Tuina in a Frozen Shoulder Rat Model: An Efficient and Reproducible Protocol

Yingjie Qiao; Yanhong Yang; Jianmin Wang; Muzhen Li; Lijun Zheng; Huadong Li; Shidong Zhang

doi:10.3791/65440

JoVE Journal > Medicine

Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Medicine

Donmuş Omuz Sıçan Modelinde Tuina: Verimli ve Tekrarlanabilir Bir Protokol

Published: July 21, 2023

doi:

10.3791/65440

Yingjie Qiao¹, Yanhong Yang², Jianmin Wang³, Muzhen Li¹, Lijun Zheng¹, Huadong Li³, Shidong Zhang¹

¹College of Acupuncture and Tuina,Shandong University of Traditional Chinese Medicine, ²Department of Tuina,Jinan Massage Hospital, ³Department of Tuina,Shandong University of Traditional Chinese Medicine Affiliated Hospital

Summary

Bu çalışma, bir sıçan modelinde kurulan donmuş omzu tedavi etmek için etkili ve tekrarlanabilir bir Tuina protokolü geliştirmektedir. Bu yaklaşım, donuk omuzlar için Tuina terapi tedavi yönteminin incelenmesine yardımcı olacaktır.

Abstract

Donuk omuz (FS), tanımlanmış optimal tedavisi olmayan yaygın bir durumdur. Çin hastanelerinde FS hastalarını tedavi etmek için kullanılan geleneksel bir Çin tıbbı (TCM) tekniği olan Tuina tedavisi mükemmel sonuçlar göstermiştir, ancak mekanizmaları tam olarak anlaşılamamıştır. Önceki bir çalışmaya dayanarak, bu çalışma bir FS sıçan modeli için bir Tuina protokolü geliştirmeyi amaçladı. 20 SD sıçan rastgele kontrol (C; n=5), FS modeli (M; n=5), FS modeli Tuina tedavisi (MT; n=5) ve FS modeli oral tedavi (MO; n=5) gruplarına ayrıldı. Bu çalışmada FS sıçan modelini oluşturmak için alçı immobilizasyon yöntemi kullanılmıştır. Tuina ve oral deksametazonun glenohumeral eklem hareket açıklığı (ROM) üzerine etkisi değerlendirildi ve histolojik bulgular değerlendirildi. Çalışmamız, Tuina ve oral deksametazonun omuz aktif ROM’unu iyileştirebildiğini ve kapsülün yapısını koruyabildiğini ve Tuina tedavisinin oral deksametazondan daha etkili olduğunu kanıtladığını gösterdi. Sonuç olarak, bu çalışmada oluşturulan Tuina protokolü FS için oldukça etkili olmuştur.

Introduction

Omuzun adeziv kapsüliti olarak da bilinen donuk omuz (FS), omuz ağrısı ve hareket bozuklukları ile karakterize, kendi kendini sınırlayan bir hastalıktır. Tipik olarak 30 ila 70 yaşları arasındaki, ortalama yaşı 50 olan kişileri etkiler ve Çin nüfusunda yaklaşık %5’lik bir prevalansa sahiptir¹. Kadınlarda erkeklere göre 1.6 kat daha fazla FS insidansı olduğu bildirilmektedir². Diyabet, glukoz ve lipid metabolizması bozuklukları veya diğer ilgili hastalıkları olan kişilerde FS prevalansı %10 ile %36 arasında değişmekte olup daha ^{yüksektir2,3}. FS için mevcut klinik tedaviler arasında fizyoterapi, steroid ilaçlar ve cerrahi tedaviler^{yer almaktadır 4}.

Geleneksel bir Çin tıbbı (TCM) tedavisi olan Tuina’nın FS hastalarında omuz ağrısını etkili bir şekilde hafiflettiği ve yaşam kalitelerini iyileştirdiği gösterilmiştir ^5,6. Ancak bu tedavinin altında yatan mekanizmalar tam olarak anlaşılamamıştır. Bu nedenle, Tuina’nın FS tedavisindeki etkilerini ve mekanizmalarını incelemek için hayvan modellerini kullanmak çok önemlidir.

