Presentiamo un protocollo per utilizzare montature stampate in 3D per fissare i nuclei di incremento sul campo senza la necessità di disimballarli e incollarli su supporti di legno. Il nuovo supporto GSC consente di posizionare i nuclei in un microtomo per tagliarne la superficie e trasferirli direttamente all’acquisizione di immagini digitali.
Qui presentiamo un nuovo flusso di lavoro che va dal prelievo di carote di accrescimento sul campo, allo stoccaggio e al trasporto in laboratorio, alla digitalizzazione degli anelli degli alberi per ulteriori analisi per le successive analisi dendroecologiche. La procedura prevede l’uso di nuovi portacampioni per i nuclei di incremento. Questi nuovi supporti Gärtner Schneider Core (GSC) sono progettati utilizzando un software di modellazione tridimensionale (3D) e infine stampati con una stampante 3D. Utilizzando queste montature fin dall’inizio sul campo, le carote possono essere tagliate direttamente con un microtomo e la loro superficie può quindi essere digitalizzata senza ulteriori riarrangiamenti utilizzando un nuovo sistema di acquisizione delle immagini ad alta risoluzione. Sono quindi disponibili per l’analisi diretta. Questo sistema consente di digitalizzare gli anelli degli alberi da carote e dischi, e anche di acquisire immagini da lunghe micro sezioni (fino a 40 cm) utilizzando la luce trasmessa. Questa caratteristica è di particolare interesse per le applicazioni dendroecologiche e geomorfiche per identificare l’insorgenza di qualsiasi disturbo in micro sezioni tagliate con un nucleo-microtomo.
Il principio di datare gli anelli degli alberi applicando la tecnica della datazione incrociata è stato introdotto per la prima volta dallo scienziato forestale austriaco Arthur Freiherr von Seckendorff-Gudent nel 18811. Nella prima metà del XXsecolo, questa tecnica è stata reinventata dal “Padre della Dendrocronologia” Andrew Ellicott Douglass, che l’ha applicata intensamente nella datazione di siti archeologici e alberi viventi2.
Al giorno d’oggi, la dendroecologia, l’argomento di ricerca che funge da cornice ambientale della dendrocronologia, è definita come lo studio degli anelli degli alberi e delle loro variazioni di crescita intrinseche causate da cambiamenti ecologici e ambientali nel tempo3. Nella ricerca dendroecologica, molte altre caratteristiche oltre alle variazioni di larghezza dell’anello, come gli isotopi stabili, la densità tardiva del legno o le caratteristiche delle cellule all’interno dei singoli anelli, vengono utilizzate per correlare questi dati ai parametri ambientali per comprendere meglio l’impatto delle condizioni ambientali sulla crescita degli alberi nel tempo4. Attraverso la continua integrazione degli studi anatomici del legno alla ricerca dendroecologica, la ricerca dendroecologica si è evoluta nell’ultimo decennio ed è più che mai una spina dorsale nella ricostruzione delle condizioni climatiche del passato 5,6,7,8.
Sebbene lo sviluppo tecnico per quanto riguarda la preparazione e l’analisi dei campioni, in particolare nell’anatomia del legno, sia stato forte nell’ultimo decennio 9,10,11,12,13,14, non c’è stato quasi nessun progresso reale per quanto riguarda la semplificazione delle tecniche di campionamento15. Nonostante, ad esempio, la tecnologia delle onde acustiche16, fino ad oggi non esiste un metodo “non distruttivo” affidabile per estrarre le caratteristiche degli anelli dagli alberi.
Di conseguenza, tutti gli studi relativi agli anelli degli alberi si basano ancora su campioni di legno prelevati da alberi o arbusti prelevati nei siti di interesse. Quando ci si concentra sugli alberi, la procedura standard consiste nel prelevare i nuclei di incremento dagli steli15.
Il prelievo di carote utilizzando carotaggi incrementali è spesso indicato come una tecnica “non distruttiva”17. Rispetto al prelievo di dischi dagli steli, questo è corretto; Tuttavia, questa tecnica di campionamento provoca un foro nello stelo di circa 1 cm di diametro, che per lo più supera il midollo dello stelo3. L’albero è in grado di chiudere questa ferita da solo, ma questo processo provoca reazioni di crescita, alterando la struttura comune nelle immediate vicinanze della ferita così come uno scolorimento più o meno intenso del legno esistente intorno al foro a causa di malattie fungine18,19. Quindi, dovrebbe essere meglio chiamato “minimamente invasivo” piuttosto che “non distruttivo”.
