Summary

Многоканальная внеклеточная запись у свободно движущихся мышей

Published: May 26, 2023
doi:

Summary

Протокол описывает методологию внеклеточной регистрации в моторной коре (МК) для выявления внеклеточных электрофизиологических свойств у свободно движущихся мышей, находящихся в сознании, а также анализ данных потенциалов локального поля (LFP) и спайков, что полезно для оценки нейронной активности сети, лежащей в основе интересующего поведения.

Abstract

Протокол направлен на раскрытие свойств возбуждения нейронов и сетевых локальных полевых потенциалов (LFP) у мышей, выполняющих специфические задачи, путем корреляции электрофизиологических сигналов со спонтанным и/или специфическим поведением. Этот метод представляет собой ценный инструмент в изучении активности нейронной сети, лежащей в основе этого поведения. В статье подробно описана и полная процедура имплантации электродов и последующей внеклеточной регистрации у мышей со свободноподвижным сознанием. Исследование включает в себя детальный метод имплантации микроэлектродных решеток, захвата сигналов LFP и нейрональных спайков в моторной коре (МК) с использованием многоканальной системы и последующего автономного анализа данных. Преимущество многоканальной регистрации у животных, находящихся в сознании, заключается в том, что можно получить и сравнить большее количество спайковых нейронов и подтипов нейронов, что позволяет оценить взаимосвязь между конкретным поведением и связанными с ним электрофизиологическими сигналами. Примечательно, что методика многоканальной внеклеточной регистрации и процедура анализа данных, описанная в настоящем исследовании, могут быть применены и к другим областям мозга при проведении экспериментов на мышах.

Introduction

Потенциал локального поля (LFP), важный компонент внеклеточных сигналов, отражает синаптическую активность больших популяций нейронов, которые формируют нейронный код длямножественного поведения. Считается, что спайки, генерируемые нейронной активностью, вносят свой вклад в LFP и важны для нейронного кодирования2. Было доказано, что изменения в спайках и LFP опосредуют некоторые заболевания мозга, такие как болезнь Альцгеймера, а также эмоции, такие как страх и т. д. Стоит отметить, что во многих исследованиях было подчеркнуто, что активность спайков значительно различается между бодрствующим и наркозным состояниями у животных5. Несмотря на то, что записи у животных, находящихся под наркозом, дают возможность оценить LFP с минимальными артефактами в строго определенных состояниях синхронизации коры головного мозга, результаты в некоторой степени отличаются от тех, которые можно найти у бодрствующих субъектов 6,7,8. Таким образом, более значимо обнаруживать нейронную активность в длительных временных масштабах и больших пространственных масштабах при различных заболеваниях в бодрствующем состоянии мозга с помощью электродов, имплантированных в мозг. Эта рукопись содержит информацию для начинающих о том, как создать систему микропривода и установить параметры с помощью общего программного обеспечения для быстрого и простого вычисления сигналов спайков и LFP, чтобы начать запись и анализ.

