JoVE Journal > Medicine
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Türkçe

Automatically Generated
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Medicine

Fundus Otofloresansında Yaşa Bağlı Makula Dejenerasyonu Lezyonuna Özgü Varyasyonları Kantitatif Olarak Belirlemek İçin Bir İş Akışı

Published: May 26, 2023
doi:
10.3791/65238
, , , ,
1Department of Ophthalmology,University of Bonn, 2Department of Ophthalmology and Visual Sciences,University of Alabama at Birmingham

Summary

Bu araştırma, fundus boyunca değişen otofloresan seviyelerini hesaba katarken, bireysel ilgi bölgelerinden (örneğin, yaşa bağlı makula dejenerasyonunda [AMD] drusen ve subretinal drusenoid birikintileri) otofloresan seviyelerini belirlemek ve karşılaştırmak için bir iş akışını açıklamaktadır.

Abstract

Fundus otofloresan (FAF) görüntüleme, oküler fundusun intrinsik floroforlarının, özellikle retina pigment epitelinin (RPE) noninvaziv haritalanmasına izin verir, artık konfokal taramalı lazer oftalmoskopi tabanlı kantitatif otofloresansın (QAF) ortaya çıkmasıyla ölçülebilir. Yaşa bağlı makula dejenerasyonunda (YBMD) QAF’nin genellikle arka kutupta azaldığı gösterilmiştir. QAF ile çeşitli AMD lezyonları (druzen, subretinal drusenoid birikintileri) arasındaki ilişki hala belirsizdir.

Bu yazıda AMD’de lezyona özgü QAF’yi belirlemek için bir iş akışı açıklanmaktadır. Spektral alan optik koherens tomografi (SD-OCT), makula volüm taraması ve QAF dahil ancak bunlarla sınırlı olmamak üzere multimodal bir in vivo görüntüleme yaklaşımı kullanılır. Özelleştirilmiş FIJI eklentileri kullanılarak, karşılık gelen QAF görüntüsü, SD-OCT taramasından alınan yakın kızılötesi görüntüyle hizalanır (karakteristik yer işaretleri; yani, damar çatallanmaları). Foveola ve optik sinir başının kenarı, analiz ızgaralarının doğru konumlandırılması için OCT görüntülerinde işaretlenir (ve kayıtlı QAF görüntüsüne aktarılır).

AMD’ye özgü lezyonlar daha sonra tek tek OCT BScan’larda veya QAF görüntüsünün kendisinde işaretlenebilir. Normatif QAF haritaları, fundus boyunca QAF değerlerinin değişen ortalama ve standart sapmasını hesaba katmak için oluşturulur (normatif standart retinal QAF AMD haritaları oluşturmak için temsili bir AMD grubundan alınan QAF görüntülerinin ortalaması alınmıştır). Eklentiler, X ve Y koordinatlarını, z-skorunu (ortalamadan standart sapma açısından AF haritalarının ortalamasına göre QAF değerini tanımlayan sayısal bir ölçüm), ortalama yoğunluk değerini, standart sapmayı ve işaretlenen piksel sayısını kaydeder. Araçlar ayrıca işaretli lezyonların sınır bölgesinden z-skorlarını da belirler. Bu iş akışı ve analiz araçları, AMD’de patofizyoloji ve klinik AF görüntü yorumlamasının anlaşılmasını geliştirecektir.

Introduction

Fundus otofloresan (FAF) görüntüleme, oküler fundus1’in doğal ve patolojik olarak oluşan floroforlarının invaziv olmayan bir haritalamasını sağlar. En yaygın mavi (488 nm eksitasyon) otofloresan (AF), retina pigment epitelinin (RPE) lipofusin ve melanolipofuscin granüllerini uyarır2,3,4. Granüllerin dağılımı ve artışı/azalması normal yaşlanmada ve yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) dahil olmak üzere çeşitli retina hastalıklarında merkezi bir rol oynar5.

FAF’ın daha da geliştirilmiş bir özelliği olan kantitatif fundus otofloresan (QAF), artık topografik olarak çözülmüş retinal AF yoğunluklarınındoğru bir şekilde belirlenmesine olanak tanımaktadır 4,6. FAF görüntüleme cihazının optik yoluna bir referans eklenerek, AF yoğunlukları cihazlar, zaman noktaları ve nesneler arasında karşılaştırılabilir. Bu teknik, AMD’de varsayılan bir patogenetik faktörle ilgili olarak bir paradigma kaymasına neden olmuştur ve bunun uzun süredir RPE hücrelerinde aşırı lipofusin birikimine bağlı olduğu tahmin edilmektedir7. Bununla birlikte, AF’nin histolojik ve klinik kantifikasyonu, AF’de önerilen artış yerine AMD’de bir azalma (otofloresan lipofusin ve melanolipofusin granüllerinin yeniden dağılımı ve kaybı nedeniyle) ortaya koymuştur 8,9,10.

AF’nin izlenmesinin klinik etkileri vardır. Von der Emde ve ark. ve diğerleri, yüksek riskli, orta düzey AMD gözlerinde AF’nin sadece azalmakla kalmayıp, aynı zamanda AMD seyrinde daha da azaldığını göstermiştir 8,9. Ek olarak, histolojik çalışmalar, AMD’den etkilenen RPE hücrelerinin çoğunun, yitim, dökülme, göç veya atrofi yoluyla RPE hücre kaybından önce granül agregasyonu ve ekstrüzyonu ile karakteristik bir davranış gösterdiğini göstermektedir13,14,15,16. Bu ayrıca, AF kaybının yaklaşmakta olan hastalık ilerlemesinin bir tetikleyicisi veya vekil sinyali olabileceğini gösterir.

Şimdiye kadar yapılan QAF çalışmaları, AF’yi küresel olarak yalnızca arka kutupta prefabrike ızgara kutupsal koordinat sistemlerinde (örneğin, QAF8 / Delori Izgarası) değerlendirmiştir17. AF’yi ölçmek için önceden hazırlanmış ızgaraların kullanılması, bir nesnenin gözü başına önceden belirlenmiş alanlarda birden fazla AF değeri elde edilmesini sağlar. AF değerlerinin bu şekilde araştırılması, patolojik olarak değişmiş AF’ye sahip alanlarda, örneğin AMD’de druzen veya subretinal drusenoid birikintilerinin (SDD’ler) üstünde veya yakınında lokal değişiklikleri gözden kaçırabilir. Drusen ve daha yüksek derecede SDD’ler, geç AMD ve görme kaybı geliştirme riski ile ilişkilidir. Özellikle Drusen, uzun yıllar boyunca boyut olarak artan tipik bir döngüye sahiptir ve atrofiden önce hızla bozulabilir. Örneğin, AMD’de global AF’nin azaldığı, ancak bu spesifik hastalıkla ilişkili fokal lezyonların içinde ve çevresinde arttığı veya daha da azaldığı düşünülebilir.

