يوفر هذا التقرير بروتوكولات للتجميع وزراعة الخلايا والمقايسات على منصة μSiM لبناء نماذج الحاجز الدموي الدماغي.
microSiM (μSiM) عبارة عن منصة ثقافة قائمة على الغشاء لنمذجة الحاجز الدموي الدماغي (BBB). على عكس المنصات التقليدية القائمة على الأغشية ، يوفر μSiM للتجريبيين قدرات جديدة ، بما في ذلك تصوير الخلايا الحية ، وإشارات paracrine دون عوائق بين غرف “الدم” و “الدماغ” ، والقدرة على تصوير التألق المناعي مباشرة دون الحاجة إلى استخراج / إعادة تركيب الأغشية. نوضح هنا الاستخدام الأساسي للمنصة لإنشاء نماذج الزراعة الأحادية (الخلايا البطانية) والثقافة المشتركة (الخلايا البطانية والخلايا المحيطة) ل BBB باستخدام أغشية نيتريد السيليكون النانوية المسامية للغاية. نثبت التوافق مع كل من مزارع الخلايا الأولية ومزارع الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان (hiPSC). نحن نقدم طرقا للتحليل النوعي لنماذج BBB عبر تلطيخ التألق المناعي ونوضح استخدام μSiM للتقييم الكمي لوظيفة الحاجز في مقايسة نفاذية جزيء صغير. يجب أن تمكن الطرق المقدمة المستخدمين من إنشاء نماذج الحواجز الخاصة بهم على المنصة ، مما يعزز استخدام تقنية رقائق الأنسجة لدراسة الأنسجة البشرية.
يتم تقسيم الأنسجة الحية بواسطة خلايا متخصصة تخلق الحواجز وتحافظ عليها وتنظم الخلايا والجزيئات التي يتم نقلها من حجرة إلى أخرى. يمكن أن يكون التنظيم غير السليم لوظائف الحاجز مصدرا لكل من الأمراض الحادة والأمراض المزمنة. الحاجز الدموي الدماغي (BBB) هو حاجز الأنسجة الأكثر تقييدا في جسم الإنسان1. يكمن خلل BBB وراء مجموعة واسعة من أمراض الجهاز العصبي المركزي (CNS) ، بما في ذلك مرض الزهايمر2 ومرض باركنسون3,4 والتصلب المتعدد 5,6. ترتبط إصابة BBB أيضا بضعف إدراكي طويل الأمد نتيجة للاضطرابات الحادة ، مثل الإنتان7 و COVID-198 والهذيان بعد العمليةالجراحية 9. كان تطوير الأدوية التي لديها القدرة على علاج اضطرابات الدماغ صعبا بشكل محبط بسبب التحدي المتمثل في اختراق BBB عمدا لتوصيل الجزيئات النشطة بيولوجيا إلى أهداف في الدماغ10. لهذه الأسباب ، فإن طرق دراسة وظيفة BBB في المختبر لها أهمية قصوى لفهم وعلاج أمراض الجهاز العصبي المركزي.
تتضمن الطرق الأساسية لقياس وظيفة الحاجز في المختبر إنشاء طبقة أحادية أو ثقافة مشتركة على غشاء شبه منفذ وقياس المقاومة التي تنقلها الخلايا إما إلى انتشار الجزيئات الصغيرة أو التيارات الكهربائية الصغيرة11،12،13،14. في حين أن ظهور الأنظمة الفيزيولوجية الدقيقة (MPS) قد أنتج وفرة من الخيارات لنمذجة BBB في 3D15,16 ، فإن تنوع هندسة النظام يجعل من الصعب مقارنة قياسات النفاذية بين MPS أو قيم الأدبيات الثابتة. يعد إنشاء قيم أساسية موثوقة أمرا مهما بشكل خاص في أبحاث BBB حيث ، بسبب التنظيم الواسع للحاجز بواسطة الخلايا البطانية الوعائية في الدماغ ، يتم فحص قيم النفاذية في المختبر بشدة12،17،18. لهذه الأسباب ، ستظل قياسات النفاذية عبر الطبقات الأحادية التي تم إنشاؤها على أغشية 2D عنصرا أساسيا في دراسات BBB لسنوات قادمة. وينطبق هذا على حواجز الأنسجة الأخرى ، بما في ذلك الحواجز الظهارية ، حيث يتم استخدام القيم المطلقة لنفاذية خط الأساس للتحقق من صحة ومقارنة النماذج في المختبر 19،20،21.
