Протокол описывает методологию внеклеточной регистрации в моторной коре (МК) для выявления внеклеточных электрофизиологических свойств у свободно движущихся мышей, находящихся в сознании, а также анализ данных потенциалов локального поля (LFP) и спайков, что полезно для оценки нейронной активности сети, лежащей в основе интересующего поведения.
Протокол направлен на раскрытие свойств возбуждения нейронов и сетевых локальных полевых потенциалов (LFP) у мышей, выполняющих специфические задачи, путем корреляции электрофизиологических сигналов со спонтанным и/или специфическим поведением. Этот метод представляет собой ценный инструмент в изучении активности нейронной сети, лежащей в основе этого поведения. В статье подробно описана и полная процедура имплантации электродов и последующей внеклеточной регистрации у мышей со свободноподвижным сознанием. Исследование включает в себя детальный метод имплантации микроэлектродных решеток, захвата сигналов LFP и нейрональных спайков в моторной коре (МК) с использованием многоканальной системы и последующего автономного анализа данных. Преимущество многоканальной регистрации у животных, находящихся в сознании, заключается в том, что можно получить и сравнить большее количество спайковых нейронов и подтипов нейронов, что позволяет оценить взаимосвязь между конкретным поведением и связанными с ним электрофизиологическими сигналами. Примечательно, что методика многоканальной внеклеточной регистрации и процедура анализа данных, описанная в настоящем исследовании, могут быть применены и к другим областям мозга при проведении экспериментов на мышах.
Потенциал локального поля (LFP), важный компонент внеклеточных сигналов, отражает синаптическую активность больших популяций нейронов, которые формируют нейронный код длямножественного поведения. Считается, что спайки, генерируемые нейронной активностью, вносят свой вклад в LFP и важны для нейронного кодирования2. Было доказано, что изменения в спайках и LFP опосредуют некоторые заболевания мозга, такие как болезнь Альцгеймера, а также эмоции, такие как страх и т. д. Стоит отметить, что во многих исследованиях было подчеркнуто, что активность спайков значительно различается между бодрствующим и наркозным состояниями у животных5. Несмотря на то, что записи у животных, находящихся под наркозом, дают возможность оценить LFP с минимальными артефактами в строго определенных состояниях синхронизации коры головного мозга, результаты в некоторой степени отличаются от тех, которые можно найти у бодрствующих субъектов 6,7,8. Таким образом, более значимо обнаруживать нейронную активность в длительных временных масштабах и больших пространственных масштабах при различных заболеваниях в бодрствующем состоянии мозга с помощью электродов, имплантированных в мозг. Эта рукопись содержит информацию для начинающих о том, как создать систему микропривода и установить параметры с помощью общего программного обеспечения для быстрого и простого вычисления сигналов спайков и LFP, чтобы начать запись и анализ.
Несмотря на то, что неинвазивная регистрация функций мозга, например, с помощью электроэнцефалограммы (ЭЭГ) и потенциалов, связанных с событиями (ERP), регистрируемых с кожи головы, широко используется в исследованиях на людях и грызунах, данные ЭЭГ и ERP имеют низкие пространственные и временные свойства и, таким образом, не могут обнаружить точные сигналы, производимые близлежащей дендритной синаптической активностью вопределенной области мозга. В настоящее время, используя преимущества многоканальной записи у животных, находящихся в сознании, нейронная активность в более глубоких слоях мозга может регистрироваться хронически и прогрессивно путем имплантации системы микродрайвов в мозг приматов или грызунов во время многочисленных поведенческих тестов 1,2,3,4,5,6,7,8,9 . Короче говоря, исследователи могут сконструировать систему микроприводов, которая может быть использована для независимого позиционирования электродов или тетродов для