Summary

覚醒したマーモセットにおける脳波測定 同種の発声を聞く

Published: July 26, 2024
doi:

Summary

言語の進化を研究するためには、ヒトの脳のメカニズムとヒト以外の霊長類の脳のメカニズムを比較することが重要です。私たちは、覚醒状態の動物の脳波を非侵襲的に測定する方法を開発しました。これにより、人間と動物に害を与えることなく、長期的に人間と動物の脳波データを直接比較することができます。

Abstract

音声コミュニケーションは、霊長類の社会的相互作用、特に生存と社会組織において重要な役割を果たします。人間は、言語という形でユニークで高度な音声コミュニケーション戦略を開発しました。ヒトの言語の進化を研究するためには、ヒトの発声処理の根底にある神経メカニズムを解明するとともに、ヒト以外の霊長類と比較することで脳のメカニズムがどのように進化してきたのかを理解する必要があります。本研究では、覚醒状態にあるヒト以外の霊長類の脳波計(EEG)を非侵襲的に測定する方法を開発した。この記録方法により、動物を傷つけることなく長期的な研究が可能になるだけでなく、重要なことに、ヒト以外の霊長類の脳波データとヒトのデータを直接比較することができ、ヒトの言語の進化に関する洞察を得ることができます。本研究では、頭皮脳波記録法を用いて、マーモセットの種特異的な発声に対する脳活動を調査しました。この研究は、頭皮EEGを使用して、音声知覚中のマーモセットの広範な神経表現を捕捉することにより、新しい洞察を提供し、既存の知識のギャップを埋めます。

Introduction

霊長類は、種固有の発声を使用して、発信者の感情状態や社会的絆を維持する意図、捕食者の存在、またはその他の危険な状況など、生物学的に重要な情報を伝えます。発声が豊富な非ヒト霊長類の発声知覚の根底にある神経メカニズムの調査は、ヒト言語の進化的起源をよりよく理解するための重要な手がかりを提供する可能性があります。

コモンマーモセットは南アメリカ原産の小さな霊長類です。近年、マーモセットは、その高い再現性、小型化による使い勝手の良さ、有用なトランスジェニック技術の開発などから、マカクザルと並んでモデル動物として利用されることが増えている1,2,3。疾患モデルとしての有用性に加えて、グループ内の豊かな発声コミュニケーションは、この種の別のユニークな特徴です4,5,6,7。マーモセットは、森の見えない同種とコミュニケーションをとるために、日常的に音声信号を交換しています。マーモセットの発声知覚と発声に関与する脳活動を調べることで、マーモセットが脳内で自分自身または同種の鳴き声の聴覚情報をどのように処理しているかを特定し、どの神経回路が関与しているかを特定できます。これまでの研究では、マーモセットの発声に関与する一次聴覚野8,9,10,11,12および前頭皮質13,14の神経活動が実証されている。さらに、これらの興奮および抑制されたニューロン応答は、一次聴覚皮質8,10における聴覚-発声相互作用によって調節された。これらの研究は、侵襲的な記録方法を使用して、単一ニューロンレベルでの詳細な神経活動データを提供しました。マーモセットの発声に関与する神経活動については、数多くの研究がさらに調査されています。しかし、声の知覚は依然として十分に理解されていません15,16

いくつかの非侵襲的脳イメージング研究により、マーモセットの発声処理の神経メカニズムが解明されました17,18,19;その高い空間分解能は利点ですが、スキャン中に動物を覚醒状態に保つには高度な技術が必要です。しかし、最近では、Jafariらは、機能的磁気共鳴画像法(fMRI)を用いて、覚醒状態のマーモセットの発声知覚に関与する前頭側頭領域を同定した19。ヒトの音声知覚や発声に関与する脳機能を解明するための実験は、ほとんどすべて、頭皮脳波計(EEG)、脳磁図(MEG)20,21、fMRI22,23,24などの非侵襲的な方法を用いて行われてきました。人間を対象とした数多くの研究で、EEGを使用して音声知覚に関連する脳活動が調査されています。これらの研究のほとんどは、感情情報25,26,27と感情的な言葉28の顕著性に焦点を当てており、その結果、音声知覚29における事象関連の可能性の変化が明らかになった。ヒトの頭蓋内埋め込み電極を用いた皮質電気検査(ECoG)および単一ニューロン記録は、脳神経外科治療を受けている患者を対象とした限られた数の実験でしか行われていない30,31

