Summary

İnme sonrası eksiklikleri karakterize etmek için kendi kendine başlatılan sıçan davranışsal verilerinin toplanması

Published: March 15, 2024
doi:

Summary

Bir sosyal koloni kafesi ortamında kendi kendine başlatılan bireysel davranış oturumlarından veri elde etmek için bir sistem sunulmaktadır. Bu sistemin etkinliği, inme sonrası motor bozuklukların, motivasyonla ilgili potansiyel davranış değişikliklerinin, sirkadiyen varyasyonların ve diğer yenilikçi bağımlı değişkenlerin karakterizasyonunu sağlayan otomatik bir vasıflı erişim değerlendirmesi kullanılarak gösterilmiştir.

Abstract

Sıçan modellerinde davranış testleri, psikolojik, biyomedikal ve davranışsal araştırmalar dahil olmak üzere çeşitli amaçlar için sıklıkla kullanılmaktadır. Birçok geleneksel yaklaşım, tek bir araştırmacı ile bir deneydeki her hayvan arasında bireysel, bire bir test oturumlarını içerir. Bu kurulum araştırmacı için çok zaman alıcı olabilir ve bunların varlığı davranışsal verileri istenmeyen şekillerde etkileyebilir. Ek olarak, sıçan araştırmaları için geleneksel kafesleme, normalde türler için tipik olan zenginleştirme, egzersiz ve sosyalleşme eksikliğini empoze eder ve bu bağlam davranışsal verilerin sonuçlarını da çarpıtabilir. Bu sınırlamaların üstesinden gelmek, edinilmiş beyin hasarı çalışması da dahil olmak üzere çeşitli araştırma uygulamaları için faydalı olabilir. Burada, insanların varlığı olmadan bir koloni kafesinde bireysel sıçan davranışını otomatik olarak eğitmek ve test etmek için örnek bir yöntem sunulmaktadır. Radyo frekansı tanımlaması, seansları bireysel sıçana göre uyarlamak için kullanılabilir. Bu sistemin doğrulanması, inme öncesi ve sonrası yetenekli ön ayak motor performansının ölçülmesi örnek bağlamında meydana geldi. Başarı oranı, çekme kuvvetinin çeşitli yönleri, nöbet analizi, başlama hızı ve paternleri, seans süresi ve sirkadiyen paternler dahil olmak üzere inme sonrası davranış bozukluklarının geleneksel özellikleri ve sistem tarafından sağlanan yeni ölçümler ölçülür. Bu değişkenler birkaç sınırlama ile otomatik olarak toplanabilir; Cihaz, maruziyet, zamanlama ve uygulamanın deneysel kontrolünü ortadan kaldırsa da, doğrulama, bu değişkenlerde hayvandan hayvana makul bir tutarlılık sağladı.

Introduction

Sıçan modelleriyle davranışsal eğitim ve test, bilişsel süreçlerin araştırılmasından hastalık durumlarına ve daha fazlasına kadar sayısız araştırma alanında önemlidir1. Tipik olarak, bu eğitim ve test, bire bir oturumlarda tek hayvanlarla gerçekleştirilir, bir araştırmacı hayvanı ev kafesinden manuel olarak çıkarır ve geçici olarak bir tür aparata yerleştirir. Ne yazık ki, bu yaklaşımla ilgili çeşitli zorluklar ve sınırlamalar vardır. Birincisi, davranışsal testler araştırmacılar için çok zaman alabilir ve eğitim gerektiğinde, bu zaman gereksinimi daha da artar. İkincisi, bu yaklaşım, başka bir yerde kurulduğu gibi, elde edilen verileri otomatik olarak etkiler ve hatta potansiyel olarak karıştırır2. Bu karışıklıklar, zenginleştirme ile ilgili değişkenler göz önüne alındığında özellikle belirgindir. Spesifik olarak, laboratuvar fareleri geleneksel olarak bir veya iki sıçan3 için yeterince büyük olan küçük kafeslerde barındırılır ve eğer koşu tekerlekleri sağlanmazsa, egzersiz yapmak için anlamlı fırsatlar olmadan bir ömür boyu gidebilirler. Ek olarak, izole edilmiş konut, sıçan4 gibi bir sosyal türde önemli bir stres kaynağı olabilir. Refahla ilgili bu dezavantajlardan bazıları muhtemelen sıçan fizyolojisini 5,6 etkiler, bu da türe özgü davranışsal ifadenin4 gelişimini önleyebilir ve insan bağlamlarına uygulandığı şekliyle kemirgen modellerinin kalitesini etkileyebilir.

