Summary

Modello sperimentale di perimplantite indotta da legatura nei topi

Published: May 17, 2024
doi:

Summary

Questo è un rapporto su un modello sperimentale di perimplantite indotta da legatura nei topi. Descriviamo tutte le fasi chirurgiche, dalla gestione pre e post-operatoria degli animali, alle estrazioni, al posizionamento dell’impianto e alla perimplantite indotta dalla legatura.

Abstract

Gli impianti dentali hanno un alto tasso di successo e sopravvivenza. Tuttavia, complicanze come la perimplantite (PI) sono molto difficili da trattare. La PI è caratterizzata da un’infiammazione dei tessuti intorno agli impianti dentali con progressiva perdita dell’osso di supporto. Per ottimizzare la longevità degli impianti dentali in termini di salute e funzionalità, è fondamentale comprendere la fisiopatologia della perimplantite. A questo proposito, l’utilizzo di modelli murini nella ricerca ha dimostrato chiari benefici nel ricreare le circostanze cliniche. Questo studio mirava a descrivere un modello sperimentale di perimplantite indotta da legatura nei topi e determinare se esiste un’efficacia nell’indurre questa malattia, dati i cambiamenti ossei e tissutali osservati. L’induzione sperimentale della perimplantite comprende le seguenti fasi: estrazione dei denti, posizionamento dell’impianto e PI indotta dalla legatura. Un campione di diciotto topi maschi C57BL/6J di 3 settimane è stato diviso in due gruppi, legatura (N=9) e controllo non legatura (N=9). È stata eseguita la valutazione dei fattori clinici, radiografici e istologici. Il gruppo legato ha mostrato una perdita ossea significativamente più elevata, un aumento dell’edema dei tessuti molli e una migrazione epiteliale apicale rispetto al gruppo senza legatura. Si è concluso che questo modello preclinico può indurre con successo la perimplantite nei topi.

Introduction

Gli impianti dentali sono sempre più diffusi come scelta desiderabile per sostituire i denti mancanti1. Si prevede che la prevalenza degli impianti dentali nella popolazione adulta degli Stati Uniti aumenterà fino al 23% entro il 20262. Sulla base di un rapporto di analisi di mercato di Grand View Research (2022), si prevede che le dimensioni del mercato globale degli impianti dentali raggiungeranno circa 4.6 miliardi di dollari nel 2022. Inoltre, si prevede che mostrerà un tasso di crescita annuo costante di circa il 10% fino all’anno 20303. Sfortunatamente, l’uso di impianti dentali può portare a complicazioni, come la perimplantite. La perimplantite è stata definita come una condizione indotta da biofilm caratterizzata da infiammazione della mucosa perimplantare e conseguente perdita progressiva dell’osso di supporto4.

Una revisione sistematica ha rilevato che la prevalenza media della perimplantite era del 19,53% (intervallo di confidenza al 95% [CI], da 12,87 a 26,19%) a livello di paziente e del 12,53% (IC 95% da 11,67 a 13,39%) a livello di impianto5. La perimplantite rappresenta una salute pubblica in crescita, a causa di un aumento del fallimento implantare e, di conseguenza, di costi di trattamento sostanziali6.

Comprendere la patogenesi della perimplantite è fondamentale per sviluppare un approccio sistematico per prevenirne l’insorgenza e la progressione e massimizzare la longevità degli impianti dentali in termini di estetica e funzione 7,8. In questo senso, l’utilizzo di modelli murini nella ricerca odontoiatrica si è dimostrato vantaggioso, dato che i topi condividono oltre il 95% dei loro geni con gli esseri umani 9,10, il numero di database genetici online disponibili e la capacità di riprodurre scenari clinici11. Tutti i vantaggi descritti consentono la dissezione dei meccanismi genetici in diverse malattie12, l’accomodazione e la gestione accessibili, e gli anticorpi ampiamente disponibili come pannelli umani, oltre alla disponibilità di modificazioni genetiche (ad esempio, knockout e sovraespressione) per la valutazione dei tessuti infiammatori e la mappaturadelle malattie 13. Sebbene vantaggioso, ci sono poche pubblicazioni che affrontano la perimplantite nei topi. Ciò è dovuto, tra l’altro, a sfide metodologiche, tra cui la difficoltà di ottenere mini-impianti o di installarli.