人間とサルを比較する進化論的視点は、人間が発達した声の知覚と発声の根底にあるユニークな神経メカニズムを理解する上で重要です。マーモセットのような発声能力の高いヒト以外の霊長類の音声知覚と発声に関与する神経メカニズムをヒトと直接比較するには、同じ方法を使用して2つの種間のデータを比較することが重要です。機能的MRIは、全脳イメージングを可能にし、高い空間分解能を備えています。頭蓋骨に対して垂直な活動や、脳波やMEGでは記録が困難な深部での活動を記録できるという利点があります。ただし、MRI装置は設置と保守に費用がかかり、デバイスの性質上、提示できる刺激には多くの制限があります。これに対し、脳波、ERP(イベント関連電位)、MEGは時間分解能が高いため、時系列の音声処理の解析に有用です。特に、脳波は、高い移動性、さまざまな実験環境で使用できること、比較的低コストであること、そして1人のオペレーターで済むという利点があります。

ヒトでは既に大量の脳波データが得られているため、ヒト以外の霊長類に対しては、非侵襲的なパラダイムを用いた脳波測定法が求められています。私たちの研究グループは、マカクザルやマーモセットに対して、チューブ32を用いた独自の非侵襲的な脳波記録法を開発しました。ここでは、非ヒト霊長類33,34,35,36,37における聴覚処理に関するいくつかの新しい知見を報告する。マーモセットの種特異的な発声に対する脳活動の特徴を明らかにするために、頭皮に電極を装着して脳活動を非侵襲的に記録する実験系を構築しました。本研究では、マーモセットの脳波測定方法について述べる。

Protocol

すべての実験は、EHUBの動物実験委員会(No.2022-003、2023-104)によって承認され、EHUBが発行した実験霊長類のケアと使用に関するガイドに従って実施されました。実験には、9種類の一般的なマーモセット(Callithrix jacchus、オス6匹、メス3匹、2〜12歳、体重330〜490g)を使用しました。 1. 動物たち マーモセットは、巣箱、木製の止まり木、その他の強化?…

Representative Results

まず、マーモセットの各聴覚刺激の平均イベント関連電位(ERP)をプロットしました(図2)。聴覚誘発電位(AEP)は 、刺激 の明確な開始を反映して、ノイズ条件で顕著でした( 図1Dを参照)。通話タイプとノイズ刺激の平均ERPを比較するために、Cz応答の被験者間因子として刺激を使用した一元配置分散分析(ANOVA)を適用しました。刺激開始後13-18 ms、…

Discussion

麻酔の注意点
ケタミンとキシラジンの両方の投与が試みられており、これらは鎮痛剤であり、したがって長時間の痛みを伴う作業に適していますが、マーモセットは酸素吸入なしで血中酸素レベルの低下を経験する傾向があります44。要するに、アルファキサロンは、シェービングやマスク作りなど、痛みのない作業に最も適しているのではないでしょうか?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

本研究は、京都大学白眉プロジェクト、科学研究費補助金挑戦的研究(開拓)(課題22K18644)、科学研究費基盤研究(C)(課題22K12745)、基盤研究(B)(課題番号21H02851)、科学研究費基盤研究(A)(課題番号19H01039)の支援を受けて行われました。英語の編集をしてくださった エディテージ (www.editage.jp)に感謝いたします。

Materials

Alfaxalone Meiji Animal Health Alfaxan
Amplifier Brain Products BrainAmp
Atropine Fuso Pharmaceutical Industries Atropine Sulfate Injection
Audio editor Adobe Adobe Audition
Data processing software MathWorks MATLAB version R2023a
Data processing toolbox University of California-SanDiego EEGLAB
Data processing toolbox University of California-Davis ERPLAB
Electric shaver Panasonic ER803PPA
Electrode Unique Medical UL-3010 AgCl coated (custom)
Electrode gel Neurospec AG V16 SuperVisc
Electrode input box Brain Products EIB64-DUO 64ch
Glue 3M Scotch 7005S
Hair removering cream Kracie epilat for sensitive skin
Isoflurane Bussan Animal Health ds isoflurane
Liquid gum San-ei Yakuhin Boeki Arabic Call SS Gum arabic+water
Liquid nutrition Nestlé Health Science Company Isocal 1.0 Junior Polymeric formula
Maropitant Zoetis  Cerenia injectable solution
Monitor Camera Intel RealSense LiDAR Camera L515
Monkey pellets Oriental Yeast SPS
Primate chair Natsume Seisakusho Order made
Pulse oximeters Covident Nellcor PM10N
Skin prepping pasta  Mammendorfer Institut für Physik und Medizin NeuPrep
Slicon tube AsONE Φ4 x 7mm
Speaker Fostex PM0.3
Synchronization device Brain Vision StimTrak
Thermoplastic mask CIVCO MTAPU Type Uniframe Thermoplastic Mask 2.4mm