Farklı lokal AF paternleri de hastalığın ilerlemesi için prognostik öneme sahip olabilir. Örneğin, otofloresan seviyeleri, drusen’in boyutunun artıp artmadığını veya zaten atrofiye gerileyip gerilemediğini değerlendirmek için kullanılabilir. Coğrafi atrofide değişen AF perilezyonel paternlerinin zaman içinde atrofi ilerlemesini büyük ölçüde etkilediği zaten gösterilmiştir18. Ek olarak, yerel otofloresan paternleri, RPE’nin sağlığı hakkında daha fazla ayrıntı ortaya çıkarabilir. Çoğu zaman, optik koherens tomografi (OCT), RPE tabakası sağlam görünmesine rağmen, koryokapillarise hiperreflektans gösterir. Lokal QAF değerleri ve OKT’yi birleştiren multimodal bir yaklaşım, yüksek RPE bozulması ve yaklaşan atrofi riski olan lezyonları ayırt etmeye yardımcı olabilir.

Çalışmalarda uzamsal olarak çözümlenmiş analizlerin yapılmamasının bir nedeni, en yaygın olarak kullanılan üretici yazılımının bu tür analizler için bir araç sağlamamasıdır. YBMD hastalığının evresine bağlı olarak farklı lezyonların AF özellikleri, YBMD’nin patogenezini daha iyi açıklayabilir. Bu nedenle, bölgesel, lezyona özgü AF’yi ölçmek için bir araç arzu edilir. Retina boyunca yer alan lezyonları doğru bir şekilde karşılaştırmak için, iş akışının insan fundusunda değişen derecelerde AF’yi hesaba katacak bir yola ihtiyacı vardır19. En merkezi olarak, makula pigmentinin gölgeleme etkileri ve farklı granül sayıları nedeniyle AF karakteristik olarak daha düşüktür20,21.

AF ~ 9 ° ‘de (foveaya her yönden olan mesafe) zirveye ulaşır ve periferik olarak büyük ölçüde azalır4. Bu nedenle, yumuşak druzen (düşük AF alanlarında fovea ve parafoveada bulunur) ve SDD’lerden (yüksek AF alanlarında parasantral olarak bulunur) AF seviyelerinin mutlak değerleri karşılaştırılırsa, sonuçlar karşılaştırılabilir olmayacaktır22. Pfau ve ark. fundus kontrollü perimetri için duyarlılık kaybı (sağlıklı kontrollerin görme tepesi [foveaya olan mesafe ile azalan retina duyarlılığı] için AMD’de ölçülen duyarlılığın düzeltilmesi) kavramından esinlenerek, AF, makula boyunca standartlaştırılmış AF değerleri ile karşılaştırılır23,24. Sonuçlar z-skorları (ilgilenilen bölge değerinin ortalama ile ilişkisinin sayısal ölçümü) olarak rapor edilir.

Bu çalışmanın amacı, YBMD’li hastalarda farklı lezyon tiplerinde lokal QAF düzeylerini ölçmek için yeni bir aracın kullanımını değerlendirmektir. Bu araç, OCT taramalarında tanımlanan lezyonların otofloresan seviyelerini ölçmek için tasarlanmıştır. Bu, yumuşak druzen veya SDD’ler gibi lezyonlarda lokal otofloresan seviyelerinin değerlendirilmesini sağlar ve zaman içinde lezyonlardan AF değişikliklerinin izlenmesine olanak tanır. Bu aracın potansiyel faydası, RPE’nin sağlığını tahmin eden ve araştırılan lezyonlar için prognostik değere sahip olabilecek yeni bir yapısal biyobelirteç sağlamaktır.