Araştırmacılar son yıllarda bu sorunlara çeşitli çözümler aradılar. En basit çözüm türü, davranışsal testleri ve eğitimi 7,8,9,10 otomatikleştirmek ve böylece tek bir araştırmacının tek bir hayvana katılma gereksinimini ortadan kaldırmak olmuştur. Ek bir çözüm, hayvanların deney odalarına11,12 transferini otomatikleştirmek ve insan müdahalesine olan ihtiyacı daha da ortadan kaldırmak olmuştur. Son olarak, hayvanların diğer hayvanlarla birlikte koloni kafesinde barındırılmasına ve keşif ve zenginleştirme için daha fazla alana sahip olmasına izin veren çeşitli kurulumlar araştırılmıştır13. Bu avantajlara rağmen, bu tür koloni kurulumları, bireysel olarak farklılaştırılmış davranışsal verileri toplama çabalarını sınırlayabilir veya karmaşıklaştırabilir (yine de bilgisayarla görmeyi kullanma çabalarına bakınız)14,15. Bireysel davranışsal veriler gerekiyorsa, davranışsal oturumlar için hayvanları koloni kafesinden tanımlamak ve almak da daha zor veya karmaşık olabilir. Şu anda, (zenginleştirilmiş) koloni barınağından bireysel davranışsal veri toplamak için çok az sistem bulunmaktadır 16,17,18.

Bu dezavantajlar, edinilmiş beyin hasarının davranışsal etkileri üzerine yapılan araştırmaları özellikle etkileyebilir. İlk olarak, insanların varlığının ve/veya cinsiyetinin yanı sıra işleme uygulamalarının kemirgen davranışınıetkilediği açıktır 2,19 ve bu değişkenlerin sıçanların davranışlarını farklı şekilde etkileyebileceği açıktır. felç sonrası. İkincisi, inme sonrası insan davranışsal sonuçları, önerilen rehabilitasyon egzersizleri dozuna gönüllü olarak katılımın azalmasıyla daha da kötüleşebilir20. Şu anda, kemirgen deneyleri bu tür bir bağlamı modellememe eğilimindedir, çünkü fareler davranışsal oturumlara katılmayı veya kaçınmayı seçmekte özgür değildir.

Bu makale, zenginleştirilmiş koloni kafeslemesi çerçevesinde bireysel davranış testlerini kolaylaştırmak için tasarlanmış bir protokol sunmaktadır. Bu yaklaşım sadece mevcut uygulamaların kısıtlamalarını ele almakla kalmaz, aynı zamanda yenilikçi önlemlerin araştırılması için yollar açar. Tek fareli bir turnike (ORT) geliştirilmiştir ve bir koloni kafesine takılabilir, bu da hayvanların davranış odalarına bağımsız olarak girmelerini ve kendi eğitim ve test oturumlarını başlatmalarını sağlar. Sistem uygun fiyatlı; her ORT düşük maliyetle monte edilebilir (bir 3D yazıcıya erişim verilir). Geçmişte, bu sistemin doğrulanması, hayvanların bir deneycinin varlığı olmadan basit bir edimsel kol presi gerçekleştirmek için tutarlı bir şekilde eğitilebileceğini gösteren temel bir edimsel oda kullanılarak gerçekleştiriliyordu16. Bununla birlikte, bu yapılandırmanın diğer senaryolar için geçerli olup olmadığı sorusu çözülmemiştir. Amaç, bir inme sonrası motor bozuklukla ilgili yetenekli erişim davranışını eğitmek ve ölçmek için daha önce kurulmuş olan ORT kolonisi kafesleme kurulumunun etkinliğini doğrulamaktır. Konfigürasyon, inme araştırmalarında tipik olarak keşfedilmeyen yeni değişkenler oluşturmak için kullanıldı. Bu değişkenler, vasıflı erişim görevi için performans ölçümlerini ve motivasyon ve karar verme ile ilgili olabilecek kendi kendine başlatma ölçümlerini içerir. Ayrıca, 24 saatlik periyodun tamamı boyunca günlük kendi kendine başlamanın sirkadiyen modellerinde inme kaynaklı değişiklikler etkili bir şekilde tespit edildi.

