למרות התפקיד המכריע של מקלעת הכורואיד במוח, מחקרי דימות מוחי של מבנה זה נדירים בשל היעדר כלי סגמנטציה אוטומטיים אמינים. הפרוטוקול הנוכחי נועד להבטיח פילוח ידני סטנדרטי של מקלעת הכורואיד שיכול לשמש בסיס למחקרי דימות מוחי עתידיים.
מקלעת הכורואיד הייתה מעורבת בהתפתחות עצבית ובמגוון הפרעות מוחיות. ראיות מוכיחות כי מקלעת הכורואיד חיונית להבשלת המוח, ויסות חיסוני/דלקתי ותפקוד התנהגותי/קוגניטיבי. עם זאת, כלי הפילוח האוטומטיים הנוכחיים של דימות מוחי אינם מסוגלים לפלח באופן מדויק ואמין את מקלעת כורואיד החדר הצידי. יתר על כן, אין כלי קיים המקטע את מקלעת הכורואיד הממוקמת בחדר השלישי והרביעי של המוח. לפיכך, יש צורך בפרוטוקול המתאר כיצד לפלח את מקלעת הכורואיד בחדר הצידי, השלישי והרביעי כדי להגביר את המהימנות והשכפול של מחקרים הבוחנים את מקלעת הכורואיד בהפרעות נוירו-התפתחותיות ומוחיות. פרוטוקול זה מספק שלבים מפורטים ליצירת קבצים עם תוויות נפרדות ב- 3D Slicer עבור מקלעת הכורואיד בהתבסס על תמונות DICOM או NIFTI. מקלעת הכורואיד תחולק ידנית באמצעות מישורי הציר, הקשת והעטרה של תמונות T1w תוך הקפדה על אי הכללת ווקסלים ממבני חומר אפור או לבן הגובלים בחדרים. החלונות יותאמו כדי לסייע בלוקליזציה של מקלעת הכורואיד וגבולותיה האנטומיים. שיטות להערכת דיוק ומהימנות יודגמו כחלק מפרוטוקול זה. ניתן להשתמש בסגמנטציה סטנדרטית של מקלעת הכורואיד באמצעות תיחום ידני כדי לפתח כלי סגמנטציה אוטומטיים טובים ואמינים יותר שניתן לשתף בגלוי כדי להבהיר שינויים במקלעת הכורואיד לאורך תוחלת החיים ובתוך הפרעות מוחיות שונות.
הפונקציה Choroid plexus
מקלעת הכורואיד היא מבנה וסקולרי מאוד במוח המורכב מנימים מופנים וחד-שכבה של תאי אפיתל מקלעת כורואיד1. מקלעת הכורואיד מקרינה לתוך חדרי המוח הצדיים, השלישי והרביעי ומייצרת נוזל מוחי שדרתי (CSF), הממלא תפקיד חשוב בתבניות עצביות2 ובפיזיולוגיה של המוח 3,4. מקלעת הכורואיד מפרישה חומרים נוירו-וסקולריים, מקיפה מאגר דמוי תא גזע, ופועלת כמחסום פיזי המעכב כניסה של מטבוליטים רעילים, מחסום אנזימטי להסרת מואייטים העוקפים את המחסום הפיזי, ומחסום אימונולוגי להגנה מפני פולשים זרים5. מקלעת הכורואיד מווסתת נוירוגנזה6, פלסטיות סינפטית7, דלקת8, שעון ביולוגי 9,10, ציר מוח המעי11 וקוגניציה12. יתר על כן, ציטוקינים היקפיים, מתח וזיהום (כולל SARS-CoV-2) יכולים לשבש את מחסום הדם-CSF 13,14,15,16. לפיכך, מערכת מקלעת הכורואיד CSF היא אינטגרלית להתפתחות עצבית, הבשלה של מעגלים עצביים, הומאוסטזיס מוחי ותיקון17. מאחר ששינויים חיסוניים, דלקתיים, מטבוליים ואנזימטיים משפיעים על המוח, חוקרים משתמשים בכלי דימות מוחי כדי להעריך את התפקיד של מקלעת הכורואיד לאורך תוחלת החיים ובהפרעות מוחיות 18,19,20. עם זאת, קיימות מגבלות בכלים אוטומטיים נפוצים לסגמנטציה של מקלעת כורואידים, כגון FreeSurfer, אשר גורמות לכך שמקלעת הכורואיד מפולחת בצורה גרועה. לפיכך, יש צורך קריטי בסגמנטציה ידנית של מקלעת הכורואיד שניתן להשתמש בה כדי לפתח כלי אוטומטי מדויק לסגמנטציה של מקלעת כורואידים.