Sıçan omuz eklemi, insan omzuna benzer karmaşık bir yapıya sahiptir ve genellikle FS^7’nin mekanik çalışmalarında kullanılır. FS sıçan modeli, glenohumeral ROM ve kapsül fibrozunda bir düşüş ile karakterizedir⁸. Ayrıca, bu model omuz kapsülünün gözlemlenmesine izin verir ve yaralanmayı onarırken patolojik araştırmalara olanak tanır⁹. Ayrıca, oral kortikosteroidler genellikle FS tedavi araştırmalarında kontrol grubu olarak kullanılır¹⁰. Bu çalışma, FS sıçan modeli için bir Tuina protokolü geliştirmeyi amaçlamaktadır ve Tuina tedavisi ile oral deksametazonun etkinliğini karşılaştırarak Tuina araştırmalarında hayvan deneyleri yapmanın fizibilitesini göstermektedir.

Protocol

Bu çalışma, Shandong Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Bağlı Hastanesi Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır (Sayı: AWE-2022-023). 1. Deney hayvanları Yirmi erkek Sprague-Dawley (SD) sıçanı (7 haftalık, 250-280 g) standart koşullarda (oda sıcaklığı [RT] 20-24 °C, nem% 40-60 ve 12 saat / 12 saat aydınlık / karanlık döngüsü) barındırıldı. 2. Gruplama yöntemi SD sıçanları, her biri 5 sıçandan oluşan kontrol grubu (C), FS modeli kontrol grubu (M), FS modeli Tuina tedavi grubu (MT) ve FS modeli oral tedavi grubu (MO) olarak gruplandırın. Kafes başına 5 sıçan tutun (aynı grup). 7 günlük alışmadan sonra, bir sonraki bölümde anlatıldığı gibi FS’yi taklit etmek için 3 hafta boyunca alçı döküm immobilizasyonu kullanarak M, MT ve MO gruplarındaki sıçanların bir omzunu hareketsiz hale getirin. MT grubundaki sıçanlara bölüm 4’te açıklandığı gibi 2 hafta boyunca Tuina tedavisi uygulayın (Şekil 1). Yetişkin dozajına (0.75 mg / gün) ve sıçanın insan vücudu yüzey alanına oranına (0.018) bağlı olarak her kilogram sıçan (0.0675 mg / gün) için gerekli deksametazon dozunu hesaplayın. MO grubundaki sıçanlara 2 hafta boyunca sabah 7: 00’de 0.067 mg / kg / gün günlük intragastrik deksametazon çözeltisi uygulayın.NOT: Bu çalışmada Tuina protokolünün etkisini doğrulamak için bu gruplama yöntemini kullanın. Gruplama yöntemini farklı çalışmalarda deneysel amaçlara göre uygular. 3. FS modelinin geliştirilmesi Sıçanları tribromoetanol (250 mg / kg, intraperitoneal enjeksiyon ile) kullanarak uyuşturun11.NOT: Kurumun etik kurul gerekliliklerine uygun olarak, tribomoetanol (10 g) ve tert-amil alkolden (10 mL) oluşan bir stok çözeltisi 4 °C’de saklanmıştır. Kullanmadan önce damıtılmış su ile% 2’ye seyreltildi. Sıçanların sağ omzuna ve göğsüne alçıya batırılmış bandajlar uygulayın, sağ ön ayağı 3 hafta boyunca omuz ekleminin 90° iç rotasyonunda tutun (Şekil 2)12.NOT: Yürüme, yeme ve içme gibi normal fizyolojik aktiviteleri gerçekleştirebildiklerinden emin olmak için fareleri izleyin. Sıçanlar normal fizyolojik aktiviteleri gerçekleştiremezlerse alçı bandajı tekrar sabitleyin. Sıçanlarda sağ omuz ekleminde sertlik, sağ üst ekstremite kasılması, kas atrofisi ve topallama gibi semptomların gelişimini gözlemleyerek FS modelinin başarılı bir şekilde kurulduğunu onaylayın13. 