La tecnica di prelievo delle carote incrementali si è evoluta di recente grazie alla possibilità di utilizzare frese meccaniche, ottenendo campioni di qualità superiore, soprattutto per le analisi anatomiche del legno15. Questa procedura consente anche di risparmiare molto tempo sul campo rispetto al carotaggio manuale. Ciò che è rimasto invariato è stata la procedura di manipolazione delle carote, a partire dall’estrazione dall’albero fino all’etichettatura, allo stoccaggio per il trasporto e alla preparazione in laboratorio per le varie tecniche di analisi possibili.
Le anime devono ancora essere imballate in contenitori stabili, come cannucce di plastica o carta, per evitare che si rompano durante il trasporto. L’etichettatura dei torsoli viene eseguita direttamente sul torsolo utilizzando matite morbide o (più frequentemente) all’esterno di ogni cannuccia. Quando si utilizzano contenitori di plastica, i torsoli devono essere estratti dopo poco tempo per evitare la diffusione di funghi. Quindi, i nuclei devono essere estratti nuovamente dai contenitori. Per stabilizzare le anime ed evitare che si pieghino quando iniziano ad asciugarsi, le anime devono essere fissate su un supporto. Questo aiuta anche con la successiva preparazione della superficie per ulteriori analisi. In questo caso, le etichette devono essere trasferite anche alle rispettive montature. Una procedura standard consiste nell’incollare le anime su supporti di legno o fissarle con del nastro adesivo nelle fessure dei pannelli ondulati. Incollarli su supporti in legno è la tecnica più utilizzata. Sebbene questa procedura sia perfetta per stabilizzare e levigare o tagliare le anime, presenta diversi svantaggi per quanto riguarda le potenziali analisi chimiche, isotopiche e persino anatomiche del legno. Un altro svantaggio, nonostante il tempo richiesto, è il trasferimento soggetto a errori delle etichette per ogni anima alle nuove montature.
In dendrocronologia, le misurazioni della larghezza dell’anello come base per una datazione accurata sono la spina dorsale di tutti gli studi dendroecologici20. Sebbene molti laboratori si affidino ancora a misurazioni manuali utilizzando tabelle di misurazione, ad esempio Lintab21 con binocolo collegato, c’è una tendenza all’utilizzo di scanner piani per digitalizzare le superfici dei nuclei e misurare la larghezza dell’anello utilizzando software come CooRecorder22 o WinDENDRO23. Sfortunatamente, questi scanner, ad esempio l’ampiamente utilizzato Epson Expression 10000XL, non hanno una risoluzione sufficiente per rappresentare chiaramente strutture come tracheidi di legno antico o tardivo (Figura 1). Per questo motivo, le immagini risultanti non sono adatte a riconoscere strutture difficili come anelli molto stretti o fluttuazioni di densità, che sono fondamentali per un’accurata procedura di datazione incrociata senza risalire ai nuclei originali utilizzando il binocolo24,25.
Poiché un’elevata risoluzione delle immagini è un presupposto indispensabile per un’adeguata analisi delle immagini nella scienza degli anelli di accrescimento degli alberi10, presso il WSL (Skippy; https://www.wsl.ch/en/services-produkte/skippy/) è stato sviluppato un nuovo sistema di acquisizione delle immagini per digitalizzare gli anelli di accrescimento delle superfici dei carotaggi con l’ausilio di una fotocamera digitale, in modo che le immagini presentino una risoluzione più elevata rispetto a tutti gli scanner piani esistenti. Questo sistema si basava sull’idea del sistema ATRICS26, sviluppato nel 2007. Più recentemente, un sistema di acquisizione delle immagini semplice ma efficiente paragonabile allo Skippy è stato presentato come kit di autoassemblaggio27.
La digitalizzazione degli anelli degli alberi, ovvero l’acquisizione di immagini in luce riflessa, è un passo importante nella creazione di immagini ad alta risoluzione di nuclei o dischi di incremento per supportare una misurazione digitale della larghezza dell’anello efficiente in termini di tempo. Il sistema sviluppato dal WSL consente anche di acquisire immagini da lunghe micro sezioni (fino a 40 cm) utilizzando la luce trasmessa. Questa caratteristica aggiuntiva è, ad esempio, di interesse per le applicazioni dendrogeomorfiche per identificare l’insorgenza del legno di reazione in micro sezioni.
Nello studio, presentiamo un protocollo per facilitare il processo di manipolazione dei nuclei sul campo e in laboratorio. La base della nuova tecnica presentata è una montatura riutilizzabile; il nuovo supportoGSC G ärtnerSchneiderCore (GSC) progettato utilizzando un software di modellazione 3D e stampato con una stampante 3D. Il supporto GSC consente una gestione semplice delle anime prelevate sul campo senza doverli reimballare o rietichettare. Presentiamo anche un nuovo efficiente sistema per la digitalizzazione delle superfici preparate delle carote. Questo protocollo copre l’intera procedura, dal prelievo delle carote sul campo alla preparazione del campione, dalla digitalizzazione delle superfici delle carote per le analisi successive e infine alla loro conservazione in un archivio.
