Un modello di roditore neonatale di iniezione venosa retroorbitaria

Questo protocollo fornisce un metodo chiaro e preciso per l’iniezione di sostanze nel seno retroorbitale di topi e ratti neonatali. Questo è importante perché dimostra che le iniezioni retroorbitali possono essere eseguite in modo affidabile e riproducibile nei roditori di età superiore a P2, dove la vena temporale/facciale superficiale non è più distinguibile, e negli animali più giovani di P12, dove le palpebre non si sono ancora aperte e il bulbo oculare non è esposto. Inoltre, l’iniezione retroorbitale neonatale è ben tollerata sia dai cuccioli che dalle madri, con rischi minimi di effetti collaterali una volta che la tecnica è stata padroneggiata.

Le iniezioni per via endovenosa hanno un vantaggio rispetto ad altre vie di somministrazione in quanto consentono l’iniezione ad alta concentrazione, nonché a pH basso e alto, a condizione che la velocità di iniezione sia mantenuta costante e bassa per evitare la rottura del vaso. Inoltre, le iniezioni endovenose consentono una distribuzione più rapida dei composti in quanto entrano direttamente nella circolazione sistemica, bypassando così i potenziali ritardi dovuti allo scarso assorbimento osservato in altre vie di somministrazione. Ciò consente l’accesso immediato e una biodisponibilità quasi del 100% dei composti.

Clinicamente iv è la via di somministrazione preferita nei neonati (< 28 giorni di età). Ciò è particolarmente vero nelle strutture di terapia intensiva neonatale, poiché l'incannulamento endovenoso consente un facile accesso alla fornitura di farmaci/fluidi. Le iniezioni per via sc sono state in qualche modo utilizzate nei neonati, in particolare per la somministrazione di eritropoietina¹⁵. Tuttavia, sono state sollevate preoccupazioni, con uno studio che suggerisce l’infusione endovenosa come alternativa superiore¹⁶. La somministrazione orale non è spesso un’opzione pratica quando i neonati si trovano in un’unità intensiva ospedaliera. Inoltre, rispetto agli adulti, i neonati presentano differenze nel tratto gastrointestinale, tra cui lo svuotamento gastrico ritardato e la diminuzione della motilità intestinale che possono influenzare l’assorbimento del farmaco. Le iniezioni intramuscolari sono difficili da somministrare a causa della piccola massa muscolare dei neonati ^3,4.

Nella ricerca sui roditori, uno dei metodi più utilizzati per le iniezioni endovenose è l’iniezione della vena caudale. Tuttavia, questo metodo è indispensabile quando si lavora con i neonati. Altri siti endovenosi, come la vena temporale/facciale superficiale⁶ , diventano invisibili in P3. Il seno trasverso neonatale è stato descritto in uno studio ed è stato eseguito a P0-P1 e, con l’aiuto di un microscopio, aprendo la pelle e facendo avanzare un ago capillare attraverso il cranio nel seno trasverso, consentendo iniezioni di volume di 2-4 μl⁷. Pochi studi hanno documentato l’uso della vena giugulare esterna a P7 nei ratti¹⁷. Tuttavia, si tratta di una tecnica invasiva che richiede l’apertura chirurgica della pelle e l’esposizione della vena giugulare esterna¹⁸. In studi su roditori adulti, la somministrazione retroorbitale ha dimostrato di essere efficace quanto l’iniezione della vena caudale⁵ , rafforzando così la vitalità e la pertinenza della via retroorbitale. L’iniezione retroorbitale provoca un disagio minimo e, una volta padroneggiata, può essere eseguita da una sola persona con un’attrezzatura minima e consente iniezioni multiple (assicurando che gli occhi siano alternati). Studi precedenti hanno dimostrato che l’iniezione retroorbitale è stata utilizzata per somministrare il virus adeno-associato 9 nei topi a P0-P1 o a P14-P21¹¹ o FITC-destrano a P17¹⁹ , indicando una crescente accettazione di questo metodo.

Ci sono alcune limitazioni associate all’iniezione retroorbitale nei neonati. Come per tutte le iniezioni endovenose, il volume iniettato è limitato e si consiglia di assumere 5 μL/g per questa procedura. Inoltre, l’iniezione retroorbitale richiede l’anestesia di tutto il corpo. Per ridurre al minimo le complicanze, si suggerisce l’uso di agenti anestetici per via inalatoria come l’isoflurano, poiché questi sono più rapidi nell’induzione dell’anestesia, hanno un metabolismo veloce e hanno un rapido tasso di recupero. È necessaria una formazione, preferibilmente utilizzando coloranti colorati in animali anestetizzati terminalmente, per evitare potenziali gonfiori intorno al sito di iniezione o traumi oculari dovuti a un posizionamento errato dello smusso dell’ago. A causa delle piccole dimensioni di questi animali, sono necessari aghi più fini, con aghi di piccolo calibro. L’iniezione di cellule deve essere eseguita in sospensione di una singola cellula, per evitare l’ostruzione dei vasi e per garantire la vitalità cellulare. In modo incoraggiante, uno studio di Amer e colleghi ha dimostrato che l’iniezione di cellule di mammifero utilizzando siringhe da 30 G fornisce ancora una vitalità cellulare affidabile anche con l’espulsione ad alta densità cellulare²⁰.

In sintesi, l’istituzione di una via endovenosa affidabile nei neonati è di importanza clinica, poiché questa è la via di somministrazione preferita nell’uomo. L’iniezione retroorbitale può essere facilmente padroneggiata, è riproducibile e fornisce un’alternativa rilevante ad altri siti di iniezione endovenosa, come la coda e la vena temporale/facciale, che non possono essere utilizzate in modo affidabile durante tutto il periodo neonatale dei roditori. Pertanto, l’iniezione retroorbitale neonatale consente la somministrazione di farmaci, cellule e altri composti all’età neonatale appropriata.