מקלעת כורואיד בהתפתחות עצבית והפרעות מוחיות
תפקידו של מקלעת הכורואיד בהפרעות מוחיות הוזנח זה מכבר, בעיקר משום שנחשב לשחקן משנה שתפקידו לרפד את המוח ולשמור על מאזן מלחים תקין 2,21. עם זאת, מקלעת הכורואיד זכתה לתשומת לב כמבנה הקשור להפרעות מוחיות כגון תסמונות כאב22, SARS-CoV-2 16,23,24, נוירו-התפתחותיות2 והפרעות מוחיות19, דבר המצביע על אפקט טרנסדיאגנוסטי בהתפתחות הפרעות התנהגותיות. בהפרעות נוירו-התפתחותיות, ציסטות מקלעת כורואיד היו קשורות לסיכון מוגבר לעיכוב התפתחותי, הפרעת קשב וריכוז (ADHD), או הפרעת ספקטרום האוטיזם (ASD)25,26. בנוסף, נפח מקלעת כורואיד החדר הצידי נמצא מוגבר בחולים עם ASD27. בהפרעות מוחיות, הפרעות מקלעת כורואיד תוארו מאז 1921 בהפרעות פסיכוטיות28,29. מחקרים קודמים זיהו הגדלת מקלעת כורואיד באמצעות סגמנטציה של FreeSurfer במדגם גדול של חולים עם הפרעות פסיכוטיות בהשוואה הן לקרוביהם מדרגה ראשונה והן לקבוצת הביקורת19. ממצאים אלה שוכפלו באמצעות נפח מקלעת כורואיד מקוטעת ידנית במדגם גדול של אוכלוסיית קלינית בסיכון גבוה לפסיכוזה, ומצאו כי לחולים אלה היה נפח מקלעת כורואידי גדול יותר בהשוואה לקבוצת ביקורת בריאה30. ישנם מספר גדל והולך של מחקרים המדגימים הגדלת מקלעת כורואיד בתסמונת כאב אזורי מורכב22, שבץ31, טרשת נפוצה20,32, אלצהיימר33,34 ודיכאון35, כאשר חלקם מראים קשר בין פעילות חיסונית / דלקתית היקפית ומוחית. מחקרי הדמיה מוחית אלה מבטיחים; עם זאת, סגמנטציה לקויה של מקלעת כורואיד החדר הצידי על ידי FreeSurfer21 מגבילה את האמינות של הערכת נפח מקלעת כורואיד אוטומטית. כתוצאה מכך, מחקרים בטרשת נפוצה20,32, דיכאון35, אלצהיימר34 ופסיכוזה מוקדמת36 החלו לפלח ידנית את מקלעת כורואיד החדר הצידי, אך אין הנחיות עדכניות כיצד לעשות זאת, וגם לא ההנחיות שלהם לגבי פילוח מקלעת כורואיד החדר השלישי והרביעי.
כלי פילוח נפוצים אינם כוללים את מקלעת הכורואיד
צינורות סגמנטציה מוחית כגון FreeSurfer37,38,39, FMRIB Software Library (FSL)40, SLANT41 ו-FastSurfer (שפותח על ידי המחבר השותף Martin Reuter)42,43, מפלחים באופן מדויק ואמין מבנים קליפתיים ותת-קליפתיים תוך שימוש בפרדיגמות מבוססות אטלס (FSL), אטלס ופני שטח (FreeSurfer), ופרדיגמות סגמנטציה של למידה עמוקה (SLANT ו-FastSurfer). חולשות של חלק מגישות אלה כוללות מהירות עיבוד, הכללה מוגבלת לסורקים שונים, עוצמות שדה וגדלי ווקסל37,44, ויישור מאולץ של מפת התוויות במרחב אטלס סטנדרטי. עם זאת, היכולת לפלח את מקלעת הכורואיד והתאימות ל-MRI ברזולוציה גבוהה מטופלות רק על ידי FreeSurfer ו-FastSurfer. הרשתות העצביות שמאחורי FastSurfer, מאומנות על תוויות מקלעת הכורואיד של FreeSurfer, כך שהן יורשות את מגבלות האמינות והכיסוי של FreeSurfer שנדונו בעבר, כאשר החדרים השלישי והרביעי מתעלמים21. קיימות גם מגבלות קיימות עבור MRI ברזולוציה גבוהה, אך ניתן להשתמש בזרם45 ברזולוציה גבוהה של FreeSurfer וב- FastSurferVINN43 כדי לטפל בבעיה זו.
כלי סגמנטציה נוכחיים של מקלעת כורואיד
יש רק כלי סגמנטציה אחד זמין בחינם עבור מקלעת הכורואידים, אך דיוק הפילוח מוגבל. פילוח מדויק של מקלעת כורואיד יכול להיות מושפע ממגוון גורמים, כולל (1) שונות במיקום מקלעת כורואיד (לא נייח מרחבית) בשל מיקומו בתוך החדרים, (2) הבדלים בעוצמת הווקסל, ניגודיות, רזולוציה (הטרוגניות בתוך מבנה) עקב הטרוגניות תאית, תפקוד מקלעת כורואיד דינמית, שינויים פתולוגיים או השפעות נפח חלקיות, (3) הבדלי גודל חדרים הקשורים לגיל או פתולוגיה המשפיעים על גודל מקלעת כורואידים, ו-(4) קרבה למבנים תת-קורטיקליים סמוכים (היפוקמפוס, אמיגדלה, קאודטה והמוח הקטן), שגם הם קשים לפילוח. בהתחשב באתגרים אלה, סגמנטים של FreeSurfer לעתים קרובות תחת או מעריכים יתר על המידה, מתייגים או מתעלמים ממקלעת הכורואידים.
