Здесь мы описываем методы индуцирования аллергического контактного дерматита в ушах мышей 1-фтор-2,4-динитробензолом (DNFB) и способы оценки тяжести аллергического контактного дерматита.
Кожа является первой линией защиты человеческого организма и одним из органов, наиболее подверженных воздействию химических веществ окружающей среды. Аллергический контактный дерматит (АКД) является распространенным кожным заболеванием, которое проявляется в виде местной сыпи, покраснения и поражений кожи. На возникновение и развитие АКД влияют как генетические факторы, так и факторы окружающей среды. Хотя в последние годы многие ученые построили серию моделей АКД, экспериментальные протоколы всех этих моделей различны, что затрудняет читателям их установление. Поэтому стабильная и эффективная животная модель имеет большое значение для дальнейшего изучения патогенеза атопического дерматита. В этом исследовании мы подробно описываем метод моделирования с использованием 1-фтор-2,4-динитробензола (DNFB) для индуцирования ACD-подобных симптомов в ушах мышей и описываем несколько методов оценки тяжести дерматита во время моделирования. Этот экспериментальный протокол был успешно применен в некоторых экспериментах и играет определенную рекламную роль в области исследований ACD.
Аллергический контактный дерматит (АКД) является распространенным кожным заболеванием, которое характеризуется экземоподобными симптомами в месте контакта, отеком и эритемой в умеренных случаях, а также папулами, эрозиями, экссудацией или даже массивными рубцами в тяжелых случаях1. Он поражает до 20% населения и может поражать людей любого возраста2. ACD часто возникает у людей, которые неоднократно подвергались воздействию аллергенов, и может быть вызван иммунным ответом человека на один или несколько аллергенов в их доме или на рабочем месте3. Отсроченная гиперчувствительность IV типа считается основным типом иммунного ответа при ACD4. На участках кожи, которые неоднократно подвергались воздействию аллергенов, циркулирующие Т-клетки памяти накапливаются в большом количестве и вызывают иммунные и воспалительные реакции 3,5,6. Целью данной работы является предложение надежной лабораторной методики для дальнейшего исследования иммунологических и воспалительных реакций при развитии АКД.
Начало АКД обычно связано с контактной гиперчувствительностью, вызванной повторным воздействием химических веществ. В течение последних нескольких десятилетий многочисленные исследователи разработали различные модели животных ACD у домашних мышей7,8, морских свинок 9,10 и других животных, чтобы имитировать начало заболевания. Большинство экспериментальных методов состоят из двух этапов: абдоминальная сенсибилизация (индукция) и обеспечение стимулов на спине или мочке уха (стимуляция). Обычно используемые химические вещества в основном включают 1-фтор-2,4-динитробензол (DNFB) / 1-хлор-2,4-динитробензол (DNCB) 8,9,11, оксазолон 12, урушиол 13 и т. Д. Среди них наиболее широко используются DNFB и DNCB, о которых впервые сообщалось в октябре 1958 года10. Также часто используются модельсенсибилизации никеля 14 и фотоаллергический контактный дерматит модели15.
Представлен экспериментальный метод построения модели ACD. Этот метод обобщен и оптимизирован на основе предыдущих исследований и после сравнения с несколькими экспериментами. По сравнению с другими моделями ACD эта модель имеет некоторые преимущества, такие как небольшие индивидуальные различия, короткие периоды эксперимента, небольшое количество химической стимуляции и т. д. Кроме того, это исследование применимо к мышам, которые не только экономичны, но и имеют больше возможностей для нокаута генов или подготовки трансгенных мышей16. Мы также описываем различные методы, используемые для мониторинга прогресса ACD в эксперименте, такие как измерение толщины уха, использование синего красителя Эванса для измерения воспалительной экссудации и т. д. Эта модель может не только анализировать мышиные уши, кровь, селезенку и другие образцы лабораторными средствами для изучения патогенеза АКД, но также применима для доклинической оценки новых терапевтических методов, что имеет определенное рекламное значение.
Описанный здесь протокол для индуцирования ACD-подобных симптомов в ушах мышей может быть использован для изучения патофизиологии ACD и в качестве инструмента скрининга для разработки новых лекарств.
Существует два ключевых шага для создания модели ACD: начальная сенсибил?…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (NSFC) для Н.-Н. Ю. (81904212); Научно-технический проект традиционной китайской медицины провинции Цзянсу (YB201995); и Проект специального финансирования для докторантов в Китае (2020T130562).
1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) | Merck | 200-734-3 | 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene, ≥99% |
Acetone | Sinopharm Chemical Reagent Co. LTD | 10000418 | ≥99.5% |
Aluminum foil | Cleanwrap | CF-2 | |
Evans blue dye | Solarbio | 314-13-6 | Dye content approx. 80% |
Mouse fixator | ZHUYANBANG | GEGD-SM1830 | |
Olive oil | Solarbio | 8001-25-0 | 500 ml |
Pipet tip | Biofount | FT-200 | 10 – 200 μl |
Pipettor | Eppendorf AG | 3123000250 | 20 – 200 μl |
Razor blade | Shanghai Gillette Co. LTD | 74-S | |
Vernier calipers | Delixi Electric | DECHOTVCS1200 |