卵黄抗体に基づくサイトメトリービーズアッセイの標準化

疾患の診断を目的としたイムノアッセイ技術の中で、サイトメトリービーズアッセイは、1回のアッセイで数千の粒子の分析を可能にするため、高感度で信頼性の高いアプローチとして浮上^{しています1。}この手法は、生産性が高く、少量のサンプルを使用できることに加えて、サイトカイン、接着分子、抗体アイソタイプ、タンパク質などの複数の分子の検出を可能にするため、優れた柔軟性も備えています^2,3。

これらのアッセイの開発には、効果的で低コストのインプットであるラテックスビーズなど、さまざまな粒子が使用されます。これらは、特定の分子の共有結合または非共有結合を可能にする官能基またはタンパク質の存在など、それらの表面に修飾を提示することができる³、^4、5。

これらのイムノアッセイは、抗原や抗体などの成分を使用して疾患マーカーの検出を行い、一般的にマウス、ウサギ、ヤギなどの哺乳類由来の抗体を必要とします。哺乳類の予防接種は一般に多くの動物が良好な収量を得る必要があり、動物の苦しみにつながる手順を頻繁に実行する必要があるため、これは倫理的問題に関連する問題を引き起こします^6,7。これに代わるものは、接種された抗原に対する高濃度の特異的抗体が卵黄中に見出され得るので、免疫されたニワトリの卵黄から単離されたIgY抗体の使用である。鶏肉の生産は、年間^4.3匹のウサギの生産に相当します^6,7。

したがって、このプロトコルの目的は、ラテックスビーズを用いたフローサイトメトリーを用いて鶏卵黄から得られたIgY抗体を評価する方法を提供することである。そこで我々は,ラテックスビーズを用いたサンドイッチ形式のサイトメトリービーズイムノアッセイの標準化法を提案する.モデルとして、熱帯熱マラリア原虫ヒスチジンリッチプロテインII抗原(IgY-Pf HRP2)を対象としたIgY抗体を使用しました。抗体を抽出する方法について説明し、ラテックスビーズへのこれらの結合濃度を定義するための重要なステップについて説明し、抗原の検出限界の評価を提示します。フローサイトメトリーの精度が高く、ラテックスビーズが低コストであるため、この手法は抗体や抗原などのイムノアッセイツールの分析に適用できます。この方法は、多様なターゲットの検出に使用できます。