Несмотря на то, что неинвазивная регистрация функций мозга, например, с помощью электроэнцефалограммы (ЭЭГ) и потенциалов, связанных с событиями (ERP), регистрируемых с кожи головы, широко используется в исследованиях на людях и грызунах, данные ЭЭГ и ERP имеют низкие пространственные и временные свойства и, таким образом, не могут обнаружить точные сигналы, производимые близлежащей дендритной синаптической активностью вопределенной области мозга. В настоящее время, используя преимущества многоканальной записи у животных, находящихся в сознании, нейронная активность в более глубоких слоях мозга может регистрироваться хронически и прогрессивно путем имплантации системы микродрайвов в мозг приматов или грызунов во время многочисленных поведенческих тестов 1,2,3,4,5,6,7,8,9 . Короче говоря, исследователи могут сконструировать систему микроприводов, которая может быть использована для независимого позиционирования электродов или тетродов для воздействия на различныечасти мозга. Например, Chang et al. описали методы регистрации спайков и LFP у мышей путем сборки легкого и компактного микропривода12. Кроме того, коммерчески доступны микромеханические кремниевые зонды с изготовленными по индивидуальному заказу вспомогательными компонентами для регистрации нескольких одиночных нейронов и LFP у грызунов во время выполнения поведенческих задач13. Несмотря на то, что для сборки систем микроприводов использовались различные конструкции, они по-прежнему имеют ограниченный успех с точки зрения сложности и веса всей системы микроприводов. Например, Lansink et al. показали многоканальную микроприводную систему со сложной структурой для записи из одной области мозга14. Sato et al. сообщили о многоканальной системе микропривода, демонстрирующей функцию автоматического гидравлического позиционирования15. Основные недостатки этих микроприводных систем заключаются в том, что они слишком тяжелые, чтобы мыши могли свободно двигаться, и их сложно собрать новичкам. Несмотря на то, что многоканальная внеклеточная запись показала себя подходящей и эффективной технологией для измерения нейронной активности во время поведенческих тестов, новичкам нелегко записывать и анализировать сигналы, полученные сложной системой микропривода. Учитывая, что у свободно движущихся мышей сложно запустить весь процесс работы многоканальной внеклеточной регистрации и анализа данных16,17, в настоящей статье представлены упрощенные рекомендации по ознакомлению с подробным процессом создания микроприводной системы с использованием общедоступных компонентов и настроек; Кроме того, в общем программном обеспечении предусмотрены параметры для быстрого и простого вычисления сигналов спайка и LFP. Кроме того, в этом протоколе мышь может свободно перемещаться за счет использования гелиевого баллона, что способствует компенсации веса головной сцены и системы микропривода. В целом, в настоящем исследовании мы описываем, как легко построить систему микроприводов и оптимизировать процессы записи и анализа данных.

Protocol

Все мыши были получены коммерческим путем и содержались в цикле 12 ч свет/12 ч темнота (свет включается в 08:00 утра по местному времени) при комнатной температуре 22-25 °C и относительной влажности 50%-60%. Мыши имели доступ к постоянному снабжению пищей и водой. Все эксперименты проводились в соо…

Representative Results

Фильтр высоких частот (250 Гц) был применен для извлечения многозначных пиков из необработанных сигналов (рис. 6A). Кроме того, были верифицированы записанные единицы измерения из МС обычной мыши, отсортированные по PCA (рис. 7A-D), а также были…

Discussion

Многоканальная запись на свободно движущихся мышах считается полезной технологией в исследованиях нейробиологии, но новичкам все еще довольно сложно записывать и анализировать сигналы. В настоящем исследовании мы предоставляем упрощенные рекомендации по созданию микроприводных си…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Эта работа была поддержана грантами Национального фонда естественных наук Китая (31871170, 32170950 и 31970915), Фонда естественных наук провинции Гуандун (2021A1515010804 и 2023A1515010899), Гуандунского фонда естественных наук для крупного проекта по выращиванию (2018B030336001) и Гранта Гуандуна: ключевые технологии для лечения заболеваний головного мозга (2018B030332001).

