フローサイトメトリーにおける 枯草菌 胞子の計数と標識解析の改善

枯草菌は棒状のグラム陽性菌で、環境条件が細胞増殖を許さない場合に静止胞子を産生することができます¹。胞子は非常に安定した細胞形態であり、枯草菌を含むいくつかの種の胞子は、ヒトおよび動物用のプロバイオティクスとして広く使用されています²。枯草菌の胞子は、その耐性と安全性の特性から、異種タンパク質を示し、粘膜アジュバント、ワクチン送達システム、および酵素固定^{化プラットフォームとして}提案されている^3,4。

枯草菌から胞子を得るには、特別な培地を使用して栄養遮断にさらす必要があります。これらの胞子を入手して精製した後、検査効率を向上させるためにそれらを定量化する必要があります^5,6。したがって、得られた胞子の濃度を分析するために特定の方法が適用されます。プレートカウンティングと、カウンティングチャンバーとしても知られるペトロフ・ハウザーチャンバーを使用できます。後者はもともと血球の濃度を決定するために開発されました。しかし、胞^子計数のための微生物学の分野でそれを使用することは可能です^7,8。細胞計数に使用される標準的な方法であるにもかかわらず、この方法は完全に手作業であり、その精度はオペレーターの経験に依存するため、読み取りは面倒です。

フローサイトメトリー(FC)ベースの分析は、バチルス属菌の標識細胞を検出するための迅速で信頼性が高く、特異的なアプローチとして以前に提案されてきました。フローサイトメトリーカウンティングビーズの使用により、ルーチン検査(CD4およびCD8 Tリンパ球の絶対数)での細胞カウント、およびフローサイト^{メトリーを使用して}検出およびカウントできる粒子を含む研究の開発における再現性が保証されています9。GodjafreyとAlsharifは、非標識胞子のFC定量化にカウントビーズの使用を提案しました¹⁰。フローサイトメトリーの使用は、バチルス属菌の胞子形成のモニタリングについて説明されています。胞子^{DNA10,11,12,13}を標識する。さらに別の研究では、胞子表面上の蛍光標識タンパク質の量を評価するためにFCが用いられた¹⁵。

この研究では、市販のカウンティングビーズを使用して、フローサイトメトリーを使用したイベントカウンティングに関する再現性の基準を確保しようとしました。本研究では、胞子計数を精緻化し、胞子表面上の蛍光標識抗体の結合効率を評価するために、FCでの細胞計数に計数ビーズを使用することを提案します。