שלושה פרסומים אחרונים התייחסו לפער של סגמנטציה אמינה של מקלעת כורואיד עם מודל תערובת גאוסיאנית (GMM)46, Axial-MLP47, וגישות למידה עמוקה מבוססות U-Net48. כל מודל אומן והוערך באמצעות מערכי נתונים פרטיים, מתויגים ידנית של לכל היותר 150 נבדקים עם מגוון מוגבל של סורקים, אתרים, דמוגרפיה והפרעות. בעוד שפרסומים אלה 46,48,49 השיגו שיפורים משמעותיים לעומת סגמנטציית מקלעת הכורואיד של FreeSurfer – לעיתים הכפלת ההצטלבות של חיזוי ואמת קרקעית, אף אחת מהשיטות אינה (1) מאומתת ב- MRI ברזולוציה גבוהה, (2) יש לה ניתוחי הכללה ואמינות ייעודיים, (3) כוללת מערכי נתונים גדולים של אימון ובדיקה מייצגים, (4) מטפלת או מנתחת באופן ספציפי אתגרי סגמנטציה של מקלעת כורואיד כגון אפקטי נפח חלקיים, או (5) זמין לציבור ככלי מוכן לשימוש. לפיכך, “תקן הזהב” הנוכחי לסגמנטציה של מקלעת כורואיד הוא מעקב ידני, למשל באמצעות 3D Slicer50 או ITK-SNAP51, שלא תואר בעבר והיווה אתגר גדול עבור חוקרים המבקשים לבחון את תפקיד מקלעת הכורואיד במחקריהם. 3D Slicer נבחרה לסגמנטציה ידנית בשל היכרותו של המחבר עם התוכנה ומשום שהיא מספקת למשתמש כלים שונים המבוססים על גישות שונות שניתן לשלב כדי להשיג את התוצאה הרצויה. ניתן להשתמש בכלים אחרים, כגון ITK-SNAP, המכוון בעיקר לפילוח תמונות, וברגע שהכלי נשלט, המשתמש יכול להשיג תוצאות טובות. בנוסף, המחברים ערכו מחקר מקרה-ביקורת המדגים את הדיוק והאמינות הגבוהים של טכניקת הפילוח הידנית שלהם באמצעות3D Slicer 30, ומתודולוגיה ספציפית זו מתוארת כאן.
שלבים קריטיים של הפרוטוקול
שלושה שלבים קריטיים דורשים תשומת לב מיוחדת בעת יישום פרוטוקול זה. ראשית, בדיקת האיכות והניגודיות של תמונות MR היא המפתח להבטחת פילוח מדויק. אם איכות התמונה ירודה מדי, או שהניגודיות נמוכה מדי או גבוהה מדי, הדבר עלול להוביל לתיחום לא מדויק של מקלעת הכורוא…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי פרס המכון הלאומי לבריאות הנפש R01 MH131586 (ל- P.L ו- M.R), R01 MH078113 (ל- M.K), ומענק קרן סידני R בר ג’וניור (ל- P.L).
3D Slicer | 3D Slicer | https://www.slicer.org/ | A free, open source software for visualization, processing, segmentation, registration, and analysis of medical, biomedical, and other 3D images and meshes; and planning and navigating image-guided procedures. |
FreeSurfer | FreeSurfer | https://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/ | An open source neuroimaging toolkit for processing, analyzing, and visualizing human brain MR images |
ITK-SNAP | ITK-SNAP | http://www.itksnap.org/pmwiki/pmwiki.php | A free, open-source, multi-platform software application used to segment structures in 3D and 4D biomedical images. |
Monai Package | Monai Consortium | https://docs.monai.io/en/stable/metrics.html | Use for Dice Coefficient and DeepMind average Surface Distance. |
MRI scanner | GE | Discovery MR750 | |
Psych Package | R-Project | https://cran.r-project.org/web/packages/psych/index.html | A general purpose toolbox developed originally for personality, psychometric theory and experimental psychology. |
R Software | R-Project | https://www.r-project.org/ | R is a free software environment for statistical computing and graphics. |
RStudio | Posit | https://posit.co/ | An RStudio integrated development environment (IDE) is a set of tools built to help you be more productive with R and Python. |
Windows or Apple OS Desktop or Laptop | Any company | n/a | Needed for running the software used in this protocol. |