Elettroporazione di micobatteri
Summary
Strategie di micobatteri patogeni sono ancora limitate. Il tasso di crescita lenta della maggior parte delle specie, la natura impervia della parete cellulare, ed i pericoli di lavorare con agenti patogeni rendono micobatteri difficili da studiare e sono in gran parte responsabili della nostra scarsa conoscenza di questi organismi. In questo video viene mostrata la tecnica di elettroporazione, che coinvolge le cellule sottoporre ad un breve impulso elettrico ad alta per consentire l'ingresso di DNA. E 'il metodo più usato per introdurre il DNA nelle cellule dei micobatteri.
Abstract
Trasformazione ad alta efficienza è una limitazione importante nello studio dei micobatteri. Il Mycobacterium genere può essere difficile da trasformare, questo è principalmente causato dalla parete cellulare spessa e cerosa, ma è aggravata dal fatto che la maggior parte delle tecniche molecolari sono state sviluppate per le specie lontanamente imparentati tra loro come Escherichia coli e Bacillus subtilis. Nonostante questi ostacoli, i plasmidi micobatteri sono stati identificati e la trasformazione del DNA di molte specie di micobatteri sono stati descritti. Il metodo più efficace per l'introduzione di DNA in micobatteri è elettroporazione. Molti parametri contribuiscono alla trasformazione di successo: queste includono la specie / ceppo, la natura del DNA trasformazione, il marcatore utilizzato, il mezzo di crescita, e le condizioni per l'impulso di elettroporazione. Metodi ottimizzato per la trasformazione di entrambi lenta e veloce-coltivatore sono disponibili a questo link. Efficienze di trasformazione per le diverse specie di micobatteri e con diversi marcatori selezionabili sono segnalati.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