Materials

2.54 mm pin header YOUXIN Electronic Co., Ltd. 1 x 5 Applying for the movable micro-drive which can slide on its stulls.
Adobe Illustrator CC 2017 Adobe N/A To optimize images from GraphPad.
BlackRock Microsystems Blackrock Neurotech Cerebus This systems includes headsatge, DA convert, amplifier and computer.
Brass nut Dongguan Gaosi Technology Co., Ltd. M0.8 brass nut The nut fixes the position of screw.
Brass screw Dongguan Gaosi Technology Co., Ltd. M0.8 x 11 mm brass screw A screw that hold the movable micro-drive.
C57BL/6J Guangdong Zhiyuan Biomedical Technology Co., LTD. N/A 12 weeks of age.
Centrifuge tube Biosharp 15 mL; BS-150-M To store mice brain with sucrose sulutions.
Conducting paint Structure Probe, Inc. 7440-22-4 To improve the lead-connecting quality between connector pins and Ni-wires.
Conductive copper foil tape 3M 1181 To reduce interferenc.
Connector YOUXIN Electronic Co., Ltd. 2 x 10P To connect the headtage to micro-drive system.
DC Power supply Maisheng MS-305D A power device for  electrolytic lesion.
Dental cement Shanghai New Century Dental Materials Co., Ltd. N/A To fix the electrode arrays on mouse's skull after finishing the implantation.
Digital analog converter Blackrock 128-Channel A device that converts digital data into analog signals.
Epoxy resin Alteco N/A To cover pins.
Excel Microsoft N/A To summarize data after analysis.
Eye scissors JiangXi YuYuan Medical Equipment Co.,Ltd. N/A For surgery or cutting the Ni-chrome wire.
Fine forceps JiangXi YuYuan Medical Equipment Co.,Ltd. N/A For surgery.
Forceps JiangXi YuYuan Medical Equipment Co.,Ltd. N/A For surgery or assembling the mirco-drive system.
Freezing microtome Leica CM3050 S  Cut the mouse’s brain into slices
Fused silica capillary tubing Zhengzhou INNOSEP Scientific Co., Ltd. TSP050125 To  serve as the guide tubes for Ni-chrome wires.
Glass microelectrode Sutter Instrument Company BF100-50-10 To mark the desired locations for implantation using the filled ink.
GraphPad Prism 7 GraphPad Software N/A To analyze and visualize the results.
Guide-tube Polymicro technologies 1068150020 To load Ni-chrome wires.
Headstage Blackrock N/A A tool of transmitting signals.
Helium balloon Yili Festive products Co., Ltd. 24 inch To offset the weight of headstage and micro-drive system.
Ink Sailor Pen Co.,LTD. 13-2001 To mark the desired locations for implantation.
Iodine tincture Guangdong Hengjian Pharmaceutical Co., Ltd. N/A To disinfect mouse's scalp.
Lincomycin in Hydrochloride and Lidocaine  hydrochloride gel Hubei kangzheng pharmaceutical co., ltd. 10g A drug used to reduce inflammation.
Meloxicam Vicki Biotechnology Co., Ltd. 71125-38-7 To reduce postoperative pain in mice.
Micromanipulators Scientifica Scientifica IVM Triple For electrode arrays implantation.
Microscope  Nikon ECLIPSE Ni-E  Capture the images of brain sections
nanoZ impedance tester Plexon nanoZ To measure impedance or performing electrode impedance spectroscopy (EIS) for multichannel microelectrode arrays.
NeuroExplorer Plexon NeuroExplorer A tool for analyzing the electrophysiological data.
NeuroExplorer  Plexon, USA N/A A software.
Ni-chrome wire California Fine Wire Co. M472490 35 μm Ni-chrome wire.
Offline Sorter Plexon Offline Sorter A tool for sorting the recorded multi-units.
PCB board Hangzhou Jiepei Information Technology Co., Ltd. N/A Computer designed board.
Pentobarbital Sigma P3761 To anesthetize mice.
Pentobarbital sodium Sigma 57-33-0 To anesthetize the mouse.
Peristaltic pump Longer BT100-1F A device used for perfusion
Polyformaldehyde  Sangon Biotech A500684-0500 The main component of fixative solution for fixation of mouse brains 
PtCl4 Tianjin Jinbolan Fine Chemical Co., Ltd. 13454-96-1 Preparation for gold plating liquid.
Saline Guangdong Hengjian Pharmaceutical Co., Ltd. N/A To clean the mouse's skull.
Silver wire Suzhou Xinye Electronics Co., Ltd. 2 mm diameter Applying for ground and reference electrodes.
Skull drill RWD Life Science 78001 To drill carefully two small holes on mouse's skull.
Stainless steel screws YOUXIN Electronic Co., Ltd. M0.8 x 2 To protect the micro-drive system and link the ground and reference electrodes.
Stereotaxic apparatus RWD Life Science 68513 To perform the stereotaxic coordinates of bilateral motor cortex.
Sucrose Damao 57-50-1 To dehydrate the mouse brains  after perfusion.
Super glue Henkel AG & Co. PSK5C To fix the guide tube and Ni-chrome wire.
Temperature controller Harvard Apparatus TCAT-2 To maintain mouse's rectal temperature at 37°C
Tetracycline eye ointment Guangdong Hengjian Pharmaceutical Co., Ltd. N/A To protect the mouse's eyes during surgery.
Thread Rapala N/A To link ballon and headstage.
Vaseline Unilever plc N/A To cover the gap between electrode arrays and mouse's skull.

