Tuina in a Frozen Shoulder Rat Model: An Efficient and Reproducible Protocol

Yingjie Qiao; Yanhong Yang; Jianmin Wang; Muzhen Li; Lijun Zheng; Huadong Li; Shidong Zhang

doi:10.3791/65440

JoVE Journal > Medicine

Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Medicine

Tuina في نموذج فأر الكتف المجمد: بروتوكول فعال وقابل للتكرار

Published: July 21, 2023

doi:

10.3791/65440

Yingjie Qiao¹, Yanhong Yang², Jianmin Wang³, Muzhen Li¹, Lijun Zheng¹, Huadong Li³, Shidong Zhang¹

¹College of Acupuncture and Tuina,Shandong University of Traditional Chinese Medicine, ²Department of Tuina,Jinan Massage Hospital, ³Department of Tuina,Shandong University of Traditional Chinese Medicine Affiliated Hospital

Summary

تطور هذه الدراسة بروتوكول Tuina الفعال والقابل للتكرار لعلاج الكتف المتجمد الذي تم إنشاؤه في نموذج الفئران. سيساعد هذا النهج في دراسة طريقة علاج Tuina للأكتاف المتجمدة.

Abstract

الكتف المتجمد (FS) هو حالة شائعة مع عدم وجود علاج مثالي محدد. أظهر علاج Tuina ، وهو تقنية الطب الصيني التقليدي (TCM) المستخدمة لعلاج مرضى FS في المستشفيات الصينية ، نتائج ممتازة ، لكن آلياته ليست مفهومة تماما. بناء على دراسة سابقة ، يهدف هذا العمل إلى تطوير بروتوكول Tuina لنموذج الفئران FS. قمنا بتقسيم 20 فأرا SD بشكل عشوائي إلى مجموعات تحكم (C ؛ n = 5) ، نموذج FS (M ؛ n = 5) ، علاج Tuina نموذج FS (MT ؛ n = 5) ، وعلاج فموي لنموذج FS (MO ؛ n = 5). استخدمت هذه الدراسة طريقة تجميد الصب لإنشاء نموذج الفئران FS. تم تقييم تأثير Tuina و dexamethasone عن طريق الفم على نطاق الحركة الحقانية العضدية (ROM) ، وتم تقييم النتائج النسيجية. أظهرت دراستنا أن Tuina و dexamethasone عن طريق الفم كانا قادرين على تحسين ROM النشط للكتف والحفاظ على بنية الكبسولة ، حيث أثبت علاج Tuina أنه أكثر فعالية من ديكساميثازون عن طريق الفم. وختاما، كان بروتوكول توينا المنشأ في هذه الدراسة فعالا للغاية بالنسبة للخدمات المالية.

Introduction

الكتف المتجمد (FS) ، المعروف أيضا باسم التهاب المحفظة اللاصق للكتف ، هو مرض ذاتي الحد يتميز بألم الكتف وعجز الحركة. يصيب عادة الأشخاص الذين تتراوح أعمارهم بين 30 و 70 عاما ، بمتوسط عمر 50 عاما ، ويبلغ معدل انتشاره حوالي 5٪ بين السكان الصينيين¹. وتفيد التقارير بأن معدل الإصابة ب FS لدى الإناث أعلى بمقدار 1.6 مرة مقارنة بالذكور². معدل انتشار FS أعلى لدى الأشخاص المصابين بداء السكري واضطرابات استقلاب الجلوكوز والدهون أو الأمراض الأخرى ذات الصلة ، ويتراوح بين 10٪ و 36٪ ^2,3. تشمل العلاجات السريرية الحالية ل FS العلاج الطبيعي وأدوية الستيرويد والعلاجات الجراحية⁴.

ثبت أن Tuina ، وهو علاج بالطب الصيني التقليدي (TCM) ، يخفف بشكل فعال من آلام الكتف لدى مرضى FS ، مما يحسن نوعية حياتهم ^5,6. ومع ذلك ، فإن الآليات الأساسية لهذا العلاج ليست مفهومة جيدا. ومن ثم، فإن استخدام النماذج الحيوانية لدراسة آثار وآليات توينا في معالجة الخدمات المالية أمر بالغ الأهمية.

يحتوي مفصل كتف الفئران على بنية معقدة مماثلة لتلك الموجودة في الكتف البشري وغالبا ما يستخدم في الدراسات الميكانيكية ل FS⁷. يتميز نموذج الفئران FS بانخفاض في ROM الحقاني العضدي وتليف الكبسولة⁸. علاوة على ذلك ، يسمح هذا النموذج بمراقبة كبسولة الكتف ويتيح إجراء أبحاث مرضية أثناء إصلاح الإصابة⁹. علاوة على ذلك ، غالبا ما تستخدم الكورتيكوستيرويدات الفموية كمجموعة تحكم في أبحاث علاج FS¹⁰. تهدف هذه الدراسة إلى تطوير بروتوكول Tuina لنموذج الفئران FS وتوضح جدوى إجراء التجارب على في أبحاث Tuina من خلال مقارنة فعالية علاج Tuina وديكساميثازون عن طريق الفم.

Protocol

تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات التابعة للمستشفى التابع لجامعة شاندونغ للطب الصيني التقليدي (الرقم: AWE-2022-023). 1. التجارب تم إيواء عشرين ذكرا من فأر Sprague-Dawley (SD) (7 أسابيع من العمر ، 250-280 جم) في ظروف قياسية (درجة حرارة الغرفة [RT] 20-24 درجة مئوية ، الرطوبة 40٪ -60٪ ، ودورة الضوء / الظلام 12 ساعة / 12 ساعة). 2. طريقة التجميع قم بتجميع فئران SD في مجموعة التحكم (C) ، ومجموعة التحكم في نموذج FS (M) ، ومجموعة معالجة Tuina النموذجية FS (MT) ، ومجموعة العلاج الفموي النموذجية FS (MO) ، ويتكون كل منها من 5 فئران. احتفظ ب 5 فئران لكل قفص (نفس المجموعة). بعد 7 أيام من التأقلم ، شل حركة كتف واحد من الفئران في مجموعات M و MT و MO باستخدام تجميد الجبس لمدة 3 أسابيع لتقليد FS كما هو موضح في القسم التالي. إدارة علاج Tuina للفئران في مجموعة MT لمدة أسبوعين ، كما هو موضح في القسم 4 (الشكل 1). احسب الجرعة المطلوبة من ديكساميثازون لكل كيلوغرام من الفئران (0.0675 مجم / يوم) بناء على جرعة البالغين (0.75 مجم / يوم) ونسبة الفئران إلى مساحة سطح جسم الإنسان (0.018). تطبيق محلول ديكساميثازون داخل المعدة يوميا للفئران في مجموعة MO عند 0.067 ملغم/ كغ/يوم الساعة 7:00 صباحا لمدة 2 أسابيع.ملاحظة: استخدم طريقة التجميع هذه لتأكيد تأثير بروتوكول Tuina في هذه الدراسة. أداء طريقة التجميع وفقا للأغراض التجريبية في الدراسات المختلفة. 3. تطوير نموذج الخدمة الثابتة تخدير الفئران باستخدام ثلاثي برومو إيثانول (250 مغ/كغ، عن طريق الحقن داخل الصفاق)11.ملاحظة: وفقا لمتطلبات لجنة الأخلاقيات في المؤسسة ، تم تخزين محلول مخزون يتكون من ثلاثي الإيثانول (10 جم) وكحول ثلاثي الأميل (10 مل) عند 4 درجات مئوية. قبل الاستخدام ، تم تخفيفه إلى 2 ٪ بالماء المقطر. ضع الضمادات المبللة بالجص على الكتف الأيمن وصدر الفئران ، مع الحفاظ على الطرف الأمامي الأيمن عند 90 درجة من الدوران الداخلي لمفصل الكتف لمدة 3 أسابيع (الشكل 2)12.ملاحظة: راقب الفئران للتأكد من قدرتها على أداء الأنشطة الفسيولوجية الطبيعية مثل المشي والأكل والشرب. إصلاح ضمادة الجص إذا كانت الفئران لا تستطيع القيام بأنشطة فسيولوجية طبيعية. تأكيد الإنشاء الناجح لنموذج FS من خلال ملاحظة تطور الأعراض مثل تصلب مفصل الكتف الأيمن ، وتقلص الطرف العلوي الأيمن ، وضمور العضلات ، والعرج في الفئران13. 4. طريقة توينا ملاحظة: طوال الإجراء ، يجب على المحقق ارتداء معدات الحماية الشخصية. يجب على طبيب Tuina محترف واحد فقط إجراء جميع عمليات التلاعب (الشكل 3 والشكل 4 والشكل 5). تدرب بواسطة نظام تحديد معلمة تقنية التدليك الذكي ، والذي يتضمن مستقبلات ميكانيكية وجهاز كمبيوتر (الشكل 3 أ).إجراء التلاعب على معلمات المستقبلات الميكانيكية والقوة في ثلاثة اتجاهات معروضة من خلال البرنامج (الشكل 3 ب). استخدم إصبع الإبهام لأداء طريقة العجن الدوار في حركة دوارة بقوة 0.5 كجم وتردد 100-120 مرة / دقيقة (الشكل 3C). استخدم طرف إصبع الإبهام لأداء طريقة الضغط على النقطة بقوة 0.5 كجم (الشكل 3 د). أداء Tuina على الفئران عن طريق الحفاظ على العرض الميكانيكي المذكور في الخطوتين 4.1.2 و 4.1.3 لمدة 1 دقيقة. امسك الجرذ حتى يهدأ (~ 2 دقيقة). ثم قم بإجراء التلاعب. ضع الجرذ في وضع الراقد الجانبي ، ولكن قد يتغير الوضع بناء على طرق التلاعب المختلفة. استخدم السبابة اليمنى والإصبع الأوسط لتثبيت الطرف الأمامي الأيمن للفأر وثنيه وتمديده عدة مرات لتحديد مواضع مفصل كتف الجرذ ومفصل الكوع وعظم العضد. اعجن الكتف الأيمن والطرف الأمامي والخلفي للفأر عن طريق الدوران في اتجاه عقارب الساعة مع لب الإبهام بقوة 0.5 كجم وتردد 100-120 مرة / دقيقة لمدة 3 دقائق (الشكل 4A-C).التلاعب بعضلات الأطراف الأمامية في وضع الراقد الجانبي. التعامل مع عضلات الكتف والظهر في وضعية الانبطاح. اضغط على نقطة الوخز LI15 (Jianyu) و SI11 (Tianzong) و HT01 (Jiquan) و LI11 (Quchi) عموديا بطرف إصبع الإبهام 30 مرة لكل نقطة وخز بقوة 0.5 كجم (الشكل 4D-G).استخدم أطلس نقطة الوخز بالإبر لتحديد موقع كل نقطة وخز (الشكل 5)14,15. اضغط على LI15 ، الموجود في الاكتئاب الأمامي السفلي للنهاية الأخرمية ، في وضعية الانبطاح. اضغط على SI11 ، الموجود في المنخفض إلى الحفرة تحت الشوكة في منتصف العمود الفقري الكتفي ، في وضعية الانبطاح. اضغط HT01 ، الموجود في مركز الإبطين ، في وضع ضعيف. اضغط على LI11 الموجود في الإنسي المنخفض إلى الباسطة carpi radialis في الطرف الجانبي من التجعد المرفقي في وضع الاستلقاء الجانبي. امسك مفصل الكتف بالإبهام الأيسر والإصبع الأوسط ، وقم بتمديد الطرف الأمامي في مواضع التقريب والاختطاف والتمديد الأمامي والتمديد الخلفي لمدة 10 ثوان (الشكل 4H-K).ملاحظة: يجب تنفيذ طريقة التمدد هذه دون مقاومة في الفئران. أوقف إجراء Tuina مؤقتا إذا أصبح الجرذ مضطربا. السكتة الدماغية الفئران لمدة 10 ثوان لتهدئته ، ثم المضي قدما في المحاكمة. تنفيذ الإجراء يوميا لمدة 2 أسابيع. 5. قياس ROM الحقاني العضدي ملاحظة: من المهم إكمال عملية القياس في أسرع وقت ممكن لمنع تنكس أنسجة كبسولة المفصل. إزالة لوح الكتف والثلثين القريبين من عظم العضد في الكتلة بعد التضحية بالجرذ بجرعة زائدة من ثلاثي برومو إيثانول (3x جرعة أولية ، عن طريق الحقن داخل الصفاق) ، مما يعرض الحافة السفلية للكتف. أدخل إبرة حقن (1.2 سم × 0.45 مم) على طول عمود العضد في رأس العضد. أدخل إبرتي حقن عموديا في الزوايا العلوية والسفلية للكتف على رغوة بلاستيكية ملفوفة بورقة جراحية معقمة. قم بتوصيل خيط رفيع بإبرة الحقن على عمود العضد واسحبه من الطرف الآخر بقوة 5 جم لجعله موازيا لعمود العضد. قم بقياس الزاوية بين الحافة السفلية للكتف وعمود العضد (الشكل 6).ملاحظة: لضمان نتائج موثوقة ، اطلب من محقق منفصل إجراء القياسات. الإبلاغ عن البيانات كوسيلة ± الانحراف المعياري (SD) باستخدام تطبيق برنامج التحليل الإحصائي.ملاحظة: تم استخدام برنامج SPSS (SPSS، الإصدار 25.0) هنا. تحليل الاختلافات بين المجموعات باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA). الحصول على الرسومات الشريطية باستخدام البرامج المناسبة.ملاحظة: تم استخدام GraphPad Prism 8 هنا. تقييم أمراض الكبسولة باستخدام تلطيخ H&E و Masson بعد القياس. 6. إعداد القسم بعد تقييم ROM الحقاني العضدي ، قم بتثبيت عينات كاملة في 4٪ PFA لمدة 3 أيام ، متبوعا بإزالة الكلس في محلول EDTA (الرقم الهيدروجيني 7.2) لمدة شهرين إضافيين. بعد الجفاف ، قم بتقطيع كتل الأنسجة المدمجة التي تحتوي على العينات إلى شرائح 5 ميكرومتر16. تجفف الشريحة على حرارة 65 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة. إزالة الشمع شريحة. انقع الشريحة في الزيلين الأول والزيلين الثاني والزيلين الثالث لمدة 7 دقائق ، متبوعة بسلسلة إيثانول تنازلية (إيثانول لا مائي ، 5 دقائق ؛ 95٪ إيثانول ، 2 دقيقة ؛ 80٪ إيثانول ، 2 دقيقة ، و 70٪ إيثانول ، 2 دقيقة) ، وأخيرا في ماء عالي النقاء لمدة دقيقتين. 7. تلطيخ H& E تلطيخ الأقسام باستخدام الهيماتوكسيلين لمدة 5 دقائق ، وشطف مع 1 ٪ من الإيثانول حمض الهيدروكلوريك لمدة 3 ثوان ، ويغسل بالماء الجاري لمدة 5 دقائق. تلطيخ القسم مع eosin لمدة 3 دقائق ويغسل بماء الصنبور. انقع القسم في سلسلة إيثانول (95٪ إيثانول I ، 3 s ؛ 95٪ إيثانول II ، 3 s ؛ إيثانول لا مائي I ، 3 s ، وإيثانول لا مائي II ، 1 دقيقة) ثم انغمس في سلسلة زيلين (زيلين I ، 1 دقيقة ؛ زيلين II ، 1 دقيقة). ضع قطرة من مانع تسرب اللثة المحايد على كل عينة. ختم كل عينة بغطاء زجاجي. اجمع الصور باستخدام مجهر مضان مقلوب (شريط المقياس = 100 ميكرومتر). 8. تلطيخ ماسون باستخدام قلم كيميائي مناعي ، ارسم دائرة حول الأقسام ثم احتضن الأقسام في محلول بوين لمدة 2 ساعة عند 37 درجة مئوية حتى تنضج. بعد ذلك ، اغسل الأقسام بالماء حتى يختفي اللون الأصفر. عالج العينات بصبغة الورد الزرقاء لمدة 3 دقائق ثم اغسلها بالماء المقطر. بعد تلطيخ الأقسام بالهيماتوكسيلين (ماير) لمدة 2 دقيقة ، عالج الأقسام لمدة 3 ثوان في محلول تمايز الإيثانول الحمضي. ثم اغسل الأقسام بالماء الجاري لمدة 10 دقائق. قم بتلطيخ الأقسام بمحلول صبغة بونسو أرجواني لمدة 10 دقائق ثم اغسلها بالماء. اغمر الأقسام في محلول حمض الفوسفوموليبديك لمدة 10 دقائق. أضف محلول تلطيخ الأنيلين الأزرق إلى الأقسام لمدة 5 دقائق ، ثم اغسلها بمحلول عمل حمضي ضعيف لمدة 2 دقيقة. قم بتجفيف الأقسام واجعلها شفافة كما هو موضح في الخطوة 7.3. ضع قطرة من عامل ختم اللثة المحايد على كل قسم وقم بتغطيته بغطاء زجاجي. اترك الأقسام في غطاء الدخان حتى تجف. اجمع الصور كما هو موضح في الخطوة 7.5.

Representative Results

لوحظ النشاط البدني للفئران لتقييم نجاح أو فشل نموذج FS. أظهرت دراسة سابقة أن تجميد الجبس قلل بشكل كبير من المسافة المقطوعة وسرعة المشي مقارنة بالفئران العادية17. اقترح بحث آخر أن FS لم يؤثر على المسافة المقطوعة ، وكان العرج هو أكثر أعراض العرض شيوعا13. أظهرت هذه الدراسة تيبسا في مفصل الكتف الأيمن ، وتقلص الطرف العلوي الأيمن ، وضمور العضلات والعرج في الفئران بعد النمذجة. تم حل هذه الآفات في مجموعات MT و MO تماما من خلال 2 أسابيع من التدخل. ولكن لم يكن هناك تغيير كبير في المجموعة M. المعيار الأساسي لتقييم فعالية Tuina في FS هو قياس ROM18 الحقاني العضدي. لاحظنا أن متوسط قيم ROM الحقاني العضدي كانت 149.3 درجة ± 5.9 درجة في المجموعة C ، و 111.1 درجة ± 3.9 درجة في المجموعة M ، و 128.5 درجة ± 2.8 درجة في مجموعة MT ، و 119.56 درجة ± 2.9 درجة في مجموعة MO. كما هو موضح في الشكل 7 ، كان ROM الحقاني العضدي للفئران في المجموعة M أقل بكثير من ذلك في المجموعة C (P < 0.0001). علاوة على ذلك ، كان ROM في مجموعة MT ومجموعة MO أعلى بكثير من ذلك في المجموعة M (P < 0.05 ، P < 0.0001). ومع ذلك ، كان ROM في مجموعة MO أقل بكثير من ذلك في مجموعة MT (P < 0.0001). تشير هذه النتيجة إلى أن Tuina يمكن أن يحسن بشكل كبير وظيفة مفصل الكتف في فئران FS. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن يوضح تلطيخ H&E وتلطيخ Masson تأثيرات Tuina في الحفاظ على الهيكل وتقليل التليف في الكبسولة. لتسهيل الملاحظة ، تم استخدام كبسولة المفصل الحقاني العضدي للنتائج النسيجية. تتكون كبسولة مفصل الكتف من طبقات زلالية وليفية19. كشف تلطيخ H&E عن انتشار الخلايا الزليلية ، والطيات الزليلية المسطحة ، وركود كرات الدم الحمراء ، وتكاثر الأوعية الدموية في المجموعة M ، وهي سمات نموذجية ل FS (الشكل 8A ، B). تضاءلت هذه الميزات إلى حد ما بعد Tuina والعلاج الفموي بديكساميثازون (الشكل 8C ، D). بالمقارنة مع مجموعة MT ، أظهرت مجموعة MO أيضا الكثير من الخلايا الزليلية. أظهر تلطيخ ماسون ترتيب حزم الألياف في كل مجموعة (الأسهم الصفراء). تتكون الكبسولة من شبكة فضفاضة من الألياف الشبكية مع حزم ألياف مرتبة في اتجاه أنيق (الشكل 8E). في المجموعة M ، تم ترتيب حزم الألياف بشكل غير منظم ، مما يشير إلى تليف الكبسولة (الشكل 8F). أظهرت كبسولات الفئران في مجموعة MT أن حزم الألياف طبقية بدقة ووضوح ولكنها تظل مضطربة قليلا في مجموعة MO (الشكل 8G ، H). الشكل 1: بروتوكول إنشاء نموذج الخدمات المالية وتدخل توينا. كانت الفئران على التغذية التكيفية لمدة 7 أيام ، وإنشاء نموذج FS لمدة 21 يوما ، وتم إجراء علاج Tuina يوميا لمدة 14 يوما. في اليوم 36 ، تم التضحية بجميع الفئران. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. الشكل 2: تجميد المصبوب لإنشاء نموذج فئران من FS. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل. الشكل 3: التحكم الكمي في التلاعب . (أ) نظام تحديد معلمة تقنية التدليك الذكي. (ب) يمكن قياس ثلاث قوى في صورة قوة متوازية في الاتجاه X وقوة طولية على طول الاتجاه Y وقوة رأسية في الاتجاه Z. (ج) قوة طريقة العجن الدوار. يمثل المنحنى الأحمر القوة الرأسية المستقرة (0.5 كجم). يمثل المنحنى البرتقالي القوة المتوازية المنتظمة. يمثل المنحنى الأبيض القوة الطولية المنتظمة. د: قوة طريقة الضغط النقطي. يمثل المنحنى الأحمر القوة الرأسية (0.5 كجم). يمثل المنحنيان البرتقالي والأبيض قوى طولية وغير متوازية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. الشكل 4: التلاعب المستخدم في علاج توينا. (أ-ج) يعجن عضلات الكتفين اليمنى والأطراف الأمامية والظهر. (د-ز) اضغط على نقطة LI15 و SI11 و HT01 و LI11. (ح-ك) قم بتمديد الطرف الأمامي في مواضع التقريب والاختطاف والتمديد الأمامي والامتداد الخلفي. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. الشكل 5: المواضع التشريحية ل LI15 و SI11 و HT01 و LI11 في الفئران. ● السطح الجانبي ، ○ السطح الإنسي. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. الشكل 6: قياس ذاكرة القراءة فقط الحقانية العضدية. يتم توصيل خيط رفيع بإبرة حقن يتم إدخالها في عمود العضد ويتم سحبها من الطرف الآخر بقوة 5 جم لجعلها موازية لعمود العضد. يتم قياس الزاوية بين الحافة السفلية للكتف وعمود العضد على أنها ROM الحقانية العضدية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل. الشكل 7: ROM الحقاني العضدي عبر ثلاث مجموعات من الفئران. القيم تعني ± S.D. ، n = 5. يشار إلى فروق ذات دلالة إحصائية بواسطة ANOVA أحادي الاتجاه (a P < 0.001 و bP < 0.0001). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. الشكل 8: النتائج النسيجية لكبسولة الكتف. (أ ، ه) تحتوي المجموعة الضابطة على بنية كبسولة طبيعية (تلطيخ H& E و Masson). (ب ، و) توضح مجموعة طرازات FS التغييرات في بنية الكبسولة على النحو التالي: الطيات الزليلية المسطحة ، وتليف الكبسولة ، وحزم الألياف المضطربة (تلطيخ H&E و Masson). (ج، ز). يوضح نموذج FS جنبا إلى جنب مع مجموعة Tuina أن بنية الكبسولة قريبة من وضعها الطبيعي ، وأن التليف غير واضح (تلطيخ H& E و Masson). (د، ح) يظهر نموذج FS جنبا إلى جنب مع ديكساميثازون عن طريق الفم أن بنية الكبسولة قريبة من وضعها الطبيعي ، والتليف واضح (تلطيخ H& E و Masson). شريط المقياس = 100 ميكرومتر. HH: رأس عظم العضد. السهم الأسود: الطيات الزليلية. السهم الأحمر: ركود كرات الدم الحمراء وانتشار الأوعية الدموية. السهم الأصفر: حزم الألياف. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Discussion

الخطوة الأولى الحاسمة هي اختيار النموذج. نظرا لصعوبة تنفيذ نموذج FS الأساسي ، غالبا ما يتم استخدام تثبيت الجبس والتثبيت الداخلي الجراحي لإنشاء نماذج الفئران^FS ^9,12. لوحظت أشد قيود على حركة الكتف وتليف الكبسولة في نموذج FS الذي تم إنشاؤه بواسطة تجميد المدلى به لمدة 3 أسابيع^12,20. في هذه الدراسة ، كانت معدلات نجاح نموذج FS ممتازة ، مع نجاح بنسبة 100٪.

الخطوة الثانية الحاسمة هي التلاعب المستخدم في هذا البروتوكول. تم استخدام ثلاثة معالجات (العجن والضغط والتمدد) في هذه الدراسة. تم تطبيق معالجة عجن الأنسجة الرخوة على الكتف والكتف والذراع العلوي لإرخاء العضلات. تم إجراء التلاعب بالضغط عن طريق الضغط على نقاط الوخز مثل LI15 و SI11 و HT01 و LI11 ، والتي تستخدم بشكل شائع في الممارسة السريرية ل FS ^5,21. توجد LI15 و SI11 و HT01 في مواضع حول كبسولة الكتف ويمكن أن تكون فعالة في تحسين وظيفة ROM والكتف²². غالبا ما يستخدم LI11 لضعف الحركة في الطرف العلوي ويقع في نفس خط الطول مثل LI15. تساعد طريقة مطابقة نقاط الوخز هذه على تحسين فعالية LI15²³. بعد الاسترخاء الكامل ، تم استخدام تقنيات التمدد لاستعادة الأنشطة الوظيفية.

المشكلة المحتملة في هذا البروتوكول هي أن الفئران تظهر مقاومة شديدة خلال Tuina ، والتي قد تكون ناجمة عن الخوف بدلا من تجاوز تحمل الفئران. عند هذه النقطة ، يجب إيقاف التلاعب حتى تهدأ الفئران (التمسيد لمدة 10 ثوان يهدئ الفئران). بالإضافة إلى ذلك ، يجب تعديل مدى التمدد وفقا لأعراض الفئران. في البداية ، كان الحد من مفصل الكتف واضحا ، وكانت سعة التمدد صغيرة. جنبا إلى جنب مع التدخل ، تعافت وظيفة مفصل الكتف للفئران تدريجيا وزادت سعة التمدد تدريجيا. المعيار هو أن الفئران يمكن أن تقبل طريقة التمدد دون مقاومة. أخيرا ، تتمتع الفئران بدرجة معينة من العدوان ، وتتطلب Tuina اتصالا مطولا بالفئران ، لذلك من المهم ارتداء معدات الحماية الشخصية.

التحكم الكمي في التلاعب هو الأصعب في تجارب Tuina. بينما يمكن استخدام محاكي التلاعب بالتدليك للتحكم في قوة وتكرار التلاعب الفردي ، فإن هذه الطريقة محدودة عندما يتعلق الأمر بالتلاعب المتعدد ومواقع العلاج^24,25. في الممارسة السريرية ، يتم إجراء Tuina عادة مباشرة من قبل الممارسين ، وفي هذه الدراسة ، كان من الصعب التدخل بالمعدات الطبية. للتحكم في التحفيز ، يمكن استخدام نظام تحديد معلمة تقنية التدليك الذكي لتوحيد تدريب Tuina. بعد التدريب ، يمكن للمحقق تطبيق نفس القوة على كل فأر إلى حد ما. القيد الرئيسي لهذا البروتوكول هو أنه لا يمكن السيطرة على التلاعب بشكل كامل.

العلاج بالطب الصيني التقليدي توينا له تاريخ غني من الاستخدام في جميع أنحاء الصين ، حيث يستخدم العديد من الأطباء في المستشفيات مجموعات مختلفة من التلاعب ومواقع العلاج. لذلك ، من المهم إنشاء بروتوكولات قابلة للتكرار وفعالة لكل من التجارب على والدراسات السريرية. في هذه الدراسة ، استندت التلاعبات ونقاط الوخز المستخدمة إلى دراسة سابقة أجراها فريقنا ، حيث جمعت بين تجربتنا السريرية وخصائص النموذج الحيواني FS²¹. أظهرت هذه الدراسة فعالية بروتوكول Tuina المطور في تحسين وظيفة مفصل الكتف وتقليل التليف الكبسولي في فئران FS. توفر هذه النتائج أساسا لمزيد من التحقيقات في الآليات الكامنة وراء علاج Tuina. علاوة على ذلك ، يمكن أن يكون البروتوكول مفيدا للباحثين المهتمين باستكشاف فعالية العلاجات الطبية البديلة ل FS.

وجدت دراسة سابقة أن آلية تدخل Tuina على التليف قد تكون مرتبطة بالتنظيم السفلي ل TGF-β و CTGF أثناء تنظيم توازن MMP-1 / TIMP-1 ، وبالتالي التخفيف من إنتاج المصفوفة خارج الخلية (ECM)²⁶. يمكن تحقيق تأثير Tuina على تليف كبسولة الكتف من خلال تنظيم آليات مختلفة. ومع ذلك ، هناك حاجة إلى مزيد من البحث لفهم الآليات التي ينطوي عليها هذا التحسين فهما كاملا.

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

تم دعم هذا العمل من خلال خطة تطوير العلوم والتكنولوجيا لعام 2020 في مدينة جينان (رقم المنحة 202019059) ، ومشروع علوم وتكنولوجيا الطب الصيني التقليدي في مقاطعة شاندونغ (رقم المنحة 2021Q080) ، ومشروع وراثة مدرسة تشيلو للطب الصيني التقليدي (رقم المنحة [2022] 93).

Materials

4% paraformaldehyde	Solarbio	P1110
Embedding machine	Changzhou Paisijie Medical Equipment Co., Ltd	BM450A
Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA)	Solarbio	E1171
Hematoxylin eosin (HE) staining kit	Sparkjade	EE0012
Intelligent-massage technique parameter determination system	Shanghai Dukang Intrument Equipment Co. Ltd	ZTC-
Microtome	Leica	531CM-Y43
Modified Masson Trichrome Staining Solution	Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd	R20381-8	Bouin 50 mL; lapis lazuli blue dye 50 mL; Hematoxylin (Mayer) 50 mL; acidic ethanol differentiation solution 50 mL; ponceau magenta dye solution 50 mL; phosphomolybdic acid solution 50 mL; aniline blue staining solution 50 mL; weak acid 50 mL
Tribromoethanol	Macklin	T903147-5

References

Li, W., LU, N. Z., Xu, H. L., Wang, H. F., Huang, J. Case control study of risk factors for frozen shoulder in China. International Journal of Rheumatic Diseases. 18 (5), 508-513 (2015).
Degreef, I., Steeno, P., De Smet, L. A survey of clinical manifestations and risk factors in women with Dupuytren’s disease. Acta Orthopaedica Belgica. 74 (4), 456-460 (2008).
Tighe, C. B., Oakley, W. S. The prevalence of a diabetic condition and adhesive capsulitis of the shoulder. Southern Medical Journal. 101 (6), 591-595 (2008).
Cho, C. H., Bae, K. C., Kim, D. H. Treatment strategy for frozen shoulder. Clinics in Orthopedic Surgery. 11 (3), 249-257 (2019).
Liu, M., et al. Effects of massage and acupuncture on the range of motion and daily living ability of patients with frozen shoulder complicated with cervical spondylosis. American Journal of Translational Research. 13 (4), 2804-2812 (2021).
Ai, J., Dong, Y. K., Tian, Q. D., Wang, C. L., Fang, M. Tuina for periarthritis of shoulder: A systematic review protocol. Medicine. 99 (11), e19332 (2020).
Norlin, R., Hoe-Hansen, C., Oquist, G., Hildebrand, C. Shoulder region of the rat: anatomy and fiber composition of some suprascapular nerve branches. The Anatomical Record. 239 (3), 332-342 (1994).
Okajima, S. M., et al. Rat model of adhesive capsulitis of the shoulder. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (139), 58335 (2018).
Zhao, H. K., et al. Tetrandrine inhibits the occurrence and development of frozen shoulder by inhibiting inflammation, angiogenesis, and fibrosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 140, 111700 (2021).
nar, B. M., Battal, V. E., Bal, N., Güler, &. #. 2. 2. 0. ;. &. #. 2. 1. 4. ;., Beyaz, S. Comparison of efficacy of oral versus intra-articular corticosteroid application in the treatment of frozen shoulder: An experimental study in rats. Acta Orthopaedica et Traumatologica Turcica. 56 (1), 64-70 (2022).
Dias, Q. M., Rossaneis, A. C., Fais, R. S., Prado, W. A. An improved experimental model for peripheral neuropathy in rats. Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 46 (3), 253-256 (2013).
Kim, D. H., et al. Characterization of a frozen shoulder model using immobilization in rats. Journal of Orthopaedic Surgery and Research. 11 (1), 160 (2016).
Feusi, O., et al. Platelet-rich plasma as a potential prophylactic measure against frozen shoulder in an in vivo shoulder contracture model. Archives of Orthopaedic and Trauma Surgery. 142 (3), 363-372 (2022).
Yin, C. S., et al. A proposed transpositional acupoint system in a mouse and rat model. Research in Veterinary Science. 84 (2), 159-165 (2008).
Guo, X. R., et al. Study on the regulatory mechanism of electroacupuncture based on thyroid pathway for mammary gland hyperplasia rats. Zhongguo Zhen Jiu. 38 (8), 857-863 (2018).
Feldman, A. T., Wolfe, D. Tissue processing and hematoxylin and eosin staining. Methods in Molecular Biology. 1180, 31-43 (2014).
Taguchi, H., et al. A rat model of frozen shoulder demonstrating the effect of transcatheter arterial embolization on angiography, histopathology, and physical activity. Journal of Vascular and Interventional Radiology: JVIR. 32 (3), 376-383 (2021).
Oki, S., et al. Generation and characterization of a novel shoulder contracture mouse model. Journal of Orthopaedic Research. 33 (11), 1732-1738 (2015).
Kubo, H., et al. Histologic examination of the shoulder capsule shows new layer of elastic fibres between synovial and fibrous membrane. Journal of Orthopaedics. 22, 251-255 (2020).
Cho, C. H., Lho, Y. M., Hwang, I., Kim, D. H. Role of matrix metalloproteinases 2 and 9 in the development of frozen shoulder: human data and experimental analysis in a rat contracture model. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 28 (7), 1265-1272 (2019).
Wang, J. M., et al. Efficacy and safety of Tuina and intermediate frequency electrotherapy for frozen shoulder: MRI-based observation evidence. American Journal of Translation Research. 15 (3), 1766-1778 (2023).
Ben-Arie, E., et al. The effectiveness of acupuncture in the treatment of frozen shoulder: A systematic review and meta-analysis. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2020, 9790470 (2020).
Zou, F., et al. The impact of electroacupuncture at hegu, shousanli, and quchi based on the theory "Treating flaccid paralysis by Yangming alone" on stroke patients’ EEG: A pilot study. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2020, 8839491 (2020).
Lv, T. T., et al. Using RNA-Seq to explore the repair mechanism of the three methods and three-acupoint technique on DRGs in sciatic nerve injured rats. Pain research & Management. 2020, 7531409 (2020).
Niu, F., et al. Spinal tuina improves cognitive impairment in cerebral palsy rats through inhibiting pyroptosis induced by NLRP3 and Caspase-1. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 1028909 (2021).
Na, Z., et al. The combination of electroacupuncture and massage therapy alleviates myofibroblast transdifferentiation and extracellular matrix production in blunt trauma-induced skeletal muscle fibrosis. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 5543468 (2021).

Play Video

PDF

DOI

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite This Article

Qiao, Y., Yang, Y., Wang, J., Li, M., Zheng, L., Li, H., Zhang, S. Tuina in a Frozen Shoulder Rat Model: An Efficient and Reproducible Protocol. J. Vis. Exp. (197), e65440, doi:10.3791/65440 (2023).

Automatically Generated