воздействия на различныечасти мозга. Например, Chang et al. описали методы регистрации спайков и LFP у мышей путем сборки легкого и компактного микропривода12. Кроме того, коммерчески доступны микромеханические кремниевые зонды с изготовленными по индивидуальному заказу вспомогательными компонентами для регистрации нескольких одиночных нейронов и LFP у грызунов во время выполнения поведенческих задач13. Несмотря на то, что для сборки систем микроприводов использовались различные конструкции, они по-прежнему имеют ограниченный успех с точки зрения сложности и веса всей системы микроприводов. Например, Lansink et al. показали многоканальную микроприводную систему со сложной структурой для записи из одной области мозга14. Sato et al. сообщили о многоканальной системе микропривода, демонстрирующей функцию автоматического гидравлического позиционирования15. Основные недостатки этих микроприводных систем заключаются в том, что они слишком тяжелые, чтобы мыши могли свободно двигаться, и их сложно собрать новичкам. Несмотря на то, что многоканальная внеклеточная запись показала себя подходящей и эффективной технологией для измерения нейронной активности во время поведенческих тестов, новичкам нелегко записывать и анализировать сигналы, полученные сложной системой микропривода. Учитывая, что у свободно движущихся мышей сложно запустить весь процесс работы многоканальной внеклеточной регистрации и анализа данных16,17, в настоящей статье представлены упрощенные рекомендации по ознакомлению с подробным процессом создания микроприводной системы с использованием общедоступных компонентов и настроек; Кроме того, в общем программном обеспечении предусмотрены параметры для быстрого и простого вычисления сигналов спайка и LFP. Кроме того, в этом протоколе мышь может свободно перемещаться за счет использования гелиевого баллона, что способствует компенсации веса головной сцены и системы микропривода. В целом, в настоящем исследовании мы описываем, как легко построить систему микроприводов и оптимизировать процессы записи и анализа данных.
Многоканальная запись на свободно движущихся мышах считается полезной технологией в исследованиях нейробиологии, но новичкам все еще довольно сложно записывать и анализировать сигналы. В настоящем исследовании мы предоставляем упрощенные рекомендации по созданию микроприводных си…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана грантами Национального фонда естественных наук Китая (31871170, 32170950 и 31970915), Фонда естественных наук провинции Гуандун (2021A1515010804 и 2023A1515010899), Гуандунского фонда естественных наук для крупного проекта по выращиванию (2018B030336001) и Гранта Гуандуна: ключевые технологии для лечения заболеваний головного мозга (2018B030332001).
2.54 mm pin header | YOUXIN Electronic Co., Ltd. | 1 x 5 | Applying for the movable micro-drive which can slide on its stulls. |
Adobe Illustrator CC 2017 | Adobe | N/A | To optimize images from GraphPad. |
BlackRock Microsystems | Blackrock Neurotech | Cerebus | This systems includes headsatge, DA convert, amplifier and computer. |
Brass nut | Dongguan Gaosi Technology Co., Ltd. | M0.8 brass nut | The nut fixes the position of screw. |
Brass screw | Dongguan Gaosi Technology Co., Ltd. | M0.8 x 11 mm brass screw | A screw that hold the movable micro-drive. |
C57BL/6J | Guangdong Zhiyuan Biomedical Technology Co., LTD. | N/A | 12 weeks of age. |
Centrifuge tube | Biosharp | 15 mL; BS-150-M | To store mice brain with sucrose sulutions. |
Conducting paint | Structure Probe, Inc. | 7440-22-4 | To improve the lead-connecting quality between connector pins and Ni-wires. |
Conductive copper foil tape | 3M | 1181 | To reduce interferenc. |
Connector | YOUXIN Electronic Co., Ltd. | 2 x 10P | To connect the headtage to micro-drive system. |
DC Power supply | Maisheng | MS-305D | A power device for electrolytic lesion. |
Dental cement | Shanghai New Century Dental Materials Co., Ltd. | N/A | To fix the electrode arrays on mouse's skull after finishing the implantation. |
