感染と自然免疫を研究するためのマウス胚性脳からの混合神経細胞およびグリア細胞培養の確立

中枢神経系(CNS)の理解を深めることは、多くの神経炎症性疾患および神経変性疾患の治療選択肢を改善するために重要です。CNSは、脳、脊髄、および視神経内の相互接続された細胞の複雑なネットワークであり、ニューロン、希突起膠細胞、星状細胞、およびそれらの自然免疫細胞であるミクログリア¹で構成されています。in vitroアプローチは、多くの場合、有意義な研究を行うために必要なマウスの数を大幅に減らすことができます。しかし、CNSの複雑な性質により、細胞株を使用してin vivoの状況を再現することは不可能です。混合神経細胞培養は、置換、還元、改良(3R^{)の原則に沿って}、関連するモデルで神経(免疫)学の質問を調査するための非常に貴重な研究ツールを提供します^2,3。

Thomsonらは、前述の全ての主要なCNS細胞型に分化する出生前脊髄細胞を用いた細胞培養方法を記載した⁴。このシステムはまた、シナプス形成、有髄軸索、およびランヴィエの結節を有する。この培養方法の主な制限は、脊髄であるため、脳を有用にモデル化せず、胚13日目(E13)の脊髄からの細胞収量が収縮していることです。したがって、これにより、調査できる実験条件の数が制限されます。そこで本研究では、動物に対する必要量を減らすために、細胞収量を増加させた脳の特性を再現する新しい細胞培養システムの開発を目指しました。

Thomsonらを出発点として、純粋に出生前のマウスの脳に由来する細胞培養モデルを開発しました。これらの培養物は、脊髄培養物と同じ細胞集団、相互接続性、および治療オプションを持っていますが、比較すると髄鞘形成が少ない点が異なります。しかし、約3倍高い細胞収量を有するCNS インビトロ モデルを有することは、より効率的であり、より少ないマウスおよびより少ない時間で胚を処理する。この独自の培養システムは、顕微鏡分析用のガラスカバースリップや、ハイスループット研究用の96ウェルプレートを含むさまざまなサイズのプラスチックウェルプレートを使用するなど、複数のダウンストリームアプリケーションとスケール向けに最適化しました。