بهدف إنشاء أداة جديدة قيمة لمجتمع أبحاث BBB ، قدمنا22 و 23،24،25،26 الجهاز الصغيرالذي يتميز بمنصة Silicon membrane (μSiM) للاستخدام في نمذجة الأنسجة الحاجزة على مدى السنوات ال 5 الماضية. الميزة التمكينية للمنصة هي غشاء فائق النحافة (بسمك <100 نانومتر) مع مئات الملايين من المسام النانوية 27,28 أو مزيج من المسام النانوية والمسام الدقيقة29. يتم إنتاج رقائق الغشاء القائمة بذاتها على “شريحة” سيليكون 300 ميكرومتر تعمل على استقرار الهياكل فائقة النحافة30 وتسمح بالتعامل معها بواسطة ملاقط لتجميع الجهاز. نظرا لطبيعتها فائقة النحافة ، تتمتع الأغشية بنفاذية أعلى بأمرين من الأغشية التقليدية المحفورة بالمسار المستخدمة في أجهزة زراعة الأغشية التجارية31,32. في الممارسة العملية ، هذا يعني أن عائق الغشاء أمام انتشار جزيئات أصغر من المسام النانوية (<60 نانومتر) لا يكاد يذكر33. وبالتالي ، بالنسبة للحواجز الخلوية ، فإن الخلايا والمصفوفات التي ترسبها فقط هي التي ستحدد معدل نقل الجزيئات الصغيرة من المقصورات القمية إلى القاعدية التي يفصلها الغشاء34. يوفر تصميم الجهاز والطبيعة الرقيقة جدا للأغشية أيضا العديد من المزايا للفحص المجهري الضوئي. وتشمل هذه 1) القدرة على متابعة الثقافات الحية باستخدام تباين الطور أو التصوير الميداني الساطع ، 2) القدرة على تلطيخ الفلورسنت والصورة في الموقع دون الحاجة إلى استخراج الغشاء ونقله إلى غطاء زجاجي ، و 3) حقيقة أن الأغشية أرق من “الشرائح” متحدة البؤر بحيث يكون للثقافات المشتركة المباشرة تباعد طبيعي بين أنواع الخلايا أكثر مما يمكن تحقيقه باستخدام أغشية محفورة بسمك 6-10 ميكرومتر.
في الآونة الأخيرة ، قمنا بتطوير النظام الأساسي إلى تنسيق معياري لتسهيل التجميع السريع34 والتخصيص35,36. لقد استفدنا من التنسيق المعياري لتوزيع مكونات الجهاز بين مختبرات الهندسة الحيوية ومختبرات حاجز الدماغ المتعاونة. ثم قمنا بتطوير بروتوكولات لتجميع الأجهزة ، والزراعة الأحادية والزراعة المشتركة ، والتلوين المناعي ، ونفاذية الجزيئات الصغيرة وأظهرنا أن هذه الطرق قابلة للتكرار بين المختبرات. باستخدام هذه البروتوكولات ، أظهرنا أيضا أن النظام الأساسي المعياري يدعم BBB تم التحقق من صحته تم تطويره باستخدام طريقة الثقافة البطانية الممتدة (EECM) لإنشاء خلايا بطانية تشبه الأوعية الدموية الدقيقة في الدماغ (BMEC) من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان (hiPSCs) 37. الغرض من التقرير الحالي هو مراجعة هذه الأساليب بمزيد من التفصيل ، وبمساعدة الفيديو المصاحب ، تسهيل اعتماد النظام الأساسي على نطاق أوسع في مجتمع BBB.
بينما تم تصميم رقائق الغشاء لتحقيق الاستقرار ، يمكن أن تتشقق أو تنكسر إذا تم التعامل معها بشكل غير صحيح أثناء التجميع. وبالتالي ، من الأهمية بمكان الإمساك بالشريحة في شقوق ملاقط الرقاقة ووضعها برفق في التركيبات. عند التعامل مع الأجهزة بشكل عام ، يجب اتخاذ احتياطات إضافية لعدم ارتطام الأجهزة أو إسقاطها. أثناء ربط رقاقة الغشاء بالتركيبات A1 ، يجب وضع الشريحة بشكل مسطح وتوسيطها على عمود التركيب A1 لتجنب تكسير الغشاء أثناء الترابط بالمكون 1. علاوة على ذلك ، يجب تجنب أي اتصال بطبقات PSA المكشوفة بعد إزالة الأقنعة الواقية. عند التعامل مع المكون 2 بعد إزالة الأقنعة الواقية ، ينصح بتثبيته على طول حافة المكون واستخدام الملقط للاستيلاء على زاوية المثلث الخالية من PSA.