Protocol

Tüm prosedürler ve hayvan bakımı, Kuzey Teksas Üniversitesi kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi (IACUC) tarafından onaylandı ve Laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüleri kılavuzuna bağlı kaldı. Bu çalışmada kullanılan erişkin erkek ve dişi Long-Evans sıçanları (400-800 g, 1.5 yaş) koloni kafesine yerleştirildi. 1. Ekipman hazırlığı Tek fareli turnikeyi (ORT) tasarım dosyalarına ve y…

Representative Results

Hayvanlar, bir koloni kafesinde dört dişi sıçan ve ayrı bir koloni kafesinde dört erkek sıçan ile eğitildi ve test edildi. Tüm sıçanlar ORT’lerden dört gün veya daha kısa sürede geçmeyi öğrendi. Dört dişi sıçan, yaklaşık 6 haftalık eğitimde 120 g kuvvet gereksiniminde% >85 başarılı nöbetlere ulaştı ve erkek sıçanlar 10 haftada aynı kritere ulaştı (yoksun sıçanlarla standart eğitim ile yaklaşık 3 haftaya kıyasla)7. Bu eğitim süresi, 2 ila 6. haftalar ar…

Discussion

Bu protokolün birden fazla kullanımı vardır. Birincisi ve en geniş anlamda, ORT, sosyal, zenginleştirilmiş konut bağlamında otomatik tek denekli davranışsal eğitim ve veri toplamayı sağlamak amacıyla geliştirilmiştir. Bu çalışma, tipik davranışsal ölçümleri toplama ve bunları inme bağlamında detaylandırma fikrini test ederken, aynı şey diğer uygulamalar ve davranışsal görevler için de yapılabilir. Bu doğrulamada toplanan önlemler bile, alternatif pekiştirme programlarını, alterna…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışma kısmen Beatrice H. Barrett’ın Kuzey Teksas Üniversitesi’ne (UNT) nöro-edimsel ilişkiler üzerine araştırma yapması için bağış tarafından finanse edildi. Nöroplastisite ve Onarım Laboratuvarı’nın tüm üyelerinin, özellikle Valerie Rojas, Mary Kate Moore, Cameron Scallon ve Hannah McGee’nin katkıları ve yardımları için minnettarız.

Materials

3D printer  Consult with local makerspace
bolt Boltdepot 1346 6-32 or 8-32 by  0.5"
bolt Boltdepot 1348 6-32 or 8-32 by  0.75"
door hinge XJS (Amazon) 43398-16234 1" cabinet stainless steel door hinge set; Optional (if "perfect hinge" is not printed)
drill Any electric drill works
extension spring Nieko (Amazon) 50456A Choose and adjust spring based on ORT sized and desired tension
granulated sugar
lock nuts Boltdepot 2551 6-32 or 8-32
measuring tape
microcontroller Arduino A000066 Arduino Uno
microswitch Sparkfun KW4-Z5F mini microswitch (SPDT-roller lever)
One Rat Turnstile (ORT) Vulintus Contact company to request quote if not self-assembling
Operant Chambers as desired for behavioral assessment: For this experiment we used automated isometric pull chambers from Vulintus  Vulintus No cat #: contact Vulintus Contact Vulintus for quote
PLA filament  OVERTURE (Amazon) UK-MATTEPLA17511
plexiglass Lesnlok (Amazon) B09P74K7BR clear, 1/8" thickness, Cut to size
plexiglass cutter
python program Python Software Foundation software available on request
RFID reader Priority 1 Design RFIDRW-E-USB With antenna
RFID tag Unified Information Devices UC-1485-10
rod Boltdepot 23632 cut to > 3.5"
Rotary tool Used to bore hole in apparatus and colony caging for ORT; any hardware usable
sand paper HSYMQ (Amazon) TOMPOL-1118-1915-11
socket wrench set Any socket wrench set works
soldering iron
super glue 234790
wire Plusivo (Amazon) EAN0721248989789

