Un modelo neonatal de inyección venosa retroorbitaria en roedores

Este protocolo proporciona un método claro y preciso para la inyección de sustancias en el seno retroorbitario de ratones y ratas neonatos. Esto es importante porque demuestra que las inyecciones retroorbitarias pueden realizarse de forma fiable y reproducible en roedores de más de P2, en los que la vena temporal/facial superficial ya no es discernible, y en animales menores de P12, en los que los párpados aún no se han abierto y el globo ocular no está expuesto. Además, la inyección retroorbitaria neonatal es bien tolerada tanto por las crías como por las madres, con riesgos mínimos de efectos secundarios una vez que se ha dominado la técnica.

Las inyecciones por vía intravenosa tienen una ventaja sobre otras vías de administración, ya que permiten la inyección de alta concentración, así como de pH bajo y alto, siempre que la tasa de inyección se mantenga constante y baja para evitar la ruptura del vaso. Además, las inyecciones intravenosas permiten una distribución más rápida de los compuestos, ya que entran directamente en la circulación sistémica, evitando así los posibles retrasos por mala absorción observados en otras vías de administración. Esto permite un acceso inmediato y una biodisponibilidad de casi el 100% de los compuestos.

Clínicamente, la vía de administración iv es la vía de administración preferida en neonatos (< 28 días de edad). Esto es especialmente cierto en entornos de cuidados intensivos neonatales, ya que la canulación intravenosa permite un fácil acceso para proporcionar medicamentos/líquidos. Las inyecciones por vía sc se han utilizado de alguna manera en neonatos, particularmente para la administración de eritropoyetina¹⁵. Sin embargo, se han planteado preocupaciones, con un estudio que sugiere la infusión intravenosa como una alternativa superior¹⁶. La administración oral no suele ser una opción práctica cuando los neonatos se encuentran en una unidad de cuidados intensivos hospitalarios. Además, en comparación con los adultos, los neonatos tienen diferencias en su tracto gastrointestinal, incluido el retraso en el vaciamiento gástrico y la disminución de la motilidad intestinal, lo que puede afectar la absorción del fármaco. Las inyecciones intramusculares son difíciles de administrar debido a la pequeña masa muscular de los neonatos ^3,4.

En la investigación con roedores, uno de los métodos más utilizados de inyecciones intravenosas es la inyección en la vena de la cola. Sin embargo, este método es inviable cuando se trabaja con neonatos. Otros sitios intravenosos, como la vena superficial temporal/facial⁶ , se vuelven invisibles en P3. El seno transverso neonatal ha sido descrito en un estudio y se realizó en P0-P1 y, con la ayuda de un microscopio, se abrió la piel y se hizo avanzar una aguja capilar a través del cráneo hasta el seno transverso, permitiendo inyecciones de 2-4 μl de volumen⁷. Pocos estudios han documentado el uso de la vena yugular externa en P7 en ratas¹⁷. Sin embargo, esta es una técnica invasiva que requiere la apertura quirúrgica de la piel y la exposición de la vena yugular externa¹⁸. En estudios en roedores adultos, se ha demostrado que la administración retroorbitaria es tan eficaz como la inyección en la vena de la cola⁵ , reforzando así la viabilidad y relevancia de la vía retroorbitaria. La inyección retroorbitaria causa un sufrimiento mínimo y, una vez dominada, puede ser realizada por una sola persona con un equipo mínimo y permite múltiples inyecciones (asegurando que los ojos se alternen). Estudios previos han demostrado que la inyección retroorbitaria se ha utilizado para administrar el virus adenoasociado 9 en ratones en P0-P1 o en P14-P21¹¹ o FITC-dextrano en P17¹⁹ , lo que indica una creciente aceptación de este método.

Existen algunas limitaciones asociadas con la inyección retroorbitaria en neonatos. Al igual que con todas las inyecciones intravenosas, el volumen inyectado es limitado y recomendamos 5 μL/g para este procedimiento. Además, la inyección retroorbitaria requiere anestesia en todo el cuerpo. Para minimizar las complicaciones, se sugiere el uso de agentes anestésicos inhalados como el isoflurano, ya que estos son más rápidos en la inducción anestésica, tienen un metabolismo rápido y tienen una tasa de recuperación rápida. Se requiere entrenamiento, preferiblemente con colorante en animales anestesiados terminalmente, para evitar una posible hinchazón alrededor del lugar de la inyección o un traumatismo ocular debido a la colocación incorrecta del bisel de la aguja. Debido al pequeño tamaño de estos animales, se requieren agujas más finas, con un calibre de aguja pequeño. La inyección de células debe realizarse en suspensión unicelular, para evitar la obstrucción de los vasos y garantizar la viabilidad celular. De manera alentadora, un estudio realizado por Amer y sus colegas ha demostrado que la inyección de células de mamíferos utilizando jeringas de 30 G todavía proporciona una viabilidad celular confiable incluso con una eyección de alta densidad celular²⁰.

En resumen, el establecimiento de una vía intravenosa fiable en neonatos es de importancia clínica, ya que es la vía de administración preferida en humanos. La inyección retroorbitaria se puede dominar fácilmente, es reproducible y proporciona una alternativa relevante a otros sitios de inyección intravenosa, como la cola y la vena temporal/facial, que no se pueden usar de manera confiable durante todo el período neonatal de roedores. Por lo tanto, la inyección retroorbitaria neonatal permite la administración de fármacos, células y otros compuestos a edades neonatales adecuadas.