بينما تم وصف بروتوكولات زراعة الخلايا لنماذج BBB المحتملة ، فإن نموذج الثقافة المشتركة BMEC / pericyte ل BBB الموصوف هنا قد يكون كافيا أو غير كاف اعتمادا على السياق الفسيولوجي والأسئلة ذات الاهتمام. على سبيل المثال ، يحدث الاتجار بالخلايا المناعية إلى حد كبير في الأوردة التالية للشعيرات الدموية في الدماغ41,42. في هذه المناطق ، يفصل الفضاء حول الأوعية حاجز BMEC / pericyte عن الحدود الدبقية التي أنشأتها الخلايا النجمية. وهكذا ، في الأوردة بعد الشعيرات الدموية ، تتكون الوحدة الوعائية العصبية (NVU) من حاجزين منفصلين جسديا في سلسلة ، ولا تتصل القدمان النجمية مباشرة بحاجز الدم BMEC / pericyte ، والذي يمثله النموذج الحالي بشكل جيد. إذا كان الهدف هو نموذج NVU الذي يفسر تأثير العوامل التي تفرزها الخلايا النجمية على حاجز الدم ، فيمكن إضافة حجرة الخلايا النجمية إلى الجهاز الذي يسمح بتبادل العوامل القابلة للذوبان عبر الفضاء حول الأوعية. تم توضيح هذا المثال سابقا34 ويمكن توسيعه ليشمل خلايا أخرى مثل الخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا العصبية في حجرة “الدماغ” ثلاثية الأبعاد. تتيح البنية المعيارية للمنصة استخدام استراتيجيات التجميع البسيطة لتحقيق عمليات إعادة التشكيل هذه بحيث تكون المنصة بسيطة أو معقدة حسب الحاجة لمعالجة الفرضيات المطروحة. كل إعداد ثقافة الخلية. ومع ذلك ، يجب تحسينها لخطوط الخلايا الجديدة والثقافات المتعددة. على سبيل المثال ، نظرا لخصائص أغشية نيتريد السيليكون ، قد تحتاج محاليل الطلاء إلى التعديل مقارنة بألواح زراعة الأنسجة. يساعد إدراج الفبرونيكتين عادة في ارتباط الخلية وبقائها على قيد الحياة. علاوة على ذلك ، يمكن للمستخدمين زراعة الخلايا البطانية والخلايا المحيطة في اتجاهين متعاكسين. في هذه الحالة ، قد يكون من الضروري تعديل ، على سبيل المثال ، طريقة إجراء قياسات النفاذية وتفسيرها. ومع ذلك ، فإن توفير خطوات لهذا النوع من الثقافة يتجاوز نطاق هذه الورقة.
التحدي الآخر الذي قد يواجهه المرء أثناء زراعة الخلايا هو التبخر السريع للوسائط لأن الأجهزة يمكن أن تكون أكثر حساسية للتغيرات في البيئة مقارنة بألواح وقاروير زراعة الأنسجة القياسية. إذا شوهد التبخر الزائد أو تباطأ نمو الخلايا ، فيجب قياس جميع معلمات الحاضنة الحرجة لضمان الإعدادات الدقيقة. يمكن إضافة المزيد من الماء إلى غطاء الأنسجة أو طبق بتري الصغير الموجود داخل غرفة زراعة الخلايا ، أو يجب تبادل الوسائط بشكل متكرر. علاوة على ذلك ، يمكن أن تدخل الفقاعات القناة السفلية وتتعثر في الخندق لأجهزة الخندق. بينما يمكن إزالتها ، فمن الأسهل تجنب إضافة فقاعات في المقام الأول. للقيام بذلك ، من المهم التحقق من عدم وجود فقاعات في طرف الماصة أو الهواء في نهاية طرف الماصة قبل سحب الوسائط إلى الغرفة السفلية. علاوة على ذلك ، يمكن أن يؤدي تبخر الوسائط في القناة إلى وجود فجوة بين سطح الوسائط وأعلى المنفذ. يمكن سحب حجم صغير من الوسائط في منفذ واحد حتى تصل الوسائط إلى سطح المنفذ المقابل ، وبعد ذلك يمكن تبادل الوسائط في هذا المنفذ المقابل. بينما لا ينبغي تسخين وسائط hECSR و E6 + 10٪ FBS في حمام مائي ، يمكن تسخين الوسائط الأخرى لتقليل تكوين الفقاعة. إذا دخلت فقاعة إلى الغرفة السفلية ، فيمكن إزالتها عن طريق سحب 100 ميكرولتر بسرعة عبر القناة. ومع ذلك ، يمكن أن تؤدي هذه الطريقة إلى التلوث بين الغرف أو الوسائط المنسكبة عبر سطح الجهاز. قد يعطل أيضا طبقات الخلايا. بدلا من ذلك ، يمكن إزالة الوسائط من القناة أولا ثم إعادة تقديمها بحجم 50 ميكرولتر. ومع ذلك ، يمكن أن تؤدي إزالة الوسائط أولا إلى تكوين المزيد من الفقاعات في القناة. إذا لم تكن الفقاعة تحت منطقة الغشاء مباشرة ، فيمكن تركها في القناة دون أي تأثيرات على زراعة الخلايا.