4. Tuina yöntemi NOT: Prosedür boyunca, araştırmacı kişisel koruyucu ekipman giymelidir. Tüm manipülasyonları yalnızca tek bir profesyonel Tuina doktoru yapmalıdır (Şekil 3, Şekil 4 ve Şekil 5). Bir mekanoreseptör ve bir bilgisayar içeren Akıllı masaj tekniği parametre belirleme sistemi ile eğitin (Şekil 3A).Mekanoreseptör üzerinde manipülasyonlar gerçekleştirin ve parametreleri yazılım aracılığıyla görüntülenen üç yönde zorlayın (Şekil 3B). Döner yoğurma yöntemini 0,5 kg kuvvette ve 100-120 kez/dak frekansta döndürme hareketinde gerçekleştirmek için başparmak parmağınızı kullanın (Şekil 3C). Nokta basma yöntemini 0.5 kg’lık bir kuvvette gerçekleştirmek için başparmak ucunu kullanın (Şekil 3D). 4.1.2 ve 4.1.3 adımlarında belirtilen mekanik ekranı 1 dakika boyunca koruyarak sıçanlar üzerinde Tuina uygulayın. Fareyi sakinleşene kadar tutun (~ 2 dakika). Ardından, manipülasyonu gerçekleştirin. Fareyi yanal yaslanmış pozisyona getirin, ancak pozisyon farklı manipülasyon yöntemlerine göre değişebilir. Sıçanın sağ ön ayağını sıkıştırmak için sağ işaret parmağını ve orta parmağı kullanın ve sıçanın omuz eklemi, dirsek eklemi ve humerusun konumlarını belirlemek için birkaç kez esnetin ve uzatın. Sıçanın sağ omzunu, ön ayağını ve sırtını, başparmak hamuru ile saat yönünde döndürerek 0,5 kg kuvvetinde ve 3 dakika boyunca 100-120 kez/dk sıklıkta yoğurun (Şekil 4A-C).Ön bacak kaslarını yanal yaslanmış pozisyonda manipüle edin. Omuz ve sırt kaslarını yüzüstü pozisyonda manipüle edin. Akupunktur noktası LI15 (Jianyu), SI11 (Tianzong), HT01 (Jiquan,) ve LI11’e (Quchi) başparmak ucu ile 30 kg’lık bir kuvvetle akupunktur noktası başına 0.5 kez dikey olarak bastırın (Şekil 4D-G).Her akupunktur noktasının konumunu tanımlamak için sıçan-akupunktur noktası atlasını kullanın (Şekil 5)14,15. Akromiyal ucun ön-inferior depresyonunda bulunan LI15’e yüzüstü pozisyonda basın. Skapular omurganın orta noktasındaki infraspinatus fossa’ya çöküntüde bulunan SI11’e yüzüstü pozisyonda basın. Sırtüstü pozisyonda koltuk altı merkezinde bulunan HT01’e basın. Lateral yaslanmış pozisyonda kübital kıvrımın lateral ucundaki ekstansör carpi radialis’in depresyon medialinde bulunan LI11’e basın. Omuz eklemini sol başparmak ve orta parmakla tutun ve ön ayağı addüksiyon, abdüksiyon, ön ekstansiyon ve posterior ekstansiyon pozisyonlarında 10 saniye boyunca gerin (Şekil 4H-K).NOT: Bu germe yöntemi sıçanlarda direnç göstermeden gerçekleştirilmelidir. Sıçan tedirgin olursa Tuina prosedürünü duraklatın. Fareyi sakinleştirmek için 10 saniye boyunca okşayın ve ardından denemeye devam edin. İşlemi 2 hafta boyunca günlük olarak gerçekleştirin. 5. Glenohumeral ROM ölçümü NOT: Eklem kapsül dokusunun dejenerasyonunu önlemek için ölçüm işleminin mümkün olduğunca çabuk tamamlanması önemlidir. Sıçanı aşırı dozda tribromoetanol (3x başlangıç dozu, intraperitoneal enjeksiyon ile) ile feda ettikten sonra, kürek kemiğinin alt kenarını açığa çıkararak, kürek kemiğini ve humerusun proksimal üçte ikisini blok halinde çıkarın. Humerus şaftı boyunca humerus kafasına bir enjeksiyon iğnesi (1.2 cm x 0.45 mm) sokun. Steril bir cerrahi tabaka ile sarılmış plastik köpük üzerine kürek kemiğinin üst ve alt köşelerine