Per sviluppare la perimplantite nei topi, sono stati descritti molti protocolli, come la perimplantite indotta dalla legatura, la perimplantite indotta da batteri14, la perimplantite indotta da lipopolisaccaridi (LPS)15 o la combinazione LPS + perimplantite indotta dalla legatura16. In questa sede ci concentreremo sul modello di legatura perché è il metodo più ampiamente accettato per indurre la parodontite 17,18,19 e, più recentemente, la perimplantite 20,21. La legatura posta intorno agli impianti in posizione sottomucosa stimola l’accumulo di placca e, di conseguenza, l’infiammazione dei tessuti. Quindi, lo sviluppo di questo approccio si basa sull’indicazione di una valida tecnica costi-benefici per indagini pre-cliniche sulle malattie perimplantari. Questo studio ha lo scopo di descrivere un modello sperimentale di perimplantite indotta dalla legatura nei topi e determinare se vi è efficacia nell’indurre questa malattia date le alterazioni ossee e tissutali osservate.

L’obiettivo generale di questo articolo è quello di riportare il protocollo applicato per indurre la perimplantite nei topi mediante legatura e di osservarne l’efficacia attraverso la valutazione dei tessuti e la perdita ossea intorno agli impianti.

Protocol

Le procedure che coinvolgono soggetti animali sono state approvate dal Chancellor’s Animal Research Committee dell’Università della California, Los Angeles (numero di protocollo ARC 2002-125) e dall’Animal Research: Reporting In Vivo Experiments (ARRIVE)22. Per questo metodo, sono stati utilizzati diciotto topi maschi C57BL/6J di 3 settimane che sono stati sottoposti a estrazioni dentali, posizionamento di impianti e induzione di perimplantite. Tutte le procedure odontoiatriche sono state eseguit…

Representative Results

Per questo metodo, sono stati utilizzati diciotto topi maschi C57BL/6J di 3 settimane che sono stati sottoposti a estrazioni dentali, posizionamento di impianti e induzione di perimplantite. C’erano nove animali per gruppo, il che era statisticamente significativo, considerando la perdita ossea lineare che raggiungeva l’80% di potenza, il 15% di deviazione standard (σ) e l’intervallo di confidenza del 95% (α = 0,05). I topi sono stati nutriti con una dieta morbida ad libitum durante l’esperimento. Nove topi ha…

Discussion

Questo protocollo presenta un rapporto descrittivo sulle procedure chirurgiche per l’induzione della perimplantite utilizzando un modello di legatura nei topi. Lavorare con i topi ha dei vantaggi, come l’economicità, la disponibilità di un ampio array genetico dato il grande background23 tra gli altri aspetti24,25. Nel corso degli anni, diversi studi hanno utilizzato con successo i topi in campo medico e odontoiatrico,<…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato sostenuto dal NIH/NIDCR DE031431. Vorremmo ringraziare il Translational Pathology Core Laboratory dell’UCLA per l’assistenza nella preparazione delle sezioni istologiche decalcificate.

