Depois da glicólise em eucariotos, as moléculas de piruvato carregadas entram na mitocôndria via transporte ativo e submetem-se a três reações enzimáticas. O processo é catalisado por um complexo, o complexo piruvato desidrogenase, composto por três enzimas. Na primeira etapa, o grupo carboxilo é removido do piruvato e liberado como dióxido de carbono.A molécula despojada é então oxidada em um grupo acetila e os eletrões liberados são então apanhados pelo NAD mais para formar o NADH. Finalmente, o grupo acetila é transferido para a coenzima A onde se liga ao átomo de enxofre para criar acetil coenzima A ou acetil CoA, que se move para o ciclo do ácido cítrico para ser ainda mais oxidada.