dikey olarak iki enjeksiyon iğnesi yerleştirin. Humerus şaftındaki enjeksiyon iğnesine ince bir iplik takın ve humerus şaftına paralel hale getirmek için diğer ucundan 5 g’lık bir kuvvetle çekin. Kürek kemiğinin alt kenarı ile humerus şaftı arasındaki açıyı ölçün (Şekil 6).NOT: Güvenilir sonuçlar elde etmek için, ölçümleri ayrı bir araştırmacıya yaptırın. Bir istatistiksel analiz yazılımı uygulaması kullanarak verileri ortalama ±standart sapma (SD) olarak raporlayın.NOT: Burada SPSS yazılımı (SPSS, sürüm 25.0) kullanılmıştır. Tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanarak gruplar arasındaki farklılıkları analiz edin. Uygun yazılımı kullanarak çubuk grafikleri elde edin.NOT: Burada GraphPad Prism 8 kullanılmıştır. Ölçümden sonra H&E ve Masson boyamasını kullanarak kapsül patolojisini değerlendirin. 6. Bölüm hazırlığı Glenohumeral ROM’u değerlendirdikten sonra, tüm numuneleri 3 gün boyunca% 4 PFA’da sabitleyin, ardından 2 ay daha EDTA (pH 7.2) çözeltisinde dekalsifikasyon yapın. Dehidrasyondan sonra, numuneleri içeren gömülü doku bloklarını 5 μm’lik dilimlerhalinde dilimleyin 16. Dilimi 65 °C’de 60 dakika kurutun. Dilimi mumdan arındırın. Dilimi ksilen I, ksilen II ve ksilen III içinde 7 dakika, ardından azalan bir etanol serisi (susuz etanol, 5 dakika; etanol, 2 dakika; etanol, 2 dakika ve etanol, 2 dakika) ve son olarak 2 dakika ultra saf suda bekletin. 7. H & E boyama Bölümleri hematoksilen kullanarak 5 dakika boyayın, 3 saniye boyunca% 1 hidroklorik asit etanol ile durulayın ve 5 dakika akan su ile yıkayın. Bölümü 3 dakika boyunca eozin ile boyayın ve musluk suyuyla yıkayın. Kesiti bir etanol serisine ( etanol I, 3 s; etanol II, 3 s; susuz etanol I, 3 s ve susuz etanol II, 1 dk) batırın ve ardından bir ksilen serisine daldırın (ksilen I, 1 dk; ksilen II, 1 dk). Her numuneye bir damla nötr sakız dolgu macunu koyun. Her numuneyi bir kapak camı ile kapatın. Ters çevrilmiş bir floresan mikroskobu kullanarak görüntüleri toplayın (Ölçek çubuğu = 100 μm). 8. Masson boyama İmmünohistokimyasal bir kalem kullanarak, bölümlerin etrafına bir daire çizin ve ardından kesitleri Bouin solüsyonunda 37 ° C’de 2 saat boyunca mordan haline getirin. Daha sonra, sarı renk kaybolana kadar bölümleri suyla yıkayın. Numunelere lapis lazuli mavisi boya ile 3 dakika muamele edin ve ardından damıtılmış suyla yıkayın. Bölümleri 2 dakika hematoksilen (Mayer) ile boyadıktan sonra, bölümleri asidik etanol farklılaştırma çözeltisinde 3 saniye boyunca işlemden geçirin. Ardından, bölümleri akan suda 10 dakika yıkayın. Bölümleri 10 dakika boyunca ponceau macenta boya çözeltisi ile boyayın ve ardından suyla yıkayın. Bölümleri 10 dakika boyunca fosfomolibdik asit çözeltisine daldırın. Bölümlere 5 dakika anilin mavisi boyama solüsyonu ekleyin ve ardından 2 dakika boyunca zayıf bir asit çalışma solüsyonu ile yıkayın. Kurutun ve bölümleri adım 7.3’te açıklandığı gibi şeffaf hale getirin. Her bölüme bir damla nötr sakız sızdırmazlık maddesi koyun ve bir kapak camı ile örtün. Bölümleri kuruması için çeker ocakta bırakın. Görüntüleri adım 7.5’te açıklandığı gibi toplayın.