Digital analog converter | Blackrock | 128-Channel | A device that converts digital data into analog signals. |
Epoxy resin | Alteco | N/A | To cover pins. |
Excel | Microsoft | N/A | To summarize data after analysis. |
Eye scissors | JiangXi YuYuan Medical Equipment Co.,Ltd. | N/A | For surgery or cutting the Ni-chrome wire. |
Fine forceps | JiangXi YuYuan Medical Equipment Co.,Ltd. | N/A | For surgery. |
Forceps | JiangXi YuYuan Medical Equipment Co.,Ltd. | N/A | For surgery or assembling the mirco-drive system. |
Freezing microtome | Leica | CM3050 S | Cut the mouse’s brain into slices |
Fused silica capillary tubing | Zhengzhou INNOSEP Scientific Co., Ltd. | TSP050125 | To serve as the guide tubes for Ni-chrome wires. |
Glass microelectrode | Sutter Instrument Company | BF100-50-10 | To mark the desired locations for implantation using the filled ink. |
GraphPad Prism 7 | GraphPad Software | N/A | To analyze and visualize the results. |
Guide-tube | Polymicro technologies | 1068150020 | To load Ni-chrome wires. |
Headstage | Blackrock | N/A | A tool of transmitting signals. |
Helium balloon | Yili Festive products Co., Ltd. | 24 inch | To offset the weight of headstage and micro-drive system. |
Ink | Sailor Pen Co.,LTD. | 13-2001 | To mark the desired locations for implantation. |
Iodine tincture | Guangdong Hengjian Pharmaceutical Co., Ltd. | N/A | To disinfect mouse's scalp. |
Lincomycin in Hydrochloride and Lidocaine hydrochloride gel | Hubei kangzheng pharmaceutical co., ltd. | 10g | A drug used to reduce inflammation. |
Meloxicam | Vicki Biotechnology Co., Ltd. | 71125-38-7 | To reduce postoperative pain in mice. |
Micromanipulators | Scientifica | Scientifica IVM Triple | For electrode arrays implantation. |
Microscope | Nikon | ECLIPSE Ni-E | Capture the images of brain sections |
nanoZ impedance tester | Plexon | nanoZ | To measure impedance or performing electrode impedance spectroscopy (EIS) for multichannel microelectrode arrays. |
NeuroExplorer | Plexon | NeuroExplorer | A tool for analyzing the electrophysiological data. |
NeuroExplorer | Plexon, USA | N/A | A software. |
Ni-chrome wire | California Fine Wire Co. | M472490 | 35 μm Ni-chrome wire. |
Offline Sorter | Plexon | Offline Sorter | A tool for sorting the recorded multi-units. |
PCB board | Hangzhou Jiepei Information Technology Co., Ltd. | N/A | Computer designed board. |
Pentobarbital | Sigma | P3761 | To anesthetize mice. |
Pentobarbital sodium | Sigma | 57-33-0 | To anesthetize the mouse. |
Peristaltic pump | Longer | BT100-1F | A device used for perfusion |
Polyformaldehyde | Sangon Biotech | A500684-0500 | The main component of fixative solution for fixation of mouse brains |
PtCl4 | Tianjin Jinbolan Fine Chemical Co., Ltd. | 13454-96-1 | Preparation for gold plating liquid. |
Saline | Guangdong Hengjian Pharmaceutical Co., Ltd. | N/A | To clean the mouse's skull. |
Silver wire | Suzhou Xinye Electronics Co., Ltd. | 2 mm diameter | Applying for ground and reference electrodes. |
Skull drill | RWD Life Science | 78001 | To drill carefully two small holes on mouse's skull. |
Stainless steel screws | YOUXIN Electronic Co., Ltd. | M0.8 x 2 | To protect the micro-drive system and link the ground and reference electrodes. |
Stereotaxic apparatus | RWD Life Science | 68513 | To perform the stereotaxic coordinates of bilateral motor cortex. |
Sucrose | Damao | 57-50-1 | To dehydrate the mouse brains after perfusion. |
Super glue | Henkel AG & Co. | PSK5C | To fix the guide tube and Ni-chrome wire. |
Temperature controller | Harvard Apparatus | TCAT-2 | To maintain mouse's rectal temperature at 37°C |
Tetracycline eye ointment | Guangdong Hengjian Pharmaceutical Co., Ltd. | N/A | To protect the mouse's eyes during surgery. |
Thread | Rapala | N/A | To link ballon and headstage. |
Vaseline | Unilever plc | N/A | To cover the gap between electrode arrays and mouse's skull. |