References

  1. Miller, C. T., et al. Marmosets: A neuroscientific model of human social behavior. Neuron. 90 (2), 219-233 (2016).
  2. Okano, H., Hikishima, K., Iriki, A., Sasaki, E. The common marmoset as a novel animal model system for biomedical and neuroscience research applications. Semin Fetal Neonatal Med. 17 (6), 336-340 (2012).
  3. t’Hart, B. A., Abbott, D. H., Nakamura, K., Fuchs, E. The marmoset monkey: a multi-purpose preclinical and translational model of human biology and disease. Drug Discov Today. 17 (21-22), 1160-1165 (2012).
  4. Bezerra, B. M., Souto, A. Structure and usage of the vocal repertoire of Callithrix jacchus. Int J Primatol. 29 (3), 671-701 (2008).
  5. Agamaite, J. A., Chang, C. J., Osmanski, M. S., Wang, X. A quantitative acoustic analysis of the vocal repertoire of the common marmoset (Callithrix jacchus). J Acoust Soc Am. 138 (5), 2906-2928 (2015).
  6. Pistorio, A. L., Vintch, B., Wang, X. Acoustic analysis of vocal development in a New World primate, the common marmoset (Callithrix jacchus). J Acoust Soc Am. 120 (3), 1655-1670 (2006).
  7. Grijseels, D. M., Prendergast, B. J., Gorman, J. C., Miller, C. T. The neurobiology of vocal communication in marmosets. Ann N. Y. Acad Sci. 1528 (1), 13-28 (2023).
  8. Eliades, S. J., Wang, X. Neural substrates of vocalization feedback monitoring in primate auditory cortex. Nature. 453 (7198), 1102-1106 (2008).
  9. Eliades, S. J., Wang, X. Comparison of auditory-vocal interactions across multiple types of vocalizations in marmoset auditory cortex. J Neurophysiol. 109 (6), 1638-1657 (2013).
  10. Eliades, S. J., Wang, X. Contributions of sensory tuning to auditory-vocal interactions in marmoset auditory cortex. Hear Res. 348, 98-111 (2017).
  11. Eliades, S. J., Wang, X. Neural correlates of the lombard effect in primate auditory cortex. J Neurosci. 32 (31), 10737-10748 (2012).
  12. Tsunada, J., Wang, X., Eliades, S. J. Multiple processes of vocal sensory-motor interaction in primate auditory cortex. Nat Commun. 15 (1), 3093 (2024).
  13. Miller, C. T., Thomas, A. W., Nummela, S. U., de la Mothe, L. A. Responses of primate frontal cortex neurons during natural vocal communication. J Neurophysiol. 114 (2), 1158-1171 (2015).
  14. Roy, S., Zhao, L., Wang, X. Distinct neural activities in premotor cortex during natural vocal behaviors in a New World Primate, the common marmoset (Callithrix jacchus). J Neurosci. 36 (48), 12168-12179 (2016).
  15. Wang, X., Merzenich, M. M., Beitel, R., Schreiner, C. E. Representation of a species-specific vocalization in the primary auditory cortex of the common marmoset: temporal and spectral characteristics. J Neurophysiol. 74 (6), 2685-2706 (1995).
  16. Zeng, H. -. h., et al. Distinct neuron populations for simple and compound calls in the primary auditory cortex of awake marmosets. National Science Review. 8 (11), nwab126 (2021).
  17. Sadagopan, S., Temiz-Karayol, N. Z., Voss, H. U. High-field functional magnetic resonance imaging of vocalization processing in marmosets. Sci Rep. 5, 10950 (2015).
  18. Kato, M., et al. Individual identity and affective valence in marmoset calls: in vivo brain imaging with vocal sound playback. Anim Cogn. 21 (3), 331-343 (2018).
  19. Jafari, A., et al. A vocalization-processing network in marmosets. Cell Rep. 42 (5), 112526 (2023).
  20. Papanicolaou, A. C., et al. Differential brain activation patterns during perception of voice and tone onset time series: a MEG study. Neuroimage. 18 (2), 448-459 (2003).
  21. Capilla, A., Belin, P., Gross, J. The early spatio-temporal correlates and task independence of cerebral voice processing studied with MEG. Cereb Cortex. 23 (6), 1388-1395 (2012).
  22. Belin, P., Zatorre, R. J., Lafaille, P., Ahad, P., Pike, B. Voice-selective areas in human auditory cortex. Nature. 403 (6767), 309-312 (2000).
  23. Perrodin, C., Kayser, C., Abel, T. J., Logothetis, N. K., Petkov, C. I. Who is that? Brain networks and mechanisms for identifying individuals. Trends Cogn Sci. 19 (12), 783-796 (2015).