Representative Results

FS modelinin başarısını veya başarısızlığını değerlendirmek için sıçanların fiziksel aktivitesi gözlendi. Daha önceki bir çalışma, alçı immobilizasyonunun normal sıçanlara kıyasla kat edilen mesafeyi ve yürüme hızını önemli ölçüde azalttığını göstermiştir17. Başka bir araştırma, FS’nin kat edilen mesafeyi etkilemediğini ve topallamanın en yaygın başvuru semptomu olduğunu öne sürdü13. Bu çalışma, modelleme sonrası sıçanlarda sağ omuz ekleminde sertlik, sağ üst ekstremitede kasılma, kas atrofisi ve topallama gösterdi. MT ve MO gruplarındaki bu lezyonlar 2 haftalık müdahale ile tamamen düzeldi. Ancak M grubunda anlamlı bir değişiklik olmadı. Tuina’nın FS’deki etkinliğini değerlendirmek için birincil kriter glenohumeral ROM18’in ölçülmesidir. Ortalama glenohumeral ROM değerlerinin C grubunda 149.3° ± 5.9°, M grubunda 111.1° ± 3.9°, MT grubunda 128.5° ± 2.8° ve MO grubunda 119.56° ± 2.9° olduğu gözlendi. Şekil 7’de gösterildiği gibi, M grubundaki sıçanların glenohumeral ROM’u, C grubundakinden önemli ölçüde daha düşüktü (P < 0.0001). Ayrıca, MT grubu ve MO grubundaki ROM, M grubundan anlamlı olarak yüksekti (P < 0.05, P < 0.0001). Bununla birlikte, MO grubundaki ROM, MT grubundakinden anlamlı olarak daha düşüktü (P < 0.0001). Bu bulgu, Tuina'nın FS sıçanlarında omuz eklemi fonksiyonunu önemli ölçüde iyileştirebileceğini düşündürmektedir. Ek olarak, H & E boyama ve Masson boyama, Tuina’nın yapıyı korumadaki ve kapsüldeki fibrozu azaltmadaki etkilerini daha fazla gösterebilir. Gözlemi kolaylaştırmak için, histolojik bulgular için glenohumeral eklemin kapsülü kullanıldı. Omuz eklemi kapsülü sinovyal ve fibröz tabakalardanoluşur 19. H&E boyamasında FS’nin tipik özellikleri olan M grubunda sinoviyosit proliferasyonu, düzleşmiş sinovyal kıvrımlar, eritrosit stazı ve vasküler proliferasyon saptandı (Şekil 8A,B). Bu özellikler Tuina ve oral deksametazon tedavisinden sonra bir dereceye kadar azalmıştır (Şekil 8C, D). MT grubu ile karşılaştırıldığında, MO grubu da çok fazla sinovyal hücre gösterdi. Masson boyama, her gruptaki lif demetlerinin düzenini gösterdi (sarı oklar). Kapsül, düzgün bir yönde düzenlenmiş lif demetlerine sahip gevşek bir retiküler lif ağı içerir (Şekil 8E). M grubunda, lif demetleri düzensiz olarak düzenlenmişti ve kapsül fibrozisini gösteriyordu (Şekil 8F). MT grubundaki sıçanların kapsülleri, lif demetlerinin düzgün ve net bir şekilde tabakalandığını, ancak MO grubunda hafif düzensiz kaldığını gösterdi (Şekil 8G, H). Şekil 1: FS modelinin oluşturulması için protokol ve Tuina müdahalesi. Sıçanlar 7 gün boyunca adaptif beslenme, 21 gün boyunca FS modeli oluşturma ve 14 gün boyunca günlük Tuina tedavisi uygulandı. 36. günde, tüm sıçanlar sakrifiye edildi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. Şekil 2: FS’nin bir sıçan modelini oluşturmak için döküm immobilizasyonu. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. Şekil 3: Manipülasyonun kantitatif kontrolü . (A) Akıllı masaj tekniği parametre belirleme sistemi. (B) X yönü boyunca paralel kuvvet, Y yönü boyunca uzunlamasına kuvvet ve Z yönü boyunca dikey kuvvet olarak üç kuvvet ölçülebilir. (C) Döner yoğurma yönteminin gücü. Kırmızı eğri, stabilize edilmiş dikey kuvveti (0,5 kg) temsil eder. Turuncu eğri, düzenli paralel kuvveti temsil eder. Beyaz eğri, normal uzunlamasına kuvveti temsil eder. (D) Nokta presleme yönteminin gücü. Kırmızı eğri dikey kuvveti (0,5 kg) temsil eder. Turuncu ve beyaz eğriler paralel olmayan ve uzunlamasına kuvvetleri temsil eder. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. Şekil 4: Tuina terapisinde kullanılan manipülasyon. (A-C) Sağ omuzların, ön ayakların ve sırtın kaslarını yoğurun. (D-G) LI15, SI11, HT01 ve LI11’e nokta basarak basın. (H-K) Ön ayağı addüksiyon, abdüksiyon, ön ekstansiyon ve posterior ekstansiyon pozisyonlarında gerin. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. Şekil 5: Sıçanlarda LI15, SI11, HT01 ve LI11’in anatomik pozisyonları. ● Yan yüzey, ○ Medial yüzey. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. Şekil 6: Glenohumeral ROM ölçümü. Humerus şaftına sokulan bir enjeksiyon iğnesine ince bir iplik takılır ve humerus şaftına paralel hale getirmek için diğer ucundan 5 g’lık bir kuvvetle çekilir. Kürek kemiğinin alt kenarı ile humerus şaftı arasındaki açı glenohumeral ROM olarak ölçülür. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. Şekil 7: Üç sıçan grubunda Glenohumeral ROM. Değerler S.D.± ortalamadır, n = 5. Anlamlı farklılıklar tek yönlü ANOVA ile gösterilir (a P < 0.001 ve bP < 0.0001). Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. Şekil 8: Omuz kapsülünün histolojik bulguları. (A,E) Kontrol grubu normal bir kapsül yapısı içerir (H&E ve Masson boyama). (B,F) FS model grubu, kapsülün yapısındaki değişiklikleri şu şekilde gösterir: düzleştirilmiş sinovyal kıvrımlar, kapsül fibrozu ve bozulmuş lif demetleri (H & E ve Masson boyama). (C,G) olarak adlandırılır. Tuina grubu ile birleştirilen FS modeli, kapsülün yapısının normale yakın olduğunu ve fibrozun belirgin olmadığını göstermektedir (H & E ve Masson boyama). (D,H) Oral deksametazon ile kombine edilen FS modeli, kapsülün yapısının normale yakın olduğunu ve fibrozun belirgin olduğunu gösterir (H & E ve Masson boyama). Ölçek çubuğu = 100 μm. HH: humerusun başı; siyah ok: sinovyal kıvrımlar; kırmızı ok: eritrosit stazı ve vasküler proliferasyon; Sarı ok: lif demetleri. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Discussion