يمكن أن يكون ارتباط الخلايا المحيطة بالخلية ونموها، كما هو موضح في الشكل 2، أمرا صعبا. يعد استخدام كثافة البذر المحسنة أمرا ضروريا لتشكيل طبقة ذات نسبة خلية محيطية إلى بطانة ذات صلة من الناحية الفسيولوجية. علاوة على ذلك ، نظرا لأن الخلايا المحيطة حساسة للقص ، يجب أن تتم جميع عمليات تبادل الوسائط في القناة ببطء شديد لحماية الخلايا. بالنسبة لثقافة BPLC ، يمكن تحقيق ارتباط محسن عن طريق طلاء الغرفة السفلية ب 800 ميكروغرام / مل من الكولاجين من النوع الرابع أو 100 ميكروغرام / مل من الفبرونيكتين.
تتيح الكيمياء المناعية في الأجهزة الموصوفة هنا التحليل النوعي لصحة الخلية ووظيفتها. يجب أن تكون طرق التلوين في ألواح زراعة الأنسجة أو المنصات الأخرى قابلة للترجمة مباشرة إلى المنصة. لزراعة الخلايا في الغرفة العلوية فقط ، بعد التثبيت ، يمكن إضافة PBS إلى الغرفة السفلية وتركها للخطوات المتبقية ، مع إجراء الحجب والتلوين في الغرفة العلوية فقط. هذا يقلل من مخاطر كسر الأغشية أو الحصول على فقاعات في الغرفة السفلية. لتلطيخ الثقافة المشتركة ، نوصي باستخدام كلا الغرفتين في جميع الخطوات. من المهم ملاحظة أن لزوجة المثبت و PBS تختلف عن لزوجة الوسائط. وبالتالي ، قد يكون من الأسهل إضافة فقاعات إلى الحجرة السفلية ، ويجب توخي الحذر الشديد لفحص أطراف الماصة بحثا عن الهواء في نهاية الطرف قبل السحب في الغرفة السفلية.
