好中球機能の概要を把握するための一連のスクリーニング技術

好中球は、ヒトの血液中に最も多く存在する自然免疫細胞であり、感染や炎症に大きな役割を果たすことが知られており、組織損傷部位に最初に到達する応答者です¹。近年、好中球がさまざまな疾患において、また恒常性維持(^ホメオスタシス)を支える重要な役割を担っているという認識が高まっています2。好中球は、それ自体が厳密に制御されたシグナル伝達を持っているだけでなく、免疫系の他の構成要素の調節にも関与しています^3,4,5。したがって、好中球と、走化性、^逆遊走6、食作用⁷、呼吸バースト⁸、好中球細胞外トラップ(NET)⁷の放出など、好中球とその多くの異常な細胞機能を調べることは、分析中の特定の条件によって引き起こされる潜在的な好中球の機能的、形態学的、または分子的変化を評価する必要がある多くの研究状況で不可欠です。

単離されたばかりの好中球は、末端分化型で、寿命が短く、動的で、活性化しやすい⁹。しかし、好中球の応答に影響を与えない効率的な保存法はまだ達成されておらず、中断のない複数のアッセイを行うことは困難です。さらに、サイトメトリーおよび/または蛍光染色を必要とするアッセイに基づく、以前に記載された機能解析^10,11は、好中球の広範かつ初期評価が必要な場合には実行可能な選択肢ではないかもしれない。

これらの問題に対処するために、このプロトコルでは、細胞生存率、活性酸素種(ROS)産生、リアルタイム移動、 出芽酵母の食作用の評価など、単一の分離プロセスに続いて実施できる一連のテストを記述しており、その結果を使用して詳細なフォローアップ研究を推論することができます。NeutroFun Screenと名付けられたこの手順は、脱顆粒を除く主要なエフェクター活動を網羅するように設計されており、1時間の活性化を含む平均4時間で完了することができます。さらに、残りの細胞は、オミクス研究などのより詳細なアプローチに使用できます。この方法の利点は、速度、包括性、コスト、および精度のバランスにあります。

さらに、NETの予備的な提案を、特定のマーカーなしで簡単に観察する方法がありますが、その方向でのさらなる努力が価値があるかどうかを示すのに十分です。テストされる機能の多様性は、テスト間の共通点を組み合わせることを目的としており、分析時間とコストを削減します。この方法の主な目的は、好中球の応答の概要を可能にする速度、包括性、コスト、および精度に関するバランスの取れた機能分析を提供することであり、正常密度好中球に対する新しい刺激の影響を調査する際の有用な最初のステップになります。