İlk kritik adım model seçimidir. Primer FS modelinin uygulanmasındaki zorluk nedeniyle, FS sıçan modellerini oluşturmak için sıklıkla alçı immobilizasyon ve cerrahi internal fiksasyon kullanılır ^9,12. Omuz hareketliliğinin en ciddi kısıtlaması ve kapsülün fibrozisi, 3 hafta boyunca alçı immobilizasyonu ile oluşturulan FS modelinde^{gözlendi 12,20}. Bu çalışmada, FS modelinin başarı oranları %100 başarı ile mükemmeldi.

İkinci kritik adım, bu protokolde kullanılan manipülasyonlardır. Bu çalışmada üç manipülasyon (yoğurma, presleme ve germe) kullanılmıştır. Kasları gevşetmek için omuz, kürek kemiği ve üst kola yumuşak doku yoğurma manipülasyonu uygulandı. FS ^5,21 için klinik pratikte en sık kullanılan LI15, SI11, HT01 ve LI11 gibi akupunktur noktalarına basınç uygulanarak presleme manipülasyonu yapıldı. LI15, SI11 ve HT01, omuz kapsülünün etrafındaki pozisyonlarda bulunur ve ROM ve omuz fonksiyonunu^{iyileştirmede etkili olabilir 22}. LI11 genellikle üst ekstremite motor bozukluğu için kullanılır ve LI15 ile aynı meridyende bulunur. Bu akupunktur noktası eşleştirme yöntemi, LI15^23’ün etkinliğini artırmaya yardımcı olur. Tam gevşemeyi takiben, fonksiyonel aktiviteleri geri kazandırmak için germe teknikleri kullanıldı.

Bu protokoldeki olası sorun, sıçanların Tuina sırasında yoğun direnç göstermesidir, bu da sıçanların toleransını aşmaktan ziyade korkudan kaynaklanabilir. Bu noktada, sıçanlar sakinleşene kadar manipülasyonlar durdurulmalıdır (10 saniye boyunca okşayarak sıçanları sakinleştirir). Ek olarak, gerilmenin derecesi sıçanların semptomlarına göre ayarlanmalıdır. Başlangıçta, omuz ekleminin sınırlaması açıktı ve germe genliği küçüktü. Müdahale ile birlikte, sıçanların omuz eklem fonksiyonu yavaş yavaş iyileşti ve gerilmenin genliği giderek arttı. Standart, sıçanların germe yöntemini direnç göstermeden kabul edebilmesidir. Son olarak, sıçanların belirli bir derecede saldırganlığı vardır ve Tuina sıçanlarla uzun süreli temas gerektirir, bu nedenle kişisel koruyucu ekipman giymek önemlidir.

Manipülasyonun kantitatif kontrolü, Tuina deneylerinde en zor olanıdır. Tek bir manipülasyonun gücünü ve sıklığını kontrol etmek için bir masaj manipülasyon simülatörü kullanılabilirken, birden fazla manipülasyon ve tedavi bölgesi söz konusu olduğunda bu yöntem sınırlıdır^24,25. Klinik uygulamada, Tuina tipik olarak doğrudan uygulayıcılar tarafından gerçekleştirilir ve bu çalışmada tıbbi ekipmana müdahale etmek zordu. Stimülasyonu kontrol etmek için, Tuina’nın eğitimini standartlaştırmak için akıllı masaj tekniği parametre belirleme sistemi kullanılabilir. Eğitimden sonra, araştırmacı her sıçana bir dereceye kadar aynı kuvveti uygulayabilir. Bu protokolün en büyük sınırlaması, manipülasyonların tamamen kontrol edilememesidir.