Protocol

Çalışma, Helsinki Bildirgesi’ne uygun olarak yürütülmüş ve Bonn Üniversitesi Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır (protokol kodu 305/21). Çalışmaya dahil olan tüm deneklerden yazılı bilgilendirilmiş onam alındı. Videodaki tüm katılımcılardan, çevrimiçi bir video oluştururken benzerliklerini ve kişisel bilgilerini kullanmamıza izin veren izin formlarını imzalamalarını istedik. 1. Kantitatif otofloresan (QAF) görüntü elde etme QAF cihazıyla doğru görüntü elde etmek için katılımcının cihazın önünde rahatça oturduğundan emin olun. Katılımcının çenesini ve alnını çene ve koltuk başlığına bastırmasını sağlayın. Yanal göz kapağı açısı kırmızı işaretle aynı yüksekliğe gelene kadar çene desteğinin yüksekliğini ayarlayın. Küçük kaplar odaklanana kadar kayıt cihazındaki tekerleği döndürerek görüntünün yakın kızılötesi modunda odaklandığından emin olun. Görüntünün köşeleri eşit şekilde aydınlanana kadar kamerayı ileri doğru hareket ettirerek gözü yakınlaştırın. Genel bir kural olarak, odağı küresel eşdeğere ayarlayın. Mavi QAF daha kısa bir dalga boyu kullandığından, QAF görüntülemeden önce odağı bir veya iki diyoptri azaltın ve QAF cihazının modunu yakın kızılötesinden QAF moduna geçirin. Aydınlatmayı yeniden ayarlayın ve yükseltin ve foveaya en yakın küçük damarlar odakta olana ve görüntü kırmızı noktalar olmadan parlak bir şekilde aydınlatılana kadar (aşırı aydınlatmayı gösterir) görüntünün odağında ince ayar yapın. Devam eden mavi ışık uyarımının kamera ayarlarının görüş alanındaki fotoreseptör pigmentini ağartmasına izin vermek için görüntü alımından önce QAF modunda en az 30 saniye bekleyerek fotopigmenti ağartın. Görüntüleri yakalamak için, görüntüleme cihazının dokunmatik yüzeyindeki görüntü alma düğmesine basın; çekim sırasında göz kırpma veya ani göz hareketleri olması durumunda birden fazla QAF görüntüsü yakaladığınızdan emin olun.NOT: İş akışı ayrıca spektral alan optik koherens tomografi (SD-OCT) görüntüleri gerektirir. OCT görüntü elde edilmesi, klinik uygulamada yaygın olarak kullanıldığı için başka bir yerde açıklanmaktadır25. 2. Görüntü dışa aktarma Bu çözümleme ardışık düzeni için QAF ve OCT görüntülerinin Genişletilebilir İşaretleme Dili (XML) dosya biçiminde olduğundan emin olun. HEYEX görüntüleyicide, istediğiniz bir QAF/OCT görüntüsüne sağ tıklayın ve açılır menüden Dışa Aktar | XML olarak öğesini seçin. 3. QAF analizi için açık kaynaklı eklentiler – boru hattını yükleme NOT: Sunulan QAF yazılımı, açık kaynaklı yazılım ImageJ (FIJI genişletmesi)26 için oluşturulmuş “Spectralis pipeline” adlı açık kaynaklı bir eklentidir. Eklentiye erişmek için FIJI’yi açın, açılır menüden Yardım’ı ve ardından Güncelle’yi seçin, ardından önceden var olan güncelleme sitelerine “https://sites.imagej.net/CreativeComputation/” Yaratıcı Hesaplama Güncelleme Sitesini eklemek için Güncelleme Sitelerini Yönet’e tıklayın. Eklentileri indirin ve ardından FIJI’yi yeniden başlatın. Şimdi, Spectralis Boru Hattı kuruldu. Farklı Spectralis eklentileri, açılır menünün altında bulunur Eklentiler | Spectralis veya Eklentiler | SpektralisBatch. 4. Kurulum – veri depolama NOT: Sorunsuz bir iş akışına izin vermek için, klasör yapısını aşağıdaki gibi ayarlamanız önerilir. İlk olarak, her çalışma konusu için bir klasör oluşturun. Oculus dexter (OD) ve oculus sinister (OS) sırasıyla sağ ve sol gözü ifade eder ve bu kısaltmalar bu iş akışı boyunca kullanılır. Her çalışma deneğinin incelenen her gözü için, sırasıyla OD_OCT ve OS_OCT olarak adlandırılan bir OCT için bir klasör oluşturun. Spectralis boru hattının “Mark_BScans_OCT” eklentisinden çıktısını bu klasörlerde sekmeyle ayrılmış değerler olarak otomatik olarak depolamasına izin verin. QAF görüntüleri için OD_QAF ve OS_QAF adlı iki klasör oluşturun. Diğer çok modlu görüntüleme yöntemleri kullanılıyorsa ek klasörler oluşturun. Elde edilen klasör yapısının aşağıda listelenen yapıya benzediğinden emin olun:CASE_IDOD_OCTOD_QAFOD_other_imaging_modalityOS_OCTOS_QAFOS_other_imaging_modality 5. QAF XML dosyasının bir QAF görüntüsüne dönüştürülmesi (kullanılan eklenti: QAF_xml_reader) Spectralis QAF XML Dışa Aktarma dosyaları, 0 ile 255 arasında bir ölçekle (ölçülen AF değerlerini temsil eder) sınırlı ve “standart” ve “siyah” kalibrasyon bölgeleri dahil olmak üzere kırmızı-yeşil-mavi (RGB) formatında saklanır. “QAF_xml_reader” eklentisi bir QAF görüntüsü üretir. Bunun için eklentiler açılır menüsünü açın, Spectralis | QAF_XML_Reader ve açılış ekranını atın. Spectralis XML QAF Dışa Aktarma içeren bir dizin seçin istemini gösteren yeni bir pencere açılır. Dizini seçin ve Seç’e tıklayın. QAF cihazının referans kalibrasyon faktörünü (RCF) (QAF görüntüsünün görüntü bilgilerinde yer alır) ve görüntünün çekildiği sırada hastanın yaşını girin. Bir sonraki pencere QAF Parametreleri olarak adlandırılır. Hasta görüntü elde ederken psödofakik ise, bunun yerine 20 yaşını seçin (bu, yaş düzeltmesi uygulamama etkisine sahiptir). Tamam’a tıkladıktan sonra, 8 bit ile eşle etiketli bir açılır pencere göründüğünde, renk kodlu bir QAF görüntüsü için minimum QAF (qafMin) değerini ve maksimum QAF (qafMax) değerini girin. qafMin ve qafMax’in bilinmemesi durumunda, varsayılan ayarları kullanın, Tamam’a tıklayın ve görüntülenen Ham QAF Verileri etiketli orijinal görüntünün yanı sıra 32 bit QAF ve 8 bit renk kodlu QAF görüntüsüne bakın.NOT: Renk kodlu QAF görüntüsü yalnızca açıklama amacıyla kullanılmıştır; gerçek QAF değerlerine sahip 32 bit QAF görüntüsü, daha fazla analiz için kullanılır. 