References

  1. Whishaw, I. Q., Kolb, B. . The behavior of the laboratory rat: A handbook with tests. , (2004).
  2. Sorge, R. E., et al. Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents. Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).
  3. Ottesen, J. L., Weber, A., Gürtler, H., Mikkelsen, L. F. New housing conditions: Improving the welfare of experimental animals. Alternatives to Laboratory Animals. 32 (Suppl 1B), 397-404 (2004).
  4. Arakawa, H. Ethological approach to social isolation effects in behavioral studies of laboratory rodents. Behavioural Brain Research. 341, 98-108 (2018).
  5. Simpson, J., Kelly, J. P. The impact of environmental enrichment in laboratory rats-behavioural and neurochemical aspects. Behavioural Brain Research. 222 (1), 246-264 (2011).
  6. Van Praag, H., Kempermann, G., Gage, F. H. Neural consequences of enviromental enrichment. Nature Reviews Neuroscience. 1 (3), 191-198 (2000).
  7. Hays, S. A., et al. The isometric pull task: A novel automated method for quantifying forelimb force generation in rats. Journal of Neuroscience Methods. 212 (2), 329-337 (2013).
  8. Wong, C. C., Ramanathan, D. S., Gulati, T., Won, S. J., Ganguly, K. An automated behavioral box to assess forelimb function in rats. Journal of Neuroscience Methods. 246, 30-37 (2015).
  9. Sindhurakar, A., Butensky, S. D., Carmel, J. B. Automated forelimb tasks for rodents: Current advantages and limitations, and future promise. Neurorehabilitation and Neural Repair. 33 (7), 503-512 (2019).
  10. Sindhurakar, A., et al. An automated test of rat forelimb supination quantifies motor function loss and recovery after corticospinal injury. Neurorehabilitation and Neural Repair. 31 (2), 122-132 (2017).
  11. Gallistel, C., et al. Screening for learning and memory mutations: A new approach. Acta psychologica Sinica. 42 (1), 138 (2010).
  12. Fenrich, K. K., et al. Improved single pellet grasping using automated ad libitum full-time training robot. Behavioural Brain Research. 281, 137-148 (2015).
  13. Brenneis, C., et al. Automated tracking of motion and body weight for objective monitoring of rats in colony housing. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 56 (1), 18-31 (2017).
  14. Pereira, T. D., et al. Sleap: A deep learning system for multi-animal pose tracking. Nature Methods. 19 (4), 486-495 (2022).
  15. Lauer, J., et al. Multi-animal pose estimation, identification and tracking with deeplabcut. Nature Methods. 19 (4), 496-504 (2022).
  16. Butcher, G., et al. An apparatus for automatically training and collecting individualized behavioral data with socially housed rodents. Journal of Neuroscience Methods. 365, 109387 (2022).
  17. Winter, Y., Schaefers, A. T. A sorting system with automated gates permits individual operant experiments with mice from a social home cage. Journal of Neuroscience Methods. 196 (2), 276-280 (2011).
  18. Rivalan, M., Munawar, H., Fuchs, A., Winter, Y. An automated, experimenter-free method for the standardised, operant cognitive testing of rats. PLOS One. 12 (1), e0169476 (2017).
  19. Deacon, R. M. Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments. Nature Protocols. 1 (2), 936-946 (2006).
  20. Lang, C. E., Lohse, K. R., Birkenmeier, R. L. Dose and timing in neurorehabilitation: Prescribing motor therapy after stroke. Current Opinion in Neurology. 28 (6), 549 (2015).
  21. Butcher, G., Becker, A., Davidson, A., Baltazar, M., Armshaw, J., Cruz, S. Inventing a supercage for rats. , (2019).
  22. Davidson, A., et al. Engineering an enriched environment operant chamber and its implications. , (2019).
  23. Windle, V., et al. An analysis of four different methods of producing focal cerebral ischemia with endothelin-1 in the rat. Experimental Neurology. 201 (2), 324-334 (2006).
  24. Reppucci, C. J., Veenema, A. H. The social versus food preference test: A behavioral paradigm for studying competing motivated behaviors in rodents. MethodsX. 7, 101119 (2020).
  25. Borland, J. M., et al. A novel operant task to assess social reward and motivation in rodents. Journal of Neuroscience Methods. 287, 80-88 (2017).
  26. Tzschentke, T. M. Review on cpp: Measuring reward with the conditioned place preference (cpp) paradigm: Update of the last decade. Addiction Biology. 12 (3-4), 227-462 (2007).
  27. Salamone, J. D., Correa, M. Neurobiology and pharmacology of activational and effort-related aspects of motivation: Rodent studies. Current Opinion in Behavioral Sciences. 22, 114-120 (2018).
  28. Shull, R. L. Bouts, changeovers, and units of operant behavior. European Journal of Behavior Analysis. 12 (1), 49-72 (2011).
  29. Gottlieb, E., et al. The bidirectional impact of sleep and circadian rhythm dysfunction in human ischaemic stroke: A systematic review. Sleep Medicine Reviews. 45, 54-69 (2019).
  30. Lo, E. H., et al. Circadian biology and stroke. Stroke. 52 (6), 2180-2190 (2021).
  31. Meng, H., Liu, T., Borjigin, J., Wang, M. M. Ischemic stroke destabilizes circadian rhythms. Journal of Circadