Modelo Neonato de Injeção de Veias Retroorbitárias em Roedores

Este protocolo fornece um método claro e preciso para a injeção de substâncias no seio retroorbital de camundongos e ratos neonatais. Isso é importante, pois mostra que as injeções retroorbitárias podem ser realizadas de forma confiável e reprodutível em roedores mais velhos que P2, onde a veia temporal superficial/facial não é mais discernível, e em animais mais jovens que P12, onde as pálpebras ainda não abriram e o globo ocular não está exposto. Além disso, a injeção retroorbital neonatal é bem tolerada tanto pelos filhotes quanto pelas mães, com riscos mínimos de efeitos colaterais, uma vez dominada a técnica.

As injeções via iv têm vantagem sobre outras vias de administração, pois permitem a injeção de alta concentração, bem como pH baixo e alto, desde que a taxa de injeção seja mantida constante e baixa para evitar a ruptura do vaso. Além disso, as injeções iv permitem uma distribuição mais rápida dos compostos à medida que entram diretamente na circulação sistêmica, contornando assim os atrasos potenciais da má absorção observados em outras vias de administração. Isso permite acesso imediato e quase 100% de biodisponibilidade dos compostos.

Clinicamente iv é a via de administração preferencial em neonatos (< 28 dias de idade). Isso é especialmente verdadeiro em ambientes de terapia intensiva neonatal, pois a canulação IV permite fácil acesso para fornecer medicamentos/fluidos. Injeções por via sc têm sido pouco utilizadas em neonatos, particularmente para a administração de eritropoetina¹⁵. No entanto, preocupações têm sido levantadas, com um estudo sugerindo a infusão iv como uma alternativa superior¹⁶. A administração oral muitas vezes não é uma opção prática quando os neonatos estão em uma unidade hospitalar intensiva. Além disso, em comparação com adultos, os neonatos apresentam diferenças no trato gastrointestinal, incluindo retardo no esvaziamento gástrico e diminuição da motilidade intestinal, o que pode afetar a absorção da droga. Injeções intramusculares são de difícil administração devido à pequena massa muscular dos neonatos ^3,4.

Na pesquisa de roedores, um dos métodos mais utilizados de injeções iv é a injeção da veia da cauda. No entanto, esse método é inviável quando se trabalha com neonatos. Outros sítios iv, como a veia temporal superficial/^facial6 , tornam-se invisíveis em P3. O seio transverso neonatal foi descrito em um estudo e foi realizado no P0-P1 e, com auxílio de microscópio, abertura da pele e avanço de agulha capilar através do crânio para o seio transverso, permitindo injeções de volume de 2-4 μl⁷. Poucos estudos documentaram o uso da veia jugular externa no P7 em^ratos17. Entretanto, trata-se de uma técnica invasiva que requer abertura cirúrgica da pele e exposição da veia jugular^externa18. Em estudos em roedores adultos, a administração retroorbitária tem se mostrado tão eficaz quanto a injeção na veia caudal⁵ , reforçando a viabilidade e relevância da via retroorbitária. A injeção retroorbital causa sofrimento mínimo e, uma vez dominada, pode ser realizada por uma única pessoa com equipamento mínimo e permite múltiplas injeções (garantindo que os olhos sejam alternados). Estudos prévios mostraram que a injeção retroorbital tem sido usada para administrar vírus adenoassociado 9 em camundongos em P0-P1 ou em P14-P21¹¹ ou FITC-dextran em P17¹⁹ , indicando uma aceitação crescente deste método.

Existem algumas limitações associadas à injeção retroorbitária em neonatos. Como em todas as injeções intravenosas, o volume injetado é limitado, e recomendamos 5 μL/g para esse procedimento. Além disso, a injeção retroorbital requer anestesia de corpo inteiro. Para minimizar as complicações, sugere-se o uso de agentes anestésicos inalatórios, como o isoflurano, por serem mais rápidos na indução anestésica, terem metabolismo rápido e rápida taxa de recuperação. É necessário treinamento, preferencialmente com corante colorido em animais anestesiados terminalmente, para evitar possíveis inchaços ao redor do local da injeção ou trauma ocular devido à colocação incorreta do bisel da agulha. Devido ao pequeno tamanho desses animais, são necessárias agulhas mais finas, com agulha de pequeno calibre. A injeção de células deve ser realizada em suspensão unicelular, para evitar o bloqueio dos vasos e garantir a viabilidade celular. De forma encorajadora, um estudo realizado por Amer e colaboradores mostrou que a injeção de células de mamíferos usando seringas de 30 G ainda fornece viabilidade celular confiável mesmo em ejeção de alta densidade celular²⁰.

Em resumo, o estabelecimento de uma via IV confiável em neonatos é de importância clínica, pois esta é a via preferencial de administração em humanos. A injeção retroorbital pode ser facilmente dominada, é reprodutível e fornece uma alternativa relevante para outros locais de injeção IV, como cauda e veia temporal/facial, que não podem ser usados de forma confiável durante todo o período neonatal de roedores. Assim, a injeção retroorbital neonatal permite a liberação de fármacos, células e outros compostos em idades neonatais adequadas.