L’inclusione dell’anatomia del legno negli studi dendroecologici ha ampiamente aperto questi studi a nuove e approfondite analisi delle condizioni ambientali del passato 28,29,30. Queste nuove tecniche hanno anche intensificato gli sforzi analitici, ovvero il tempo di laboratorio necessario per generare i dati di interesse. Ci sono stati numerosi tentativi di ottimizzare il lavoro di laboratorio e di ridurre il tempo necessario in laboratorio per quanto riguarda le tecniche anatomiche del legno 9,12,13,15,30. Ma quasi nessuno sforzo è stato fatto per facilitare la procedura comune di manipolazione, preparazione e conservazione delle carote prelevate per questi studi.
La stampa 3D offre nuove possibilità in questo senso9. Il nuovo supporto per anime stampato in 3D è il primo tentativo di semplificare l’intera procedura, rendendola meno dispendiosa in termini di tempo e, per questo, più efficiente.
Mentre i nuclei conservati in cannucce di plastica31,32 o contenitori simili devono essere rimossi per evitare che i funghi si sviluppino all’esterno (e presto anche all’interno) del nucleo, i nuclei fissati nei supporti GSC possono rimanere così come sono. A questo punto, è paragonabile a conservarli in cannucce di carta33.
Il vantaggio diventa evidente non appena l’intera procedura di (i) rimozione delle anime dalla paglia (o da un altro contenitore), (ii) incollarle su supporti di legno o fissarle su altri oggetti come supporti per cavi, e (iii) il processo probabilmente soggetto a errori di trasferimento del rispettivo codice utilizzato per ciascuna anima, poiché era quasi uno standard da decenni ormai34, diventa superfluo.
La struttura aperta del porta GSC consente di conservare i nuclei senza il rischio di infestazioni fungine, come nel caso in cui fossero conservati in un contenitore di plastica. Come descritto sopra, il supporto permette anche un inglobamento in paraffina per stabilizzare la struttura. Tuttavia, questa “semplice” inclusione non può essere paragonata alle comuni procedure di inclusione che utilizzano cassette per incorporare il campione in un blocco di paraffina come avviene per i micro nuclei35. La tecnica semplice è piuttosto paragonabile all’applicazione dell’amido di mais durante il taglio di micro sezioni36. Stabilizzerà meglio le cellule e preverrà la loro rottura durante la procedura di taglio, ma richiede più tempo rispetto alla semplice aggiunta di amido di mais. Questa forma di incorporamento non stabilizzerà l’intero nucleo come se fosse incorporato in un blocco. Se il nucleo è rotto, anche le sezioni si romperanno. Poiché il supporto GSC si inserisce nel microtomo37, la preparazione della superficie per il successivo processo di digitalizzazione richiede solo pochi minuti.
Per il processo di digitalizzazione degli anelli degli alberi, l’applicazione di scanner piani, frequentemente utilizzati per le misure di intensità del blu38,39, non è stata soddisfacente per quanto riguarda le viste più dettagliate della struttura dell’anello a causa della qualità piuttosto bassa delle immagini risultanti. Sebbene i confini degli anelli comuni (larghi) di conifere fossero visibili in queste immagini, gli anelli stretti, o anche le fluttuazioni di densità, erano quasi impossibili da identificare.
Sebbene esistano nuovi affascinanti tentativi di digitalizzare gli anelli degli alberi in alta risoluzione, come la CT40 a raggi X, l’utilizzo di fotocamere digitali ad alta risoluzione è ancora il modo più efficiente ed economico per produrre immagini di alta qualità per ulteriori misurazioni.
The authors have nothing to disclose.
Gli autori ringraziano il Prof. Jussi Grießinger per aver sostenuto l’idea di creare il nuovo titolare.
Core-microtome | WSL | https://www.wsl.ch/en/services-produkte/microtomes/ | Microtome to cut micro sections from increment cores |
Epson Expression 10000XL | EPSON | https://epson.com/Support/Scanners/Expression-Series/Epson-Expression-10000XL—Graphic-Arts/s/SPT_E10000XL-GA | flatbed scanner |
GSC holder | WSL | in-house | 3D printed mount to fix cores for transport, preparation, analyses, and storage |
Skippy image capturing system | WSL | https://www.wsl.ch/en/services-produkte/skippy/) | Image capturing system developed at WSL equiped with a 61 MP camera (Sony Alpha 7R IV and Sony FE 90mm f/2.8 Macro lens) |
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