使用人工宿主从寄生蜂 Trichogramma dendrolimi 中提取毒液
Summary
在这里，我们提出了一种使用由聚乙烯薄膜和氨基酸溶液制成的人工宿主从 木 霉中提取毒液的方案。
Abstract
寄生蜂是一类多样化的膜翅目昆虫，是害虫生物防治的宝贵资源。为了确保成功寄生，寄生蜂将毒液注射到宿主体内，以抑制宿主的免疫力，调节宿主的发育、新陈代谢甚至行为。据估计，寄生蜂的种类超过 600,000 种，其多样性超过了其他有毒动物，如蛇、锥形蜗牛和蜘蛛。寄生蜂毒液是一种未被充分开发的生物活性分子来源，在害虫防治和医学方面具有潜在应用。然而，由于无法使用直接或电刺激，并且由于其体积小而难以解剖，因此收集寄生虫毒液具有挑战性。 Trichogramma 是一种微小的 （~0.5 毫米） 卵寄生蜂属，广泛用于农业和森林中鳞翅目害虫的生物防治。在这里，我们报道了一种使用人工宿主从 T. dendrolimi 中提取毒液的方法。这些人工宿主是用聚乙烯薄膜和氨基酸溶液产生的，然后接种有 毛滴虫 蜂进行寄生。随后收集并浓缩了毒液。这种方法能够提取大量的 毛滴虫 毒液，同时避免由解剖引起的其他组织的污染，这是毒液库解剖方案中的常见问题。这种创新方法促进了 Trichogramma 毒液的研究，为新的研究和潜在应用铺平了道路。
Introduction
寄生蜂是寄生膜翅目昆虫，是生物防治的重要资源1。寄生蜂种类繁多，估计有超过 600,000 种2.寄生蜂的多样性远远超过其他有毒节肢动物，如蛇、锥形蜗牛、蜘蛛、蝎子和蜜蜂。毒液是寄生蜂的重要寄生因子。为了成功寄生，将毒液注射到宿主体内，调节宿主的行为、免疫、发育和新陈代谢3.此外，寄生蜂的毒液在其分子结构、靶点和功能上表现出显著的多样性，反映了与宿主的复杂协同进化。因此，寄生虫毒液是一种有价值且被低估的活性分子资源，用于杀虫或医疗目的4.与蛇、锥形蜗牛、蜘蛛、蝎子和蜜蜂的毒液不同，寄生蜂毒液不能通过直接刺激或电刺激收集5.目前提取寄生蜂毒液的方法是解剖毒液库。然而，寄生蜂通常很小，解剖寄生蜂需要很高的技术技能。因此，如果我们能找到一种高效方便地收集寄生蜂毒液的方法，对研究寄生蜂的毒液将有很大的帮助。
毛螨（膜翅目：Trichogrammatidae）是微小（~0.5毫米长）寄生蜂属 6.这些黄蜂是使用最广泛的生物防治剂之一，特别是针对农业和森林中各种鳞翅目害虫的卵。例如，中国应用最广泛的木霉菌种之一——枸杞已被广泛用于防治多种农林害虫，如石斛、毛竹、桫椤等。先前的研究表明，Trichogramma黄蜂可以将其卵注射到人工宿主中7。可以使用蜡8、琼脂9、封口膜10 和塑料薄膜11 等材料创建人工宿主。在人工宿主中诱导足够的Trichogramma产卵的溶液可以很简单，例如氨基酸或无机盐12。基于树状毛蛾能寄生人工寄主的特点，本研究提供了一种利用人工寄主从寄生蜂中提取毒液的新方法。这种方法旨在解决当前提取技术中产量低、纯度低和易受污染的缺点。利用该方法，可提取大量高纯度的石栖毒液，满足了杀虫或医用生物活性分子的科学研究和筛选需求。
Protocol
Representative Results
Discussion
在这里，我们提出了一种使用人工宿主从T. dendrolimi中提取毒液的方法。毒液采集实验的要点如下。（1）在制备过程中，必须用适当浓度的CO2迅速麻醉树状枸杞。如果 CO2 浓度过低，则不足以快速麻醉 Trichogramma。相反，如果浓度过高，Trichogramma可能会死亡，从而降低它们寄生在人工宿主上的能力。（2）必须保证氨基酸溶液的无菌性，因为氨基酸溶液的污…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
感谢海南省自然科学基金（批准号：323QN262）、国家自然科学基金（批准号31701843和32172483）、江苏省农业科技创新基金（批准号：323QN262）、国家自然科学基金（批准号：、、国家自然科学基金（批准号、、国家自然科学基金CX（22）3012 和 CX（21）3008）、江苏省“双创医生”基金会（批准号202030472）和南京农业大学创业基金（批准号804018）。
Materials
| 10 μm Nylon Net | Millipore | NY1002500 | For filtering the eggs |
| 10% Polyvinyl alcohol | Aladdin | P139533 | For attractting T. dendrolimi to lay eggs |
| 10% Sucrose water | Sinopharm Chemical Reagent | 10021463 | Feed Trichogramma dendrolimi |
| 4x LDS loading buffer | Ace Hardware | B23010301 | SDS-PAGE |
| Collection box | Deli | 8555 | Container for T. dendrolimi parasitism |
| Future PAGE 4–12% (12 wells) | Ace Hardware | J70236502X | SDS-PAGE |
| GenScript eStain L1 protein staining apparatus | GenScript | L00753 | SDS-PAGE |
| Glass grinding rod | Applygen | tb6268 | Semicircular protrudations |
| L- Leucine | Solarbio | L0011 | Artificial host components |
| L-Histidine | Aladdin | A2219458 | Artificial host components |
| L-Phenylalanine | Solarbio | P0010 | Artificial host components |
| Mini-Centrifuges | Scilogex | D1008 | Centrifuge |
| MOPS-SDS running buffer | Ace Hardware | B23021 | SDS-PAGE |
| Omni-Easy Instant BCA protein assay kit | Shanghai Yamay Biomedical Technology | ZJ102 | For esimation of venom protein concentration |
| PCR plate layout of 96 holes | Thermo Fisher | AB1400L | Semicircular protrudations |
| Polyethylene plastic film | Suzhou Aopang Trading | 001c5427 | Artificial egg card |
| Prestained color protein marker(10–180 kDa) | YiFeiXue Biotech | YWB007 | SDS-PAGE |
| Rubber band | Guangzhou qianrui biology science and technology | 009 | Tighten the plastic film and the collection box |
| Silicone rubber septa mat, 96-well, round hole | Sangon Biotech | F504416-0001 | Semicircular protrudations |
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