يسمح البروتوكول الموصوف لمقايسة نفاذية الجزيء الصغير بالتقييم الوظيفي والكمي لوظيفة الحاجز للخلايا البطانية المزروعة في جهاز μSiM. إحدى المشكلات التي قد تتم مواجهتها أثناء هذا الفحص هي سحب فقاعات الهواء إلى الماصة أثناء جمع العينات من القناة السفلية في خطوة البروتوكول 4.1.7.4. لتجنب هذه المشكلة ، من المهم التأكد من إغلاق الطرف في المنفذ قبل البدء في جمع العينات ويجب عدم سحب العينة بسرعة كبيرة. إذا لم يؤد ذلك إلى حل المشكلة ، فقد يكون حجم الأطراف المستخدمة صغيرا جدا أو كبيرا جدا بحيث لا يتناسب مع المنافذ ؛ استخدم النصائح المدرجة في جدول المواد. إذا تم قياس قيم نفاذية عالية بشكل غير متوقع على الرغم من وجود طبقة أحادية متقاربة ذات مظهر صحي ، فيجب التحقق من سلامة الطبقة الأحادية بحثا عن الاضطراب أثناء جمع العينة. نوصي دائما بفحص الطبقة الأحادية تحت المجهر مباشرة بعد جمع العينات. إذا كانت الطبقة الأحادية لا تزال تبدو سليمة وصحية ، فيمكن تثبيت العينة ويمكن تقييم العلامات البيولوجية لوظيفة الحاجز ، على سبيل المثال ، عن طريق التلوين المناعي للبروتينات الموصلية. على العكس من ذلك ، إذا تم قياس قيم نفاذية منخفضة بشكل غير متوقع ، فمن المهم التأكد من أخذ عينات من 50 ميكرولتر من الوسائط من القناة السفلية دون أي فقاعات هواء. إذا خرج الوسط من منفذ أخذ العينات بمجرد وضع طرف الخزان ، فيجب جمع هذه الوسائط قبل تركيب الماصة في منفذ أخذ العينات لأن معظم جزيء الفلورسنت الصغير سيكون موجودا في الحجم الأولي 10 ميكرولتر الذي تم أخذ عينات منه من القناة السفلية. إن رسم دوائر حول المنافذ باستخدام قلم كاره للماء أو وضع شريط كاره للماء به فتحة حول المنفذ يمنع أي وسائط يتم ضخها بشكل سلبي من الانتشار. إذا تم سحب الفقاعات أثناء أخذ العينات أو لم تتم إزالة عينة 50 ميكرولتر الكاملة ، فيجب عدم استخدام العينة. بدلا من ذلك ، يمكن تحديد الحجم الدقيق واستخدامه في حساب النفاذية ؛ ومع ذلك ، يجب أن يتم ذلك فقط إذا كان الحجم الذي تمت إزالته هو ≥40 ميكرولتر ، وهو ما يتوافق مع ~ 98-99٪ استعادة الصبغة34.
The authors have nothing to disclose.
تم تمويل J.L.M. ، B.E. ، T.R.G. ، M.C.M. ، P.K. ، M.T. ، K.C. ، و L.W. من خلال منحة المعاهد الوطنية للصحة R33 HL154249. تم تمويل J.L.M. من قبل R44 GM137651. تم تمويل M.M. من قبل جائزة برنامج شميدت معهد ديل مونتي لعلم الأعصاب ، جامعة روتشستر. تم تمويل M.T. من قبل RF1 AG079138. تم تمويل KC من قبل المؤسسة الدولية للبحوث الأخلاقية.
Antibodies | |||
CD31 Polyclonal antibody | Thermo Fisher Scientific | PA5-32321 | |
Claudin-5 mouse IgG antibody, 4C3C2 | Thermo Fisher Scientific | 35-2500 | |
Goat α-Mouse IgG Alexa Fluor 488 | Thermo Fisher Scientific | A11001 | |
Goat α-Rabbit IgG Alexa Fluor 568 | Thermo Fisher Scientific | A11011 | |
Hoechst 33342 | Life Technologies | H3570 | |
NG2, mouse IgG2a, 9.2.27 | Millipore | MAB2029 | |
Occludin mouse IgG antibody, OC-3F10 | Thermo Fisher Scientific | 33-1500 | |
PDGFRβ, rabbit IgG antibody, 28E1 | Cell Signaling Technology | 3169 | |
VE-cadherin mouse IgG2B Clone # 123413 | R&D Systems | MAB9381 | |
ZO-1 rabbit IgG antibody, polyclonal | Thermo Fisher Scientific | 40-2200 | |
Chemicals, peptides, and recombinant proteins | |||
100% Methanol | VWR | 101443-718 | Can be substituted with similar products |
16% Paraformaldehyde | Thermo Fisher Scientific | 28908 | Can be substituted with similar products |
Accutase | Thermo Fisher Scientific | A1110501 | |
Acetic acid | Sigma-Aldrich | 695092 | |
B27 supplement | Thermo Fischer Scientific | 17504044 | |
bFGF | R&D Systems | 233-FB-025 | |
Collagen IV from human placenta | Sigma-Aldrich | C5533 | |
Collagen, Type I solution from rat tail | Sigma-Aldrich | C3867-1VL | Can be substituted with similar products |
DMEM/Ham’s F12 | Thermo Fisher Scientific | 11320033 | |
EGM-2 Endothelial Cell Growth Medium-2 BulletKit | Lonza | CC-3162 | |
