脳性麻痺ラットの運動機能障害を改善するための腹部マッサージ

上海の復旦大学と提携している金山病院の動物倫理委員会は、この研究を承認しました。Sprague Dawley(SD)の若齢ラットを、08:00から20:00まで照明、20:00から08:00まで暗闇、22°Cに温度管理、室内相対湿度40%〜50%のSPF動物室で飼育しました。彼らは食料と水を自由に入手できました。動物実験は、実験動物の福祉倫理および動物実験安全規則を遵守します。 1. 新生児低酸素性虚血性脳症モデル動物21 生後 7 日(P7)の 18 匹の Sprague Dawley (SD) ラットの雄の仔を、偽 (マッサージなし)、モデル、およびマッサージ (モデル + マッサージ グループ) のグループにランダムに分割します (各グループで n = 6)。 麻酔小動物ガス麻酔器を使用して5%セボフルランガスを投与し、酸素流量を4に調整し、4%誘導分率を使用して若いラットに麻酔をかけます。若いネズミが仰向けに寝転がり、手足の動きが止まり、触っても反応がなく、筋肉が弛緩するのを待って、動物が完全に麻酔されていることを確認します。 麻酔をかけた若いラットにペットの眼軟膏と点眼薬を加えて、目の乾燥を防ぎます。 顕微鏡手術まず、ラットの首の皮膚をヨードフォアで1回消毒し、次に75%エタノールで1回消毒し(この手順を3回実行)、若いラットの首の真ん中に~0.5cmの長さの縦方向の切開を行います。右皮下組織を受動的に分離し、総頸動脈を露出させます。 モデル群とマッサージ群:総頸動脈と迷走神経を慎重に分離します(図1A)。総頸動脈を分割した後、電気凝固ガンで総頸動脈を凝固させます。出血がないことを確認した後、皮膚を層ごとに縫合し、外科的切開部を再度消毒します(図1C)。 偽グループ(CPなし、マッサージなし):血管の治療を行わずに総頸動脈のみを分離します。皮膚を層ごとに縫合し、外科的切開部を再度消毒します。若いネズミが無制限に這うのを観察するときは、若いネズミを母ネズミのそばに戻します。 手術後はヨウ素で消毒してください。手術を終えたラットを37°Cの断熱パッドの上に置き、傷口から出血していないか、目に炎症がないかを常に観察します。 若いラットのモデルとマッサージグループを開放的な低酸素チャンバーに入れ、目覚めるまで1時間観察します。注:若いラットが自由に這うことができるようになったら、低酸素治療を受ける準備ができています。 低酸素症治療麻酔から回復した後、若いラットを37°Cの密閉無酸素装置に入れ、92%N 2および8%O 2ガス条件(2 L / min)で3時間の低酸素状態にします。低酸素治療の後、目覚めている若いラットを母ネズミのそばに戻します。 手術器具を消毒し、低酸素室をアルコールで拭きます。手術後、若いラットをヨードフォアで消毒し、感染の兆候がないか創傷を毎日監視し、滅菌パッドを使用します。SPFアニマルルームで手術の全工程を完了し、SPFアニマルルームで動物を飼育します。 モデルが正常に確立された後、介入措置なしでモデルグループを通常どおり引き上げます。モデリングの完了後、マッサージグループに手動介入を行います。注:偽群は正常に給餌され、低酸素治療を受けませんでした。 ラットの各グループを母ラットの隣に置き、滅菌および高温滅菌された寝具の上に置きます。母ネズミが子孫ネズミに餌を与えるまで、1〜2時間観察します。毎日観察して、傷口から出血していないか、目に炎症があるかを確認します。傷が完全に治癒するまで観察します。 2.マッサージ技術パラメータ 注:マッサージのコアテクニックには、主な介入テクニックとしてプレスとラビングが含まれます。実験に先立ち、研究者らは、天津の腹部マッサージの専門家であるWang Jingui氏から技術を収集した技術テスターの操作を利用しました。 押す力とこする力をそれぞれ6Nと3N、それぞれ22、23、24、25に設定します。 3.マッサージ操作 注:研究者のツボに対する親指の圧力が安定していて長持ちすることを確認してください。 手術後2日目(P8)に、母ネズミを邪魔せずに若いネズミをケージから取り出します。マッサージグループでは、生後8日目から40日目までラットをマッサージします。 若いネズミをマッサージする前に、手を少しこすって、若いネズミの皮膚とほぼ同じ温度に温めます。 この一連のマッサージに従ってください:四肢のツボ→腹部のツボ→腹部。 幼ネズミを左手の手のひらに乗せ、4本指の糸面で幼ネズミの背中の頭から尻尾まで1分間優しく触れて静かにさせます。 以下のラビング手順を実行します。右手の親指と人差し指の腹部を前後にこすります。 前肢を近位端から遠位端まで~30秒間こすり、Quchi(LI11)、Waiguan(SJ5)、Hegu(LI4)のポイントを毎回10回1秒間押します。 後脚を近位端から遠位端まで~30秒間こすり、Yanglingquan(SP9)、Zusanli(ST36)、Sanyinjiao(SP6)、Taichong (LR3)ポイントを10回10回1秒間、合計~5分間押します。 右手の親指でZhongwan(RN12)、Tianshu(ST25)、Guanyuan(CV4)、Qihai(CV6)を押します。各ツボを10回、毎回~1秒間、1分間押します。 若いネズミをうつ伏せにして、右手の親指で腹部のチョンワンポイントを押してこすります。若いラットのへそを中心として、親指を使って時計回りに120x/min~5分間動かします。 最後に、右手の4本の指の糸面を使って、幼ネズミの頭を尻尾にそっと触れ、静かにしてからケージに戻し、母ネズミに餌を与えます。 4.ツボのローカリゼーション 注:2週間以内に生まれたラットの場合、ラットの体重と体長はマウスと同じです。したがって、関連する文献でマウスマッサージ法を使用して、ラットの8〜15日間をマッサージしました24。 2週間から40日後、次の経穴を使用して定期的なラットマッサージでラットを治療します:LI11、SJ5、LI4、SP9、ST36、SP6、LR3、RN12、ST25、CV4、およびCV626。注:ツボの特定の位置については、 表1 とラットのツボの局在の詳細な説明を他の場所26 および 図2 を参照してください。 5.体重と行動テスト 若いラットの体重を毎日P7からP40まで量ります。 P37からP40で平均台の行動実験を行う。平均台(長さ35cm、幅1.5cm、高さ100cm)を用いて若齢ラットの運動バランス機能をテストします。若いネズミを平均台に置き、平均台の反対側にある黒い箱に走らせます。 P37-P39で若いラットに1日3回平均台訓練を行い、P40でテストを実施します。3群の幼ネズミが平均台を通過する時間と、後肢が滑った回数を記録します(図1D)。注:二酸化炭素窒息法を使用してラットを安楽死させます。