O presente protocolo descreve uma visão paraesternal modificada do eixo longo para localização rápida e precisa da artéria descendente anterior. Essa abordagem foi projetada para ser mais simples e fácil de usar, facilitando o exame de mudanças dinâmicas na reserva de fluxo coronariano após isquemia-reperfusão miocárdica em camundongos.
Após a isquemia cardíaca, muitas vezes há perfusão miocárdica insuficiente, mesmo que o fluxo tenha sido restaurado com sucesso e completamente em uma artéria a montante. Esse fenômeno, conhecido como “fenômeno sem refluxo”, é atribuído à disfunção microvascular coronariana e tem sido associado a resultados clínicos ruins. Na prática clínica, a redução da reserva de fluxo coronariano (RFC) é frequentemente utilizada como indicador de doença arterial coronariana. A taxa de letalidade é definida como a razão entre a velocidade de pico de fluxo induzida por fatores farmacológicos ou metabólicos e a velocidade de fluxo de repouso.
Este protocolo teve como foco avaliar as alterações dinâmicas na RFC antes e após a isquemia-reperfusão (RI) por meio de medidas de Doppler de onda de pulso. Neste estudo, camundongos normais exibiram a capacidade de aumentar a velocidade de pico do fluxo sanguíneo coronariano até duas vezes maior do que os valores de repouso sob estimulação com isoflurano. No entanto, após isquemia-reperfusão, o CFR em 1 h diminuiu significativamente em comparação com a linha de base pré-operatória. Com o tempo, o CFR mostrou recuperação gradual, mas permaneceu abaixo do nível normal. Apesar da preservação da função sistólica, a detecção precoce da disfunção microvascular é crucial, e o estabelecimento de um guia prático pode auxiliar os médicos nessa tarefa, além de facilitar o estudo da progressão da doença cardiovascular ao longo do tempo.
A doença coronariana é uma das principais causas de mortalidade em todo o mundo1. Mesmo quando a artéria coronária culpada é reaberta por meio de intervenção coronária percutânea primária (ICP) após isquemia cardíaca, a perfusão microvascular coronariana geralmente permanece diminuída. Além disso, não há garantia de reperfusão nos capilares a jusante que suprem o miocárdio1. Esse fenômeno, conhecido como “fenômeno sem refluxo”, está ligado à evolução clínica e a um prognóstico ruim. Consequentemente, alcançar um refluxo microvascular adequado após uma terapia de reperfusão bem-sucedida torna-se fundamental para o salvamento miocárdico. Portanto, a avaliação precoce da função microvascular após a revascularização é crucial para as práticas clínicas.
Várias técnicas, como fio-guia invasivo de temperatura/pressão intracoronária para índice de resistência microcirculatória (IMR) e resistência microvascular hiperêmica (HMR), ressonância magnética cardiovascular não invasiva (RMC), tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT) e tomografia por emissão de pósitrons (PET), podem ser empregadas para avaliar a função microvascular2. No entanto, esses métodos são invasivos ou semi-invasivos, caros e muitas vezes não estão prontamente disponíveis, limitando sua utilidade clínica. Por outro lado, a avaliação da reserva de fluxo coronariano (RFC) pelo ecocardiograma transtorácico com Doppler oferece uma abordagem não invasiva, relativamente simples e econômica, sem expor os pacientes à radiação ionizante, como visto em outros métodos3.
Embora estudos anteriores tenham empregado a ecocardiografia Doppler transtorácica para medir a taxa de letalidade em camundongos e ratos, ainda há desafios para os operadores localizarem os ângulos complexos entre a plataforma, os camundongos e a sonda. Este protocolo supera esse problema, fornecendo um método mais fácil de localizar a artéria coronária da artéria descendente anterior esquerda (LAD) e medir a CFR rapidamente usando a visão de eixo longo paraesternal modificada (PLAX).
Além disso, a RFC obtida na artéria relacionada ao infarto (IRA) distal à lesão culpada mostrou uma forte correlação com o estado de perfusão avaliado pela ecocardiografia com contraste miocárdico (ECM)4. Também foi identificado como um marcador preditivo para a recuperação da viabilidade e da função ventricular esquerda (VE) após um infarto agudo do miocárdio (IAM)5. Além disso, a CFR foi estabelecida como um marcador confiável para mortalidade por todas as causas e desfechos cardiovasculares adversos 6,7. Relatos anteriores descreveram o uso da ecocardiografia para avaliar a taxa de letalidade em modelos de infarto do miocárdioem ratos 8. No entanto, a RFC no estágio inicial da isquemia-reperfusão não foi completamente estudada. Portanto, este estudo fornece um valor de referência para o diagnóstico de disfunção microvascular e avaliação do efeito terapêutico da isquemia-reperfusão por meio de testes dinâmicos em camundongos IR na fase inicial da reperfusão.
Este estudo apresenta um protocolo que utiliza uma visão paraesternal modificada de eixo longo para avaliar dinamicamente a RFC após isquemia-reperfusão. Os principais achados indicam uma diminuição significativa no CFR em camundongos IR, com a redução mais pronunciada observada em 1 h após a reperfusão. No entanto, a função cardíaca não foi afetada em 48 h.