6. QAF görüntülerini OCT görüntüsüyle kaydetme (kullanılan eklenti: Register_OCT_2) NOT: Bu adım, OCT görüntüsünü QAF görüntüsüyle doğru bir şekilde hizalamak için gereklidir, böylece QAF görüntülerindeki ve OCT BScan’lardaki lezyonlar hizalanır. Eklentiye açılır menüden erişin Eklentiler | Spectralis’i seçin veya kullanılan farklı eklentilere erişmek için bir kısayol tuşu oluşturun. Bunu başarmak için Register_OCT_2 , Eklentiler | Kısayollar | Kısayol ekleyin ve istediğiniz kısayol tuşunu seçin. Eklentiyi açtıktan sonra karşınıza çıkan ilk pencerede Tamam’a tıklayınız. Ardından, şu istemi içeren bir pencere açılır: Spectralis OCT XML dışa aktarımını içeren bir dizin seçin: ana ImageJ penceresinde görünecektir. Spectralis OCT XML Export’u içeren klasörü seçin ve Aç’a tıklayın.NOT: OCT şimdi yüklenecektir ve bu, kullanılan bilgisayarın işlem gücüne bağlı olarak 2 dakika kadar sürebilir. Ardından, Kayıtlı görüntüleri şuraya kaydet: istemini içeren bir pencerenin açılmasını bekleyin. EnFaceStack’in (hizalanmış görüntü dosyası) depolanacağı dizini seçin ve Aç’a tıklayın. EnFaceStack’e eklenecek bir görüntü seçin istemini içeren bir açılır pencere bekleyin: görünmesi için, görüntüyü SD-OCT ile hizalamak için 32 bit QAF görüntüsünü seçin ve Aç’a tıklayın. Bu EnFaceStack’teki tüm gerekli görüntüler dahil edilmişse, İptal’i seçin. Bir sonraki pencerede kullanıcıdan EnFaceStack için bir etiket seçmesi istendiğinde, önceden hazırlanmış QAF etiketini seçin; alternatif olarak, modalitenin istenen adını Diğer kutusuna girin. Görüntüyü kaydetmek için Tamam’ı seçin.NOT: Diğer alanına boşluk veya başka noktalama işaretleri eklemeyin. Açılan üç pencereye dikkat edin. İlki Yerelleştirici olarak etiketlenmiştir ve SD-OCT’yi sol göz (OS) görüntüsü olarak görüntüler. İkinci pencere, QAF veya orijinal sol (OS) veya sağ (OD) göz olarak daha önce seçilen diğer modalitelerden biri olarak adlandırılır. Son pencere, her görüntüde bir ila üç yer işareti seçmenizi isteyen Yer İşaretleri olarak adlandırılır. Her iki modalitede bulunan görüntü kabı çatallanmaları veya diğer özellikler başına bir ila üç yer işareti seçerek iki görüntüyü hizalayın. Yer işaretini seçmeden önce yakınlaştırın (yakınlaştırmak için ” +” klavye karakterini ve uzaklaştırmak için ” -” karakterini kullanın). Seçilen yer işaretlerinin görüntüde hem dikey hem de yatay olarak yayıldığından emin olun. Tüm yer işaretlerine açıklama eklendikten sonra, Yer İşaretleri sekmesinde Tamam’ı seçin ve bir sonraki istemde İptal’i seçin. Sonuçları görmek istiyor musunuz diye soran bir pencere görüntülendiğinde, görüntünün doğru hizalanıp hizalanmadığını kontrol etmek için Evet’i seçin. Bunu, küçük bir tekneyi yakınlaştırarak ve imleci yanına yerleştirerek yapın, ardından teknenin imlece göre ne kadar hareket ettiğini kontrol etmek için yukarı veya aşağı kaydırın. Hizalama kesin değilse, OD_QAF dizinindeki “.tiff” dosyasını silin ve işlemi 2. adımın başından itibaren yeniden başlatın.NOT: Mark_BScans_OCT üzerindeki işaretlerin kesin olması gerektiğinden, SD-OCT ve QAF görüntüsü arasındaki hizalamanın da çok doğru olması gerekir. Çoğu görüntüde mükemmel piksel hizalaması elde edilebilir, ancak bazı durumlarda hizalama üç veya dört piksellik bir doğrulukla sınırlıdır. 7. Karşılaştırma için ortalama bir QAF görüntüsü oluşturma (kullanılan eklenti: StandardRetina/BatchStandardRetina) NOT: QAF değerleri büyük ölçüde retina konumuna bağlıdır (ör., makula pigmentinin neden olduğu merkezi gölgelenme). Bu nedenle, drusen’in QAF değerleri, aynı bölgenin standart QAF değerleri ile karşılaştırılmalıdır. Analiz için bir ön koşul olarak StandardRetina , ortalama QAF görüntülerinin (örneğin, yaşla eşleştirilmiş bir kontrol kohortundan) bir yüz haritası oluşturur. Ortaya çıkan yüz haritası, merkezi retina için ortalama bir QAF değerinin piksel piksel haritasını gösterir. Spectralis ardışık düzeninde standart retinalar oluşturmanın iki yolu vardır: Birincisi, AddToStandardRetina_OCT, yüzey haritasına her seferinde bir yeni vakaya izin verirken, ikincisi, BatchStandardRetina, aynı anda birden fazla vaka ekler.Bir kerede bir görüntü eklemek için Eklentiler | Spektral | AddToStandardRetina_OCT ve açılış ekranını kapatın. Metni görüntüleyen bir pencere açıldığında Spectralis OCT XML dışa aktarımı içeren bir dizin seçin, klasörü seçin ve BScan’ı açmak için Seç’e tıklayın. Kayıtlı EnFace görüntülerini içeren bir dizin seçin: istemini görüntüleyen yeni bir pencere göründüğünde, uygun klasörü seçin ve Seç’e tıklayın. Açılan üç pencereyi gözlemleyin, biri ikinci adımda seçilen klasörden Yığılmış görüntüleri görüntüleyen EnFaceStack etiketli, ikincisi OCT BScan’ı görüntüleyen Bscan Stack etiketli ve ortada Modalite Seç etiketli üçüncü bir pencere görünüyor. EnFaceStack’ten bir modalite seçin. Bir modalite seçin ve StandardRetina’yı içeren bir dizin seçin istemiyle açılan yeni pencereyi gözlemleyin. StandardRetina içeren bir dizin yoksa, yeni bir StandardRetina oluşturmak için boş bir klasör seçin. Yeni StandardRetina’yı inceleyin, yukarı ve aşağı kaydırın ve söz konusu konum için ortalama ve standart sapmayı görüntülemek için imleci hareket ettirin. Kabul etmek istesin mi? En son fotoğrafı StandardRetina’ya eklemek veya atmak için. Aynı anda birden fazla görüntü eklemek için Batch_QAF_StandardRetina kullanın. İlk olarak, vaka kimlikleriyle aynı klasörde bir “manifest.txt” dosyası hazırlayın ve .txt dosyasının konumundan OCT ve EnFaceStack’e kadar olan göreli yolu listelediğinden emin olun. İkisini bir sekme alanıyla ayırın ve adların önünde ve arkasında ek boşluk olmadığından emin olun. Dosya şu kuruluma benzemelidir:pathToOCT_1>pathToEnFaceStack_1>001 / OD-OCT>001 / OD-QAFpathToOCT_2>pathToEnFaceStack_2>002 / OD-EKİM>002 / OD-QAF Dosyayı elektronik tablo yazılımında oluşturun ve bir txt dosyası olarak kaydedin. Bildirim dosyasının düzgün çalışması için tüm yolların QAF dilimini (karakter harfleri) içerdiğinden emin olun. Eklentiler açılır menünün altında bulunur Eklentiler | SpectralisBatch-Toplu | QAF_StandardRetina. Açılış ekranını kapatın ve istemi görüntüleyen yeni bir pencerenin açılmasını bekleyin: İlk Standart Retina’yı seçin. Önceden var olan bir StandardRetina’ya sahip bir klasör seçin veya yeni bir StandardRetina oluşturmak için boş bir klasör seçin. Görünmesi için Modalite Seç etiketli bir istem arayın; varsayılan değer QAF’dir. İlgili modalitenin dosya adının, bildirim dosyasında adlandırılan her EnFaceStack’teki bir dilimin dosya adıyla tam olarak eşleştiğinden emin olun. Ardından, kullanıcıdan bir bildirim dosyası seçmesini isteyen bir pencere açıldığında (daha önce açıklanmıştır), bu StandardRetina’ya başka bir bildirim dosyası eklenmeyecekse İptal’e tıklayın veya başka bir bildirim dosyası seçin. Yeni StandardRetina’yı Kabul Et mi? etiketli yeni bir pencerede inceleyin ve en son partiyi StandardRetina’ya eklemeye veya en son partiyi atmaya karar verin.NOT: Tüm QAF’leri bir StandardRetina’da birleştirme işlemi biraz zaman alabilir. 8. Analiz için ilgi alanlarına açıklama ekleme (kullanılan eklenti: Mark_BScans_OCT) Lezyonları (drusen gibi) işaretlemek için Eklentiler | Spektral | Mark_BScans_OCT ve açılış istemini kapatın. Görünmek için Spectralis OCT XML dışa aktarımı içeren bir dizin seçin etiketli yeni bir pencere arayın. İstediğiniz OCT’ye sahip klasörü seçin ve Tamam’a tıklayın. FIJI OCT’yi yükledikten sonra, Görüntülenecek kayıtlı yüz görüntülerini içeren bir dizin seçin etiketli yeni pencereyi gözlemleyin. EnFaceStack’i içeren dizini seçin ve Seç’e tıklayın. Biri EnFaceStack, biri BscanStack ve biri Kullanıcı Parametreleri olarak adlandırılan üç yeni pencere görünür.Kullanıcı Parametreleri penceresi, kullanıcıdan aşağıdaki parametreleri girmesini ister: Vaka Kimliği, daha sonra çıktı csv dosyasının adı, mm cinsinden bant genişliği, kaplama çizgisi genişliği, BScan çizgi genişliği ve bölge maskesi opaklığı.Mm cinsinden parametre bant genişliği, her bir izo gövdesinin genişliğini milimetre (mm) cinsinden belirler. EnFaceStack etiketli pencerede işaretli lezyonların çizgi genişliğini değiştirmek için Enface çizgi genişliğini kullanın. BScan çizgi genişliği, Bscan Yığını penceresindeki çizgi genişliğini belirler. Bu parametreyi 1 olarak ayarlamanın çoğu durumda en iyi çizgi genişliği ayarı olduğunu unutmayın. İç bantların renklendirilip renklendirilmeyeceğine karar vermek için ayrı bir pencerede görüntülenen En Yüz Maskesi veya Mesafe Haritası arasında seçim yapın. Daha sonra, tıklayın bitti içinde BScan’da İşaretle eklentisindeki pencere. Ardından, önceden var olan bir StandardRetina’yı seçmeniz istendiğinde, StandardRetina’yı içeren klasörü seçin ve Seç’e tıklayın. Bir StandardRetina seçilirse, çıktı Mark_BScans_OCT mod z-skorunu (StandardRetina ile karşılaştırıldığında ölçülen bir QAF değerinin) seçeceğini unutmayın. Ham QAF değeri tercih edilirse, İptal’e tıklayın ve sonuçların z puanları değil, ham değerler olacağı konusunda uyaran Mesaj etiketli yeni bir pencere bekleyin. Açılan yeni bir pencere arayın Kaydedilen verilerle kaydedilen durumu içeren bir dizin seçin . Bir kaydetme dosyası varsa, dilimleri içeren dizine tıklayın | Seçin. İlerlemenin kaydedilmemesi durumunda iptal’i seçin. BScan’da İşaretle etiketli yeni bir pencere arayın ve açılır menüden kaydet, yoksay, bitti ve işaretle’yi seçin.İşaret: Yukarıda açıklanan “Register_OCT_2” eklentisindekine benzer komutlarla BScan’deki ilgilenilen bölgelere açıklama eklemeye başlayın. Bir bölgeyi işaretlemek için, sağ tıklayıp fare imlecini lezyonun sonuna sürükleyerek başlat’ı seçin, B-Sscan’de İşaretle penceresinde işaretin seçili olduğundan emin olun ve Tamam’a tıklayın. İlgilenilen bölge artık bu BScan’da işaretlenmiştir. Yok saymak: BScan’da İşaretle penceresinde Yoksay’ı seçin ve işaretlemeyi yok saymak için Tamam’a tıklayın. Kurtarmak: BScan’da İşaretle penceresinde kaydet’i seçin ve durumu kaydetmek için bir dizin seçin istemini içeren yeni bir pencerenin görünmesini sağlamak için Tamam’a tıklayın. Zaten var olan bir klasörü seçin veya yeni bir klasör oluşturun. “Mark_BScans_OCT” komutunu başlatarak mevcut dosyaları açın ve Kaydedilen durumu içeren bir dizin seçin penceresi göründüğünde kaydetme durumunu içeren dizini seçin.NOT: Birden çok kaydetme durumu tek bir dizinde saklanamaz; eyaletleri bir yerel ayardan diğerine kaydetme kolayca değiştirilemez (örneğin, ALMANCA’dan ABD’ye). Yapılmış: BScan’da İşaretle penceresinde bitti’yi seçin ve etiket seçme yönteminin göründüğü yeni bir pencere açmak için Tamam’a tıklayın. Enface yığınının üstüne doğru modaliteyi getir etiketli bir istem göründüğünde, “Register_OCT_2” kullanılarak hizalanan QAF adlı modaliteyi en üste getirin. Bunu, EnFaceStack’te kaydırarak, En face Stack penceresini seçerek veya sol veya sağ oka tıklayarak yapın. Yöntemin adının sol üst köşede görüntülendiğini unutmayın. Lezyonları daha iyi incelemek ve işaretlemek için Bscan penceresini yakınlaştırın. B-Scan penceresine tıklayın, fareyi yakınlaştırma yönüne getirin ve + tuşuna basın; Uzaklaştırmak için – tuşuna basın. Fareyi yukarı veya aşağı kaydırarak, taramada ilerlemek için alttaki çubuğu sola veya sağa sürükleyerek veya B-Scan çerçevesini seçip klavyedeki sol ve sağ ok tuşlarına tıklayarak BScan yığınında gezinin. BScan yığınındaki geçerli alana genel bir bakışın, EnFaceStack penceresindeki ve BScan numarasının (örneğin, 31/120) görüntülendiği BScan penceresinin sol üst köşesindeki kırmızı çizgi ile sağlandığını unutmayın. İlgili “OD_OCT” veya “OS_OCT” klasöründe yeni bir .tsv dosyası oluşturmak için Tamam’a tıklayın. .tsv dosya adının “Mark_Bscans_OCT” artı girilen büyük/küçük harf kimliği, yanallık ve Mark_Bscans_OCT son adımında seçilen modaliteden oluşacağını unutmayın. Ek olarak, drusen’in renk kodlu “iso-gövdeleri” artık EnFaceStack’te görüntülenecek.