TCM Tuina terapisi, farklı manipülasyon ve tedavi bölgesi kombinasyonları kullanan hastanelerdeki çeşitli doktorlarla Çin genelinde zengin bir kullanım geçmişine sahiptir. Bu nedenle, hem hayvan deneyleri hem de klinik çalışmalar için tekrarlanabilir ve etkili protokoller oluşturmak önemlidir. Bu çalışmada, kullanılan manipülasyonlar ve akupunktur noktaları, klinik deneyimimizi FS hayvan modeli^21’in özellikleriyle birleştiren ekibimiz tarafından yapılan önceki bir çalışmaya dayanmaktadır. Bu çalışma, FS sıçanlarında omuz eklemi fonksiyonunu iyileştirmede ve kapsül fibrozunu azaltmada geliştirilen Tuina protokolünün etkinliğini göstermiştir. Bu bulgular, Tuina tedavisinin altında yatan mekanizmalar hakkında daha fazla araştırma için bir temel sağlar. Ayrıca, protokol FS için alternatif tıbbi tedavilerin etkinliğini araştırmakla ilgilenen araştırmacılar için yararlı olabilir.

Daha önceki bir çalışma, fibroz üzerindeki Tuina müdahalesinin mekanizmasının, MMP-1 / TIMP-1 dengesini düzenlerken TGF-β ve CTGF’nin aşağı regülasyonu ile ilişkili olabileceğini ve böylece hücre dışı matris (ECM) üretimini hafiflettiğini ^bulmuştur26. Tuina’nın omuz kapsülünün fibrozu üzerindeki etkisi, çeşitli mekanizmaların düzenlenmesi yoluyla sağlanabilir. Bununla birlikte, bu iyileştirmede yer alan mekanizmaları tam olarak anlamak için daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır.

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışma, Jinan Şehrindeki 2020 Bilim ve Teknoloji Geliştirme Planı (Hibe Numarası 202019059), Shandong Eyaleti Geleneksel Çin Tıbbı Bilim ve Teknoloji Projesi (Hibe Numarası 2021Q080) ve Qilu Geleneksel Çin Tıbbı Okulu Kalıtım Projesi (Hibe Numarası [2022]93) tarafından desteklenmiştir.

Materials

4% paraformaldehyde	Solarbio	P1110
Embedding machine	Changzhou Paisijie Medical Equipment Co., Ltd	BM450A
Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA)	Solarbio	E1171
Hematoxylin eosin (HE) staining kit	Sparkjade	EE0012
Intelligent-massage technique parameter determination system	Shanghai Dukang Intrument Equipment Co. Ltd	ZTC-
Microtome	Leica	531CM-Y43
Modified Masson Trichrome Staining Solution	Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd	R20381-8	Bouin 50 mL; lapis lazuli blue dye 50 mL; Hematoxylin (Mayer) 50 mL; acidic ethanol differentiation solution 50 mL; ponceau magenta dye solution 50 mL; phosphomolybdic acid solution 50 mL; aniline blue staining solution 50 mL; weak acid 50 mL
Tribromoethanol	Macklin	T903147-5