References

  1. Buzsáki, G., Anastassiou, C. A., Koch, C. The origin of extracellular fields and currents–EEG, ECoG, LFP and spikes. Nature Reviews Neuroscience. 13 (6), 407-420 (2012).
  2. Singer, W. Synchronization of cortical activity and its putative role in information processing and learning. Annual Review of Physiology. 55, 349-374 (1993).
  3. Arroyo-García, L. E., et al. Impaired spike-gamma coupling of area CA3 fast-spiking interneurons as the earliest functional impairment in the App(NL-G-F) mouse model of Alzheimer’s disease. Molecular Psychiatry. 26 (10), 5557-5567 (2021).
  4. Ozawa, M., et al. Experience-dependent resonance in amygdalo-cortical circuits supports fear memory retrieval following extinction. Nature Communications. 11 (1), 4358 (2020).
  5. Vinck, M., Batista-Brito, R., Knoblich, U., Cardin, J. A. Arousal and locomotion make distinct contributions to cortical activity patterns and visual encoding. Neuron. 86 (3), 740-754 (2015).
  6. Beck, M. H., et al. long-term dopamine depletion causes enhanced beta oscillations in the cortico-basal ganglia loop of parkinsonian rats. Experimental Neurology. 286, 124-136 (2016).
  7. Magill, P. J., Bolam, J. P., Bevan, M. D. Relationship of activity in the subthalamic nucleus-globus pallidus network to cortical electroencephalogram. Journal of Neuroscience. 20 (2), 820-833 (2000).
  8. Magill, P. J., et al. Changes in functional connectivity within the rat striatopallidal axis during global brain activation in vivo. Journal of Neuroscience. 26 (23), 6318-6329 (2006).
  9. Rapeaux, A. B., Constandinou, T. G. Implantable brain machine interfaces: First-in-human studies, technology challenges and trends. Current Opinion in Biotechnology. 72, 102-111 (2021).
  10. Tort, A. B., et al. Dynamic cross-frequency couplings of local field potential oscillations in rat striatum and hippocampus during performance of a T-maze task. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (51), 20517-20522 (2008).
  11. Yamamoto, J., Wilson, M. A. Large-scale chronically implantable precision motorized microdrive array for freely behaving animals. Journal of Neurophysiology. 100 (4), 2430-2440 (2008).
  12. Chang, E. H., Frattini, S. A., Robbiati, S., Huerta, P. T. Construction of microdrive arrays for chronic neural recordings in awake behaving mice. Journal of Visualized Experiments. (77), e50470 (2013).
  13. Vandecasteele, M., et al. Large-scale recording of neurons by movable silicon probes in behaving rodents. Journal of Visualized Experiments. (61), e3568 (2012).
  14. Lansink, C. S., et al. A split microdrive for simultaneous multi-electrode recordings from two brain areas in awake small animals. Journal of Neuroscience Methods. 162 (1-2), 129-138 (2007).
  15. Sato, T., Suzuki, T., Mabuchi, K. A new multi-electrode array design for chronic neural recording, with independent and automatic hydraulic positioning. Journal of Neuroscience Methods. 160 (1), 45-51 (2007).
  16. van Daal, R. J. J., et al. Implantation of Neuropixels probes for chronic recording of neuronal activity in freely behaving mice and rats. Nature Protocols. 16 (7), 3322-3347 (2021).
  17. Unakafova, V. A., Gail, A. Comparing open-source toolboxes for processing and analysis of spike and local field potentials data. Frontiers in Neuroinformatics. 13, 57 (2019).
  18. Mao, L., Wang, H., Qiao, L., Wang, X. Disruption of Nrf2 enhances the upregulation of nuclear factor-kappaB activity, tumor necrosis factor-alpha, and matrix metalloproteinase-9 after spinal cord injury in mice. Mediators of Inflammation. 2010, 238321 (2010).
  19. Jin, Z., Zhang, Z., Ke, J., Wang, Y., Wu, H. Exercise-linked irisin prevents mortality and enhances cognition in a mice model of cerebral ischemia by regulating Klotho expression. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 1697070 (2021).
  20. Ding, X., et al. Spreading of TDP-43 pathology via pyramidal tract induces ALS-like phenotypes in TDP-43 transgenic mice. Acta Neuropathologica Communications. 9 (1), 15 (2021).
  21. Cao, W., et al. Gamma oscillation dysfunction in mPFC leads to social deficits in neuroligin 3 R451C knockin mice. Neuron. 97 (6), 1253-1260 (2018).

Play Video

Cite This Article
Ghouse, M., Li, M., Long, C., Jiang, J. Multichannel Extracellular Recording in Freely Moving Mice. J. Vis. Exp. (195), e65245, doi:10.3791/65245 (2023).

View Video