Representative Results

ViewçıktıSonuçları yeterince analiz etmek ve sonuçlardan sonuç çıkarmak için Mark_Bscans_OCT çıktı dosyasını anlamak önemlidir. İlk üç sütun, vaka kimliğinden, dosyanın yanlılığından ve seçilen görüntüleme yönteminden sonra etiketlenir. Dördüncü sütun mod tarafından adlandırılır ve z-score olarak etiketlenir. Bu metni yazarken, Mark BScans’ın tüm lezyonları yalnızca tek seferde hesaplayabildiğini unutmayın; Satırlar, lezyonun dış kenarından uzaklıkları elektronik tablonun alt ve üst sütunlarında belirtilen izo-gövdeleri ifade eder. İzo-gövdeler, lezyonu çevreleyen belirli bir çevrede AF’yi z-skorlarında (QAF durumunda) ölçer. Bir izo gövdesindeki bir pikselin minimum değerinin min etiketli sütunlarda bulunabileceğini, medyan, maks, ortalama ve stsapma etiketli sütunların sırasıyla bir izo gövdesindeki piksel değerlerinin ortalamasının medyan, maksimum, ortalama ve standart sapmasını içerdiğini unutmayın. n sütunu, bir iso gövdesindeki toplam piksel sayısını içerir. Şekil 1, orta yaşa bağlı makula dejenerasyonu (iAMD) olan 84 yaşında bir erkek hastanın tekil belirgin yumuşak druzenini göstermektedir. Şekil 2, QAF-İş Akışı aracıyla işaretlenmiş SDD’leri olan temsili bir hastanın sol gözünü göstermektedir (Şekil 3). Bu hastadaki SDD’ler azalmış AF ile ilişkiliydi (z-skoru = -0.4 ± 0.2). Benzer şekilde, SDD’nin etrafındaki izo-gövdeler, StandardRetina’ya kıyasla daha düşük AF (örneğin, en yakın izo-gövde = -0.3 ± 0.3) gösterdi. Bu fenomen için makul bir açıklama, SDD lezyonlarının RPE üzerindeki gölgeleme etkileri (azaltılmış yarı saydamlık) olabilir. SDD’lerin kullanımı örnek niteliğindeydi. Araç, drusen gibi diğer lezyonlarda da lokal AF seviyelerinin değerlendirilmesini sağlar. Ayrıca araç, zaman içinde lezyonlardan kaynaklanan AF değişikliklerinin izlenmesine olanak tanır. Şekil 1: Orta yaşa bağlı makula dejenerasyonu (iAMD) olan 84 yaşında bir erkek hastanın tekil belirgin yumuşak druzeni. (A) İşaretli druzen ile sol gözün QAF görüntüsü. (B) Drusen’in yakın çekimi: işaretli drusen’i temsil eden kahverengi merkez ve çevredeki izo-gövdeleri temsil eden renkli bantlar. Aşağıdaki tablo çıktı dosyasını göstermektedir. QAF drusen değerleri, StandardRetina’dan karşılık gelen eksantrikliğin karşılık gelen QAF değerleriyle karşılaştırılır. Bu, etkilenmeyen alanların ortalamasından sapmayı temsil eden z-skorları ile sonuçlanır. Mavi kutu soldan sağa doğru gösterilir: vaka kimliği, gözün lateralitesi, kullanılan modalite ve istenen çıktı (bu durumda, z-skorları). Turuncu kutu içindeki sütunlar, ölçülen alanın sınırlarını milimetre cinsinden gösterir (alt = alt sınır, üst = üst sınır). Yeşil kutu, QAF ölçümlerini gösteren sütunları etiketler. Soldan sağa, bunlar ortalamanın minimum, medyan, maksimum, piksel sayısı, ortalama ve standart sapmasını içerir. Her satır bir izo-gövdeyi temsil eder, mavi kutu içindeki satırlar lezyon içindeki değerleri temsil eder ve mor kutu içindeki satırlar her lezyonu çevreleyen izo-gövdeleri gösterir (lezyona artan mesafe ile yukarıdan aşağıya). Ölçek çubuğu = 1 mm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. Şekil 2: Erken YBMD’li 80 yaşındaki bir kadın hastanın QAF görüntüsünde işaretli SDD’ler. (A) QAF görüntüsünde SDD’ler görülebilir. Aynı QAF görüntüsü, SDD’lerin basılı açıklamaları ile gösterilir. (B) İşaretli her lezyonun etrafında, izo-gövdeler renk kodlaması (açık yeşil, koyu yeşil ve kırmızı) ile gösterilmiştir. (C) Mavi dikdörtgenin büyütülmüş hali. Her SDD’nin dış kenarı mavi renkle işaretlenmiştir. Kısaltmalar: QAF = kantitatif otofloresan; AMD = yaşa bağlı makula dejenerasyonu; SDD = subretinal drusenoid birikintisi. Ölçek çubuğu = 1 mm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. Şekil 3: Lezyonların AF’sini belirlemek için iş akışı. Bu şekil, lezyona özgü AF’yi belirlemek için gereken yazılım eklentilerini görselleştirir. (A) Görüntü, QAF değerlerinin dağılımını görselleştirmek için kullanılabilecek renk kodlu bir QAF görüntüsünü gösterir, ancak daha fazla analiz için kullanılmamalıdır. (B) Ön planda bir QAF görüntüsü, arka planda SD-OCT taramasından alınan kızılötesi görüntü gösterilir. Bunun, damar çatallanmalarını kullanarak hizalamayı görselleştirmesi gerekiyor. Bu, Register_OCT_2 eklentisi kullanılarak yapılabilir. (C) Lezyonların z-skor değerlerini ölçmek için kullanılan bir StandardRetina. StandardRetinas, StandardRetina/BatchStandardRetina kullanılarak oluşturulabilir. (D) Sarı çizgilerle vurgulanan SDD’leri gösteren mavi oklara sahip bir BScan (not: lezyonlar her zaman z yönündeki konumdan bağımsız olarak RPE’nin altında işaretlenir) tasvir edilmiştir. (E) Tüm işaretli lezyonlar bir QAF görüntüsüne basılmış olarak görülür (bkz. Şekil 1). Son iki adım, Mark_BScans_OCT eklentisi kullanılarak yapılır. Kısaltmalar: AF = otofloresan; QAF = kantitatif otofloresan; SDD = subretinal drusenoid birikintisi; IR = kızılötesi; RPE = retina pigment epiteli; SD-OCT = spektral alan optik koherens tomografi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Discussion

Bu iş akışı, AMD’ye özgü lezyonların AF’sini belirlemek ve karşılaştırmak için açık kaynaklı FIJI eklenti araçlarını kullanmak için adım adım bir kılavuz sağlar. Eklentiler, herhangi bir kodlama bilgisi gerektirmeyen, kullanımı kolay şablonlar sağlar ve teknik destek almadan doktorlar tarafından uygulanabilir27. Bildiğimiz kadarıyla, bu araçlar lezyona özgü AF ölçümü için türünün tek örneğidir.

QAF değerleri doğal olarak retina boyunca değişir, retinadaki eşit olmayan lipofusin ve melanolipofusin dağılımı, damarların düşük AF’si ve eşit olmayan makula pigment dağılımı nedeniyle değerler periferde daha yüksek ve makulada daha düşüktür. Retinada doğal olarak oluşan QAF seviyelerinin yüksek varyasyonu nedeniyle, lezyonların mutlak QAF değerlerinin doğrudan analiz edilmesi umut verici bir yaklaşım değildir. Örneğin, periferdeki bir hipootofloresan lezyon, makulanın fizyolojik floresan seviyelerinden daha yüksek mutlak QAF değerlerine sahip olabilir. Standart Retina kullanımı ve drusen’in floresan seviyelerini ölçmek için z-skorlarının kullanılması, QAF değerlerinin doğal olarak oluşan bu varyansı için doğrudur.