References

Li, W., LU, N. Z., Xu, H. L., Wang, H. F., Huang, J. Case control study of risk factors for frozen shoulder in China. International Journal of Rheumatic Diseases. 18 (5), 508-513 (2015).
Degreef, I., Steeno, P., De Smet, L. A survey of clinical manifestations and risk factors in women with Dupuytren’s disease. Acta Orthopaedica Belgica. 74 (4), 456-460 (2008).
Tighe, C. B., Oakley, W. S. The prevalence of a diabetic condition and adhesive capsulitis of the shoulder. Southern Medical Journal. 101 (6), 591-595 (2008).
Cho, C. H., Bae, K. C., Kim, D. H. Treatment strategy for frozen shoulder. Clinics in Orthopedic Surgery. 11 (3), 249-257 (2019).
Liu, M., et al. Effects of massage and acupuncture on the range of motion and daily living ability of patients with frozen shoulder complicated with cervical spondylosis. American Journal of Translational Research. 13 (4), 2804-2812 (2021).
Ai, J., Dong, Y. K., Tian, Q. D., Wang, C. L., Fang, M. Tuina for periarthritis of shoulder: A systematic review protocol. Medicine. 99 (11), e19332 (2020).
Norlin, R., Hoe-Hansen, C., Oquist, G., Hildebrand, C. Shoulder region of the rat: anatomy and fiber composition of some suprascapular nerve branches. The Anatomical Record. 239 (3), 332-342 (1994).
Okajima, S. M., et al. Rat model of adhesive capsulitis of the shoulder. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (139), 58335 (2018).
Zhao, H. K., et al. Tetrandrine inhibits the occurrence and development of frozen shoulder by inhibiting inflammation, angiogenesis, and fibrosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 140, 111700 (2021).
nar, B. M., Battal, V. E., Bal, N., Güler, &. #. 2. 2. 0. ;. &. #. 2. 1. 4. ;., Beyaz, S. Comparison of efficacy of oral versus intra-articular corticosteroid application in the treatment of frozen shoulder: An experimental study in rats. Acta Orthopaedica et Traumatologica Turcica. 56 (1), 64-70 (2022).
Dias, Q. M., Rossaneis, A. C., Fais, R. S., Prado, W. A. An improved experimental model for peripheral neuropathy in rats. Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 46 (3), 253-256 (2013).
Kim, D. H., et al. Characterization of a frozen shoulder model using immobilization in rats. Journal of Orthopaedic Surgery and Research. 11 (1), 160 (2016).
Feusi, O., et al. Platelet-rich plasma as a potential prophylactic measure against frozen shoulder in an in vivo shoulder contracture model. Archives of Orthopaedic and Trauma Surgery. 142 (3), 363-372 (2022).
Yin, C. S., et al. A proposed transpositional acupoint system in a mouse and rat model. Research in Veterinary Science. 84 (2), 159-165 (2008).
Guo, X. R., et al. Study on the regulatory mechanism of electroacupuncture based on thyroid pathway for mammary gland hyperplasia rats. Zhongguo Zhen Jiu. 38 (8), 857-863 (2018).
Feldman, A. T., Wolfe, D. Tissue processing and hematoxylin and eosin staining. Methods in Molecular Biology. 1180, 31-43 (2014).
Taguchi, H., et al. A rat model of frozen shoulder demonstrating the effect of transcatheter arterial embolization on angiography, histopathology, and physical activity. Journal of Vascular and Interventional Radiology: JVIR. 32 (3), 376-383 (2021).
Oki, S., et al. Generation and characterization of a novel shoulder contracture mouse model. Journal of Orthopaedic Research. 33 (11), 1732-1738 (2015).
Kubo, H., et al. Histologic examination of the shoulder capsule shows new layer of elastic fibres between synovial and fibrous membrane. Journal of Orthopaedics. 22, 251-255 (2020).
Cho, C. H., Lho, Y. M., Hwang, I., Kim, D. H. Role of matrix metalloproteinases 2 and 9 in the development of frozen shoulder: human data and experimental analysis in a rat contracture model. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 28 (7), 1265-1272 (2019).
Wang, J. M., et al. Efficacy and safety of Tuina and intermediate frequency electrotherapy for frozen shoulder: MRI-based observation evidence. American Journal of Translation Research. 15 (3), 1766-1778 (2023).
Ben-Arie, E., et al. The effectiveness of acupuncture in the treatment of frozen shoulder: A systematic review and meta-analysis. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2020, 9790470 (2020).
Zou, F., et al. The impact of electroacupuncture at hegu, shousanli, and quchi based on the theory "Treating flaccid paralysis by Yangming alone" on stroke patients’ EEG: A pilot study. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2020, 8839491 (2020).
Lv, T. T., et al. Using RNA-Seq to explore the repair mechanism of the three methods and three-acupoint technique on DRGs in sciatic nerve injured rats. Pain research & Management. 2020, 7531409 (2020).
Niu, F., et al. Spinal tuina improves cognitive impairment in cerebral palsy rats through inhibiting pyroptosis induced by NLRP3 and Caspase-1. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 1028909 (2021).
Na, Z., et al. The combination of electroacupuncture and massage therapy alleviates myofibroblast transdifferentiation and extracellular matrix production in blunt trauma-induced skeletal muscle fibrosis. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 5543468 (2021).

Play Video

PDF

DOI

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite This Article

Qiao, Y., Yang, Y., Wang, J., Li, M., Zheng, L., Li, H., Zhang, S. Tuina in a Frozen Shoulder Rat Model: An Efficient and Reproducible Protocol. J. Vis. Exp. (197), e65440, doi:10.3791/65440 (2023).

Automatically Generated