Agregação celular encapsulada da matriz da membrana basal para investigação da formação do tecido do baço murino

A ruptura traumática do baço e o aparecimento de múltiplos nódulos esplênicos no corpo foi um dos primeiros indícios de que o tecido esplênico abrigava capacidade regenerativa ^1,2. Os autotransplantes de baço foram posteriormente introduzidos na clínica para preservar o tecido esplênico em pacientes que necessitaram de esplenectomia de emergência³. No entanto, apesar de fazer parte da prática clínica há décadas, muito pouco se sabe sobre como o baço se regenera. Modelos de transplante animal têm fornecido informações sobre múltiplos parâmetros da regeneração do baço e da função imune ^4,5. Em particular, modificações experimentais no método de preparo do enxerto têm permitido que a regeneração tecidual seja estudada com mais detalhes em nível celular e molecular.

Os transplantes com cortes inteiros do baço passam por uma fase de necrose de massa antes da reconstrução de uma nova estrutura esplênica⁶. A fase inicial da necrose do enxerto sugere que a maior parte do tecido transplantado consiste em grande parte de glóbulos vermelhos e brancos e é desnecessária para a regeneração do baço. Isso foi investigado experimentalmente pela exclusão de células hematopoéticas de enxertos de baço antes do transplante sob a cápsula renal de camundongo. Aqui, a fração não leucocitária/não eritrocitária do baço, que inclui células estromais e endoteliais, mostrou-se suficiente para induzir a formação de novo ^tecido7. O tecido estromal do baço poderia ser processado em uma suspensão de célula única, permitindo o uso de tecnologias de classificação celular para manipular a composição do enxerto celular. Ao remover seletivamente os tipos celulares candidatos, foram identificadas duas populações de células estromais ^{CD45-TER-119–} indispensáveis para o desenvolvimento do enxerto: uma população de células CD31⁺CD105⁺MAdCAM-1⁺ do tipo endotelial e uma população de células mesenquimais PDGFRβ⁺ mais amplamente^definida8.

A construção de enxertos a partir de células do baço varia em termos de materiais de suporte e processos de carregamento celular. Baços manipulados por tecidos foram previamente preparados carregando unidades esplênicas em um arcabouço poliglicólico de polímero de ácido poliglicólico/poli-L^de ácido lático ^5,9. Curiosamente, as células estromais do baço absorvidas em uma esponja de colágeno falharam em enxertar, enquanto as células estromais agregadas e carregadas sobre uma folha de colágeno facilitaram a regeneração do baço⁸. A ressuspensão de células estromais do baço dentro de uma matriz de Matrigel também demonstrou induzir agregação celular em condições de cultura tridimensional¹⁰. Entretanto, esse método ainda não foi testado para uso em modelos de transplante. O objetivo geral do protocolo atual é agregar e encapsular à força células estromais do baço diretamente na matriz da membrana basal, que posteriormente podem ser transferidas para um sistema tridimensional de cultura de tecidos in vitro ou usadas como veículo para transplantes em modelo animal (Figura 1 Suplementar).