Essential 6 medium | Thermo Fisher Scientific | A1516401 | |
Fetal bovine serum (FBS) | Peak Serum | PS-FB1 | |
Fibronectin from bovine plasma | Sigma-Aldrich | F1141 | |
Fibronectin human protein, plasma | ThermoFisher Scientific | 33016015 | Can be substituted with similar products |
hESFM | Thermo Fisher Scientific | 11111044 | |
Lucifer Yellow CH dilithium salt | Sigma-Aldrich | 861502 | |
Normal goat serum | Thermo Fisher Scientific | 500627 | Can be substituted with similar products |
PBS without calcium, magnesium | Cytiva | SH30256.01 | Can be substituted with similar products |
Pericyte Medium | ScienCell | 1201 | Use complete kit (includes supplements) |
Poly-L-Lysine, 10 mg/mL | ScienCell | 0413 | |
Triton X-100 | JT Baker | X198-05 | Can be substituted with similar products |
UltraPure DNase/RNase-Free Distilled Water | Invitrogen™ | 10977015 | Can be substituted with similar products |
Experimental models: Cell lines | |||
Blood-brain barrier hCMEC/D3 cell line | Sigma-Aldrich | SCC066 | |
Human brain vascular pericytes | ScienCell | 1200 | |
iPS(IMR90)-4 human induced pluripotent stem cells | WiCell | RRID:CVCL_C437 | |
Glassware and Plasticware | |||
150 mm TC-treated Cell Culture Dish with 20 mm Grid | Falcon | 353025 | |
Clamps | VWR | MFLX06832-10 | |
Corning tissue culture plates (6-well) | Corning | 3506 | |
Flat 96-well non-binding microplates | Greiner Bio-One | 655900 | |
Microscope Slide Device Holder | SiMPore | USIM-SB | Dimensions compatible with micropscope slide holders |
Nunc 15 mL Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tubes | Thermo Fischer Scientific | 339651 | |
Nunc 50 mL Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tubes | Thermo Fischer Scientific | 339653 | Tube caps can be filled with water for cell culture |
P20-200 pipette tips | VWR | 76322-516 | Alternate brands may not seal as effectively into ports |
Transwell filters (12 well, 12 mm, 0.4 μm pore size, PC) | CoStar | 3401 | |
Instruments | |||
10X Objective (For Andor) | Nikon Instruments Inc. | MRD00105 | Air; WD: 4 mm; NA 0.45 |
10X Objective (For Nikon) | Nikon Instruments Inc. | MRP40102 | Air; WD: 6.2 mm; NA 0.25 |
40X Objective (LWD) (For Andor) | Nikon Instruments Inc. | MRD77410 | Water immersion; WD: 590-610 mm; NA 1.15 |
Andor Spinning Disc Confocal microscope | Oxford Instruments, Andor | ||
Nikon Eclipse Ts2 Phase Contrast Microscope | Nikon Instruments Inc. | Can be substituted with similar products | |
TECAN Infinite M200 | TECAN | Can be substituted with similar products | |
Other | |||
Advanced PAP Pen | Millipore Sigma | Z672548 | 2 mm tip is recommended |
Assembly kit with fixtures | SiMPore | USIM-JIGSET | Including fixure A1, A2, B1, and B2 |
Camera Adapter for Microscopes | AmScope | CA-CAN-SLR Canon SLR / D-SLR | Φ23.2 – Φ30 adapter fits Nikon Eclipse Ts2 |
Canon EOS Rebel SL3 DSLR Camera | Canon | EOS 250D, BH #CAEDRSL3B, MFR #3453C001 | Can be substituted with similar products |
Cell strainer, 40 µm | Millipore Sigma (Corning) | CLS431750 | |
Component 1 | SiMPore | USIM-C1 | |
Component 2 | SiMPore | USIM-C2 | |
Membrane chips | SiMPore | NPSN100-1L | Other chips formats are available |
SMD handling tweezer double angle | Techni-Tool | 758TW003 | "Chip Tweezers" |
Stainless steel precision type GG tweezer | Techni-Tool | 758TW534 | "Straight Tweezers" |
Software | |||
Fiji | ImageJ | For image processing | |
Fusion | Oxford Instruments, Andor | Instructions for version 2.3.0.44 | |
i-control | TECAN | Instructions for version 2.0 | |
Imaris | Oxford Instruments | For image processing. Instructions for version 9.9.0 |