Materials

#5 dental explorer Hu-Friedy, Chicago, IL 392-0911  Dental luxation
15c blade and surgical scalpel Henry Schein Inc., Melville, NY 1126186 Tissue incision
6-0 silk ligatures Fisher Scientific, Hampton, NH NC9201232 Ligature
Amoxicillin 50μg/mL Zoetis, San Diego, CA TS/DRUGS/57/2003 Oral suspension
Bacon Soft Diet Bio Serve®, Frenchtown, NJ 14-726-701
C57BL/6J male mice The Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME, USA 000664 Age: 3-week-old
CTAn software V.1.16 Bruker, Billerica, MA Volumetric analysis
Dolphin software Navantis, Toronto, CA Linear bone analysis
Implant carrier & Tip D. P. Machining Inc., La Verne, CA Unique product  Implant holder
Implant support D. P. Machining Inc., La Verne, CA Unique product  Implant capture
Isoflurane  Vet One, Boise, ID NDC13985-528-60 Inhalational anesthetic
Micro-CT scan 1172 SkyScan, Kontich, Belgium μCT scans
Nrecon Software Bruker Corporation, Billerica, MA Images reconstruction
Ø 0.3mm – L 2.5mm Micro Drills  Sphinx, Hoffman Estates, IL ART. 50699  Osteotomy
Ø 0.5mm – L 1.0mm Titanium implants D. P. Machining Inc., La Verne, CA Unique product
Ophthalmic lubricant Apexa, Ontario, CA NDC13985-600-03 Artificial tears
Pin Vise General Tools, Secaucus, NJ 90 Osteotomy
Rimadyl 50mg/ml Zoetis, San Diego, CA 4019449 Anti-inflammatory
Sterile cotton tipped Dynarex, Glendale, AZ 4304-1 Hemostasis
Tip forceps Fine Science Tools, Foster City, CA 11071-10 Dental Extraction
Tying forceps Fine Science Tools, Foster City, CA 18025-10 Ligature placement