Z-skoru, ilgilenilen bir bölge değerinin StandardRetina’daki ortalama ile ilişkisinin sayısal bir ölçümüdür. Bir bireyin ortalamasının aynı konumdaki StandardRetina’nın ortalamasından çıkarılması ve ardından sonucun standart sapmaya bölünmesiyle hesaplanır. Bu standardizasyon, farklı QAF görüntülerinin karşılaştırılmasına olanak tanır, çünkü z-skoru bir değerin ortalamadan kaç standart sapma farklı olduğunu gösterir. Pozitif bir z puanı, değerin ortalamanın üzerinde olduğunu, negatif bir z puanı ise ortalamanın altında olduğunu gösterir.

Dikkate alınması gereken potansiyel tuzaklar olabileceğine dikkat etmek önemlidir. Bu yöntem, fundus boyunca değişen miktarda AF seviyelerini hesaba katarken, bir RPE’nin AF’sini ölçmenin ve karşılaştırmanın en doğru yolu olmayabilir. Bireyler farklı seviyelerde ve maküler luteal pigment topografisine sahiptir ve lezyonlar üstteki retinanın yarı saydamlığını da etkileyebilir28,29. Bu nedenle, SDD alanlarında ölçülen azaltılmış AF’nin (temsili sonuçlara bakın), RPE30,31,32’deki azalmış floroforlardan ziyade gölgeleme etkilerinin bir sonucu olması akla yatkındır.

Şu anda doğrusal karışık modellerle retina yansıtıcılığını, kalınlığını ve niceliksel makula pigmentini (yeşil ve mavi AF kullanarak) hesaba katmak için bir iş akışı üzerinde çalışıyoruz. Ek olarak, şimdiye kadar, QAF, benzer yaştaki33 katılımcılarının merceksi opaklaşmasında bireyler arası farklılıkları göz ardı eden merceksi opaklaşmayı hesaba katmak için yaşa bağlı bir düzeltme faktörü kullanmaktadır. Bu nedenle, şu anda merceksi otofloresan ve opaklaşmanın kişiselleştirilmiş bir düzeltme faktörü için bir iş akışı üzerinde çalışıyoruz. Küçük lezyonlardan AF bilgilerini güvenilir bir şekilde çıkarmak için, QAF görüntülerinin yeterli test-tekrar test güvenilirliği gereklidir. Daha ayrıntılı analizlerin uygulanabilir olduğu QAF görüntülerini daha da ayırt etmek için, QAF görüntülerinin test-tekrar test güvenilirliğini tahmin edebilen “QAF görüntü güvenilirliği endekslerini” araştırıyoruz. Mevcut aşamada, ihtiyatlı yaklaşım, yinelenen görüntüler elde etmek ve lezyona özgü AF’nin tekrar test güvenilirliğini araştırmaktır.

Lezyonların izo-gövdelerini ek olarak analiz etmek için sunulan yöntemin, komşu lezyonların izo-gövdeleri birleştikçe uygulanması teknik olarak zordu. Birleştirilmiş izo-gövde alanları, hangi lezyonun dikkate alındığına bağlı olarak belirgin bir şekilde karakterize edilebilir. Çözümümüz, bir tipteki tüm lezyonları tek bir lezyon olarak ele almak ve çevrelerini ortak bir izo-gövde olarak analiz etmekti. Bununla birlikte, bu yöntem, tek tek drusenlerin izo-gövdelerini ölçme yeteneğini büyük ölçüde azaltır ve bu tekniğin başka bir tuzağı olarak düşünülebilir. Birleştirilmiş izo-gövdeleri veya birleştirilmiş izo-gövdelerin olduğu alanlarda AF’nin askıya alınmış raporlanmasını hesaba katmak için teknik olarak daha karmaşık yöntemler, gelecekte lezyonların çevresinde AF’nin analizini kolaylaştırabilir.

Bu çalışmada model hastalık olarak YBMD kullanıldı. İş akışı, diğer hastalıklardaki lezyonları incelemek için de uyarlanabilir. Şimdiye kadar QAF, resesif Stargardt hastalığı, Bestrophin-1 ile ilişkili hastalıklar, retinitis pigmentosa’nın çeşitli formları, akut zonal gizli dış retinopati, psödoksantoma elasticum ve diğerleri dahil olmak üzere birçok koryoretinal hastalıkta kullanılmıştır 17,33,34,35,36,37. Bu iş akışı açık kaynaklı yazılım kullandığından, lezyona özgü AF’yi belirlemede başkalarını bu çalışmayı çoğaltmaya ve retina bozuklukları hakkındaki bilgimizi genişletmeye teşvik ediyoruz. Özetle, makula boyunca farklı retinal lezyonların AF seviyelerini belirlemek ve karşılaştırmak için bir iş akışı sunuyoruz. Bu iş akışı, AF’nin daha derinlemesine analizinin önünü açar ve AMD ve ötesinde yeni biyobelirteçlerin geliştirilmesini kolaylaştırabilir.

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışma, doktora öğrencileri için Alman Oftalmoloji Derneği (DOG) hibesi (MW) ve NIH / NEI 1R01EY027948 (TA) tarafından finanse edilmiştir.