O CFR serve como um indicador do suprimento sanguíneo miocárdico, oferecendo uma abordagem não invasiva para avaliar a estenose da artéria coronária e a circulação microvascular coronariana. Estudos clínicos demonstraram que valores mais baixos de RFC estão associados a piores prognósticos 14,15,16, e um valor de corte de 1,75 foi estabelecido como ideal para estratificação de risco 14. Uma meta-análise recente mostrou ainda que o risco de morte aumenta em 16% para cada diminuição de 0,1 unidade na RFC, indicando que a RFC representa um continuum de risco, com níveis mais baixos predispondo os pacientes a piores resultados clínicos17. Neste estudo, a RFC mostrou uma tendência de aumento com a extensão do tempo de reperfusão, mas manteve-se menor do que antes do procedimento, enfatizando a importância do acompanhamento dos pacientes não apenas imediatamente após a abertura do vaso culpado por meio da ICP, mas também em 48 h. Além disso, a RFC serve como uma medida da disfunção microvascular coronariana, integrando os efeitos hemodinâmicos da doença focal, difusa e de pequenos vasos na perfusão tecidual miocárdica18. Portanto, a CFR é uma técnica não invasiva crucial para o diagnóstico de doenças microvasculares coronarianas. Como a taxa de letalidade na DA é um indicador forte e independente de mortalidade 6,7, este estudo tem como objetivo fornecer valores de referência para decisões clínicas. Além disso, o uso de máquinas de ultrassom pode potencialmente reduzir a necessidade de angiografia coronária em um ambiente de contenção de custos de saúde. Ao treinar e atualizar adequadamente a tecnologia, a estratificação de risco pode ser adaptada às necessidades individuais do paciente.
A visualização PLAX modificada oferece maior conveniência e economia de tempo para pesquisadores científicos. O aprimoramento contínuo dessa tecnologia facilitará sua aplicação mais ampla em outras doenças microvasculares coronarianas. As principais etapas deste protocolo incluem a visualização da artéria coronária e a obtenção de imagens de velocidade PW de alta qualidade. A velocidade do fluxo sanguíneo aumenta gradualmente com o aumento da concentração de anestésico, portanto, a captura contínua é recomendada para evitar a perda da velocidade máxima do fluxo sanguíneo. Como o aumento da concentração de anestésico pode alterar a frequência cardíaca, recomenda-se retornar brevemente ao modo Doppler colorido durante a medição para garantir um posicionamento consistente antes e depois da medição.
É essencial reconhecer as limitações, incluindo as limitações inerentes à medida ultrassonográfica da RFC. Devido à curvatura da artéria coronária, não é possível exibir toda a artéria, levando à medição em apenas um segmento. Os operadores devem ter como objetivo medir o início da artéria coronária para identificar o ponto de velocidade máxima do fluxo sanguíneo coronário com a maior precisão possível. Além disso, o CFR deve ser determinado idealmente com base nas mudanças no volume do fluxo sanguíneo coronário, mas este estudo usa a velocidade do fluxo sanguíneo em vez do volume do fluxo sanguíneo, ignorando o efeito do diâmetro do vaso. No entanto, estudos anteriores demonstraram uma forte correlação entre a RFC e a CFVR (reserva de velocidade de fluxo coronariano)19. Pesquisas adicionais sobre a função microvascular coronariana podem ajudar a entender as complexas alterações na isquemia e melhorar nossa compreensão da disfunção microvascular coronariana.
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (Grant No. 82270352), Projeto de Pesquisa Clínica de Construção de Enfermarias de Pesquisa de Pequim (2022-YJXBF-04-03), Financiamento Nacional de Pesquisa Clínica Hospitalar de Alto Nível (2022-NHLHCRF-YSPY-01), Capital’s Founds for Health Improvement and Research (No. 2022-1-4062), Programa Nacional de Construção de Disciplinas de Especialidades Clínicas Chave (Grant No. 2020-QTL-009) e Fundação da Sociedade Chinesa de Cardiologia (No. CSCF2021B02).
5-0 silk suture | Ningbo MEDICAL Needle Co., Ltd. | 210322 | |
C57 mice | Peking University Health Science Center Department of Laboratory Animal Science | ||
Depilating agent | Nair | NAR-255-1 | |
Electrode gel | Cofoe | ||
High Frequency Ultrasound | FUJIFILM VisualSonics, Inc. | Vevo3100 | |
Isoflurane | REWARD | R510-22-10 | |
Linear array high frequency transducer | FUJIFILM VisualSonics, Inc. | MS550 | |
Rodent Ventilator | Shanghai Alcott Biotech | ALC-V9 | |
Small Animal Anesthesia Machine | REWARD | R530 | |
SPSS | IBM Corp, Armonk, NY, USA | version 23.0 | statistical analysis software |
Ultrasound Gel | Cofoe | ||
Vevo Lab Software | FUJIFILM VisualSonics, Inc. | Verison 5.7.0 |