References

  1. Ho, K., et al. A cross-sectional survey of patient’s perception and knowledge of dental implants in japan. Int J Implant Dent. 8 (1), 14 (2022).
  2. Elani, H. W., Starr, J. R., Da Silva, J. D., Gallucci, G. O. Trends in dental implant use in the u.S., 1999-2016, and projections to 2026. J Dent Res. 97 (13), 1424-1430 (2018).
  3. . Available from: https://www.grandviewresearch.com/industry-analysis/dental-implants-market (2022)
  4. Renvert, S., Persson, G. R., Pirih, F. Q., Camargo, P. M. Peri-implant health, peri-implant mucositis, and peri-implantitis: Case definitions and diagnostic considerations. J Clin Periodontol. 45 Suppl 20, S278-S285 (2018).
  5. Diaz, P., Gonzalo, E., Villagra, L. J. G., Miegimolle, B., Suarez, M. J. What is the prevalence of peri-implantitis? A systematic review and meta-analysis. BMC Oral Health. 22 (1), 449 (2022).
  6. Herrera, D., et al. Prevention and treatment of peri-implant diseases-the efp s3 level clinical practice guideline. J Clin Periodontol. 50 Suppl 26, 4-76 (2023).
  7. Graziani, F., Figuero, E., Herrera, D. Systematic review of quality of reporting, outcome measurements and methods to study efficacy of preventive and therapeutic approaches to peri-implant diseases. J Clin Periodontol. 39 Suppl 12, 224-244 (2012).
  8. Schwarz, F., Derks, J., Monje, A., Wang, H. L. Peri-implantitis. J Periodontol. 89 Suppl 1, S267-S290 (2018).
  9. Bryda, E. C. The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research. Mo Med. 110 (3), 207-211 (2013).
  10. Mouse Genome Sequencing Consortium. Initial sequencing and comparative analysis of the mouse genome. Nature. 420 (6915), 520-562 (2002).
  11. Pirih, F. Q., et al. Ligature-induced peri-implantitis in mice. J Periodontal Res. 50 (4), 519-524 (2015).
  12. Rau, C. D., et al. High-density genotypes of inbred mouse strains: Improved power and precision of association mapping. G3 (Bethesda). 5 (10), 2021-2026 (2015).
  13. Schwarz, F., Sculean, A., Engebretson, S. P., Becker, J., Sager, M. Animal models for peri-implant mucositis and peri-implantitis. Periodontol 2000. 68 (1), 168-181 (2015).
  14. Varon-Shahar, E., et al. Peri-implant alveolar bone resorption in an innovative peri-implantitis murine model: Effect of implant surface and onset of infection. Clin Implant Dent Relat Res. 21 (4), 723-733 (2019).
  15. Pirih, F. Q., et al. A murine model of lipopolysaccharide-induced peri-implant mucositis and peri-implantitis. J Oral Implantol. 41 (5), e158-e164 (2015).
  16. Schwarz, F., et al. Influence of antiresorptive/antiangiogenic therapy on the extension of experimentally induced peri-implantitis lesions. Clin Oral Investig. 27 (6), 3009-3019 (2023).
  17. Wong, R. L., et al. Comparing the healing potential of late-stage periodontitis and peri-implantitis. J Oral Implantol. 43 (6), 437-445 (2017).
  18. Wong, R. L., et al. Early intervention of peri-implantitis and periodontitis using a mouse model. J Periodontol. 89 (6), 669-679 (2018).
  19. Hiyari, S., et al. Ligature-induced peri-implantitis and periodontitis in mice. J Clin Periodontol. 45 (1), 89-99 (2018).
  20. Nguyen Vo, T. N., et al. Ligature induced peri-implantitis: Tissue destruction and inflammatory progression in a murine model. Clin Oral Implants Res. 28 (2), 129-136 (2017).
  21. Yuan, S., et al. Comparative transcriptome analysis of gingival immune-mediated inflammation in peri-implantitis and periodontitis within the same host environment. J Inflamm Res. 15, 3119-3133 (2022).
  22. Berglundh, T., et al. Peri-implant diseases and conditions: Consensus report of workgroup 4 of the 2017 world workshop on the classification of periodontal and peri-implant diseases and conditions. J Periodontol. 89 Suppl 1, S313-S318 (2018).
  23. Hiyari, S., et al. Genomewide association study identifies cxcl family members as partial mediators of lps-induced periodontitis. J Bone Miner Res. 33 (8), 1450-1463 (2018).
  24. Kantarci, A., Hasturk, H., Van Dyke, T. E. Animal models for periodontal regeneration and peri-implant responses. Periodontol 2000. 68 (1), 66-82 (2015).
  25. Struillou, X., Boutigny, H., Soueidan, A., Layrolle, P. Experimental animal models in periodontology: A review. Open Dent J. 4, 37-47 (2010).
  26. Erata, E., et al. Cnksr2 loss in mice leads to increased neural activity and behavioral phenotypes of epilepsy-aphasia syndrome. J Neurosci. 41 (46), 9633-9649 (2021).
  27. Fakih, D., Guerrero-Moreno, A., Baudouin, C., Reaux-Le Goazigo, A., Parsadaniantz, S. M. Capsazepine decreases corneal pain syndrome in severe dry eye disease. J Neuroinflammation. 18 (1), 111 (2021).
  28. Douam, F., Ploss, A. The use of humanized mice for studies of viral pathogenesis and immunity. Curr Opin Virol. 29, 62-71 (2018).
  29. Lin, P., et al. Application of ligature-induced periodontitis in mice to explore the molecular mechanism of periodontal disease. Int J Mol Sci. 22 (16), (2021).
  30. Marchesan, J., et al. An experimental murine model to study periodontitis. Nat Protoc. 13 (10), 2247-2267 (2018).
  31. Silva, D. N. A., et al. Probiotic lactobacillus rhamnosus em1107 prevents hyperglycemia, alveolar bone loss, and inflammation in a rat model of diabetes and periodontitis. J Periodontol. 94 (3), 376-388 (2023).
  32. Kim, Y. G., et al. 6-shogaol, an active ingredient of ginger, inhibits osteoclastogenesis and alveolar bone resorption in ligature-induced periodontitis in mice. J Periodontol. 91 (6), 809-818 (2020).
  33. Fine, N., et al. Periodontal inflammation primes the systemic innate immune response. J Dent Res. 100 (3), 318-325 (2021).
  34. Yu, X., et al. Role of toll-like receptor 2 in inflammation and alveolar bone loss in experimental peri-implantitis versus periodontitis. J Periodontal Res. 53 (1), 98-106 (2018).
  35. Reinedahl, D., Chrcanovic, B., Albrektsson, T., Tengvall, P., Wennerberg, A. Ligature-induced experimental peri-implantitis-a systematic review. J Clin Med. 7 (12), (2018).

Play Video

Cite This Article
de Araújo Silva, D. N., Casarin, M., Monajemzadeh, S., Menezes da Silveira, T., Lubben, J., Bezerra, B., Pirih, F. Q. Experimental Model of Ligature-Induced Peri-Implantitis in Mice. J. Vis. Exp. (207), e66316, doi:10.3791/66316 (2024).

View Video