Materials

BatchStandardRetina plugin n.a. n.a. n.a.
FIJI (Image J) n.a. n.a. n.a.
Mark_Bscans_OCT plugin n.a. n.a. n.a.
Microspft office Microsoft n.a. n.a.
QAF_xml_reader plugin n.a. n.a. n.a.
Register_OCT_2 plugin n.a. n.a. n.a.
Spectralis Heidelberg Engineering n.a. QAF extension
StandardRetina plugin n.a. n.a. n.a.
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Schmitz-Valckenberg, S., et al. Fundus autofluorescence imaging. Progress in Retinal and Eye Research. 81, 100893 (2021).
  2. Bermond, K., et al. Autofluorescent granules of the human retinal pigment epithelium: phenotypes, intracellular distribution, and age-related topography. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 61 (5), 35 (2020).
  3. Bermond, K., et al. Autofluorescent organelles within the retinal pigment epithelium in human donor eyes with and without age-related macular degeneration. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 63 (1), 23 (2022).
  4. Delori, F., et al. Quantitative measurements of autofluorescence with the scanning laser ophthalmoscope. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (13), 9379-9390 (2011).
  5. Fleckenstein, M., et al. Age-related macular degeneration. Nature Reviews Disease Primers. 7 (1), 31 (2021).
  6. Greenberg, J. P., et al. Quantitative fundus autofluorescence in healthy eyes. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 54 (8), 5684-5693 (2013).
  7. Sparrow, J. R., Boulton, M. RPE lipofuscin and its role in retinal pathobiology. Experimental Eye Research. 80 (5), 595-606 (2005).
  8. vonder Emde, L., et al. Natural history of quantitative autofluorescence in intermediate age-related macular degeneration. Retina. 41 (4), 694-700 (2021).
  9. Reiter, G. S., et al. Longitudinal changes in quantitative autofluorescence during progression from intermediate to late age-related macular degeneration. Retina. 41 (6), 1236-1241 (2021).
  10. Gliem, M., et al. Quantitative fundus autofluorescence in early and intermediate age-related macular degeneration. JAMA Ophthalmology. 134 (7), 817-824 (2016).
  11. Hussain, R. M., Gregori, N. Z., Ciulla, T. A., Lam, B. L. Pharmacotherapy of retinal disease with visual cycle modulators. Expert Opinion on Pharmacotherapy. 19 (5), 471-481 (2018).
  12. Ammar, M. J., Hsu, J., Chiang, A., Ho, A. C., Regillo, C. D. Age-related macular degeneration therapy: a review. Current Opinion in Ophthalmology. 31 (3), 215-221 (2020).
  13. Ach, T., et al. Lipofuscin redistribution and loss accompanied by cytoskeletal stress in retinal pigment epithelium of eyes with age-related macular degeneration. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 56 (5), 3242-3252 (2015).
  14. Zanzottera, E. C., Messinger, J. D., Ach, T., Smith, R. T., Curcio, C. A. Subducted and melanotic cells in advanced age-related macular degeneration are derived from retinal pigment epithelium. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 56 (5), 3269-3278 (2015).
  15. Cao, D., et al. Hyperreflective foci, optical coherence tomography progression indicators in age-related macular degeneration, include transdifferentiated retinal pigment epithelium. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 62 (10), 34 (2021).
  16. Zanzottera, E. C., et al. The Project MACULA retinal pigment epithelium grading system for histology and optical coherence tomography in age-related macular degeneration. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 56 (5), 3253-3268 (2015).
  17. Sparrow, J. R., Duncker, T., Schuerch, K., Paavo, M., de Carvalho, d. R. L. Lessons learned from quantitative fundus autofluorescence. Progress in Retinal and Eye Research. 74, 100774 (2020).
  18. Schmitz-Valckenberg, S., et al. Correlation between the area of increased autofluorescence surrounding geographic atrophy and disease progression in patients with AMD. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 47 (6), 2648-2654 (2006).
  19. Ach, T., Bermond, K. Autofluorescence of the human retinal pigment epithelium in normal aging and in age-related macular degeneration: histology and clinical correlation. Klinische Monatsblatter Fur Augenheilkunde. 236 (5), 672-681 (2017).
  20. Pollreisz, A., et al. Visualizing melanosomes, lipofuscin, and melanolipofuscin in human retinal pigment epithelium using serial block face scanning electron microscopy. Experimental Eye Research. 166, 131-139 (2018).
  21. Bernstein, P. S., et al. meso-zeaxanthin: The basic and clinical science underlying carotenoid-based nutritional interventions against ocular disease. Progress in Retinal and Eye Research. 50, 34-66 (2016).
  22. Göbel, A. P., Fleckenstein, M., Heeren, T. F. C., Holz, F. G., Schmitz-Valckenberg, S. In-vivo mapping of drusen by fundus autofluorescence and spectral-domain optical coherence tomography imaging. Graefe’s Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 254 (1), 59-67 (2016).
  23. Pfau, M., et al. Mesopic and dark-adapted two-color fundus-controlled perimetry in geographic atrophy secondary to age-related macular degeneration. Retina. 40 (1), 169-180 (2020).
  24. vonder Emde, L., et al. Mesopic and dark-adapted two-color fundus-controlled perimetry in choroidal neovascularization secondary to age-related macular degeneration. Translational Vision Science and Technology. 8 (1), 7 (2018).
  25. Aumann, S., Donner, S., Fischer, J., Müller, F. Optical coherence tomography (OCT): principle and technical realization. High Resolution Imaging in Microscopy and Ophthalmology: New Frontiers in Biomedical Optics. , 59-85 (2019).
  26. Schindelin, J., et al. FIJI: an open-source platform for biological-image analysis. Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  27. Kleefeldt, N., et al. Quantitative fundus autofluorescence: advanced analysis tools. Translational Vision Science and Technology. 9 (8), 2 (2020).
  28. Hong, I. H., Jung, W. H., Lee, J. H., Chang, I. B. Macular pigment optical density in the Korean population: a cross sectional study. Journal of Korean Medical Science. 35 (5), e30 (2020).
  29. Putnam, C. M. Clinical imaging of macular pigment optical density and spatial distribution. Clinical and Experimental Optometry. 100 (4), 333-340 (2017).
  30. Zweifel, S. A., Spaide, R. F., Curcio, C. A., Malek, G., Imamura, Y. Reticular pseudodrusen are subretinal drusenoid deposits. Ophthalmology. 117 (2), 303-312 (2010).
  31. Curcio, C. A., et al. Subretinal drusenoid deposits in non-neovascular age-related macular degeneration: morphology, prevalence, topography, and biogenesis model. Retina. 33 (2), 265-276 (2013).
  32. Spaide, R. F. Outer retinal atrophy after regression of subretinal drusenoid deposits as a newly recognized form of late age-related macular degeneration. Retina. 33 (9), 1800-1808 (2013).
  33. Reiter, G. S. Influence of lens opacities and cataract severity on quantitative fundus autofluorescence as a secondary outcome of a randomized clinical trial. Scientific Reports. 11 (1), 12685 (2021).
  34. Gliem, M., et al. Quantitative fundus autofluorescence in pseudoxanthoma elasticum. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 58 (14), 6159-6165 (2017).
  35. Burke, T. R., et al. Quantitative fundus autofluorescence in recessive Stargardt disease. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 55 (5), 2841-2852 (2014).
  36. Armenti, S. T., Greenberg, J. P., Smith, R. T. Quantitative fundus autofluorescence for the evaluation of retinal diseases. Journal of Visualized Experiments. (109), 53577 (2016).
  37. Pröbster, C., et al. Quantitative fundus autofluorescence in the developing and maturing healthy eye. Translational Vision Science and Technology. 10 (2), 15 (2021).
  38. Duncker, T., et al. Quantitative fundus autofluorescence and optical coherence tomography in PRPH2/RDS- and ABCA4-associated disease exhibiting phenotypic overlap. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 56 (5), 3159-3170 (2015).

Tags

Age-related Macular DegenerationFundus AutofluorescenceQuantitative AutofluorescenceRetinal Pigment EpitheliumDrusenSubretinal Drusenoid DepositsOptical Coherence TomographyMultimodal ImagingFIJI Plug-insRegional VariationsPhotoreceptor DensitySpectral AnalysisFluorophores

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
von der Emde, L., Mallwitz, M., Holz, F. G., Sloan, K. R., Ach, T. A Workflow to Quantitatively Determine Age-Related Macular Degeneration Lesion-Specific Variations in Fundus Autofluorescence. J. Vis. Exp. (195), e65238, doi:10.3791/65238 (2023).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image