑背侧皮肤和头骨。 确定的嗅球,端脑,缰,视神经顶盖,小脑和延髓(图8,Wullimann等,1996;席林,2002)。 图8。成年斑马鱼的大脑解剖。背视图,前顶。

Açıklamalar

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

这项工作是由美国国立卫生研究院授予R01 HD050901 MCM和美国癌症协会博士后奖学金#PF – 05 – 041 – 01 – DDC到TG的支持。

Materials

Reagents:

0.2% Tricaine (ethyl 3-aminobenzoate)
200 mg tricaine powder
97.9 ml DD water
~1 ml 1 M Tris (pH 9)
Adjust pH to 7.0

Phosphate buffered saline (PBS)
4.0 g NaCl
0.1 g KCl
100 ml 0.1 M PO4 Buffer, pH 7.3
150 ml dH2O

Ringer’s solution
6.7g NaCl
0.2g KCl
0.2g CaCl2
1.2g Hepes
1 L H2O
Adjust pH to 7.2

Equipment:

Dissecting dish with mat
Electron Microscopy Sciences
catalog #70540

Vannas spring scissors
Fine Science Tools
catalog #91500-09

Referanslar

  1. Finney, J. L., Robertson, G. N., McGee, C. A., Smith, F. M., Croll, R. P. Structure and Autonomic Innervation of the Swim Bladder in the Zebrafish (Danio rerio). J Comp Neurol. 495, 587-606 (2006).
  2. Hu, N., Yost, H. J., Clark, E. B. Cardiac morphology and blood pressure in the adult zebrafish. Anat Rec. 264, 1-12 (2001).
  3. Leal, M. C., Cardoso, E. R., Nóbrega, R. H., Batlouni, S. R., Bogerd, J., França, L. R., Schulz, R. W. Histological and stereological evaluation of zebrafish (Danio rerio) spermatogenesis with an emphasis on spermatogonial generations. Biol Reprod. 81, 177-187 (2009).
  4. Schilling, T. F., Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. The morphology of larval and adult zebrafish. Zebrafish: A Practical Approach (The Practical Approach Series). , (2002).
  5. Selman, K., Wallace, R., Sarka, A., Qi, X. Stages of oocyte development in the Zebrafish, Brachydanio rerio. J. Morphol. 218, 203-224 (1993).
  6. Wallace, K. N., Akhter, S., Smith, E. M., Lorent, K., Pack, M. Intestinal growth and differentiation in zebrafish. Mech Dev. 122, 157-173 (2005).
  7. Wullimann, M. F., Rupp, B., Reichert, H. . Neuroanatomy of the zebrafish brain : a topological atlas. , (1996).

Play Video

Bu Makaleden Alıntı Yapın
Gupta, T., Mullins, M. C. Dissection of Organs from the Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (37), e1717, doi:10.3791/1717 (2010).

View Video