  24. Pernet, C. R., et al. The human voice areas: Spatial organization and inter-individual variability in temporal and extra-temporal cortices. Neuroimage. 119, 164-174 (2015).
  25. Chen, X., Pan, Z., Wang, P., Zhang, L., Yuan, J. EEG oscillations reflect task effects for the change detection in vocal emotion. Cogn Neurodyn. 9 (3), 351-358 (2015).
  26. Hiyoshi-Taniguchi, K., et al. EEG correlates of voice and face emotional judgments in the human brain. Cogn Comput. 7 (1), 11-19 (2015).
  27. Lévêque, Y., Schön, D. Listening to the human voice alters sensorimotor brain rhythms. PloS One. 8, e80659 (2013).
  28. Liu, T., et al. Electrophysiological insights into processing nonverbal emotional vocalizations. NeuroReport. 23, 108-112 (2012).
  29. Bruneau, N., et al. Early neurophysiological correlates of vocal versus non-vocal sound processing in adults. Brain Res. 1528, 20-27 (2013).
  30. Flinker, A., et al. Single-Trial speech suppression of auditory cortex activity in humans. J Neurosci. 30, 16643-16650 (2010).
  31. Greenlee, J. D. W., et al. Human auditory cortical activation during self-vocalization. PloS One. 6 (3), e14744 (2011).
  32. Itoh, K., Konoike, N., Iwaoki, H., Igarashi, H., Nakamura, K. A novel "dip-in electrode" method for electrode application to record noninvasive scalp electroencephalograms and evoked potentials in an awake common marmoset. Neuroimage: Reports. 2 (3), 100116 (2022).
  33. Itoh, K., et al. Cerebral cortical processing time is elongated in human brain evolution. Sci Rep. 12 (1), 1103 (2022).
  34. Itoh, K., Nejime, M., Konoike, N., Nakamura, K., Nakada, T. Evolutionary elongation of the time window of integration in auditory cortex: macaque vs. human comparison of the effects of sound duration on auditory evoked potentials. Front Neurosci. 13, 630 (2019).
  35. Itoh, K., Iwaoki, H., Konoike, N., Igarashi, H., Nakamura, K. Noninvasive scalp recording of the middle latency responses and cortical auditory evoked potentials in the alert common marmoset. Hear Res. 405, 108229 (2021).
  36. Itoh, K., Nejime, M., Konoike, N., Nakada, T., Nakamura, K. Noninvasive scalp recording of cortical auditory evoked potentials in the alert macaque monkey. Hear Res. 327, 117-125 (2015).
  37. Konoike, N., et al. Comparison of noninvasive, scalp-recorded auditory steady-state responses in humans, rhesus monkeys, and common marmosets. Sci Rep. 12 (1), 9210 (2022).
  38. Eliades, S. J., Miller, C. T. Marmoset vocal communication: Behavior and neurobiology. Dev Neurobiol. 77 (3), 286-299 (2017).
  39. Ray, S., Hsiao, S. S., Crone, N. E., Franaszczuk, P. J., Niebur, E. Effect of stimulus intensity on the spike-local field potential relationship in the secondary somatosensory cortex. J Neurosci. 28 (29), 7334-7343 (2008).
  40. Leonard, M. K., et al. Large-scale single-neuron speech sound encoding across the depth of human cortex. Nature. 626 (7999), 593-602 (2024).
  41. Dubey, A., Ray, S. Comparison of tuning properties of gamma and high-gamma power in local field potential (LFP) versus electrocorticogram (ECoG) in visual cortex. Sci Rep. 10 (1), 5422 (2020).
  42. Ray, S., Crone, N. E., Niebur, E., Franaszczuk, P. J., Hsiao, S. S. Neural correlates of high-gamma oscillations (60-200 Hz) in Macaque local field potentials and their potential implications in electrocorticography. Journal Neurosci. 28 (45), 11526-11536 (2008).
  43. Buzsáki, G., Anastassiou, C. A., Koch, C. The origin of extracellular fields and currents–EEG, ECoG, LFP and spikes. Nat Rev Neurosci. 13 (6), 407-420 (2012).
  44. Konoike, N., Miwa, M., Ishigami, A., Nakamura, K. Hypoxemia after single-shot anesthesia in common marmosets. J Med Primatol. 46 (3), 70-74 (2017).
This article has been published
Video Coming Soon
Keep me updated:

.

Cite This Article
Konoike, N., Miwa, M., Itoh, K., Nakamura, K. Electroencephalography Measurements in Awake Marmosets Listening to Conspecific Vocalizations . J. Vis. Exp. (209), e66869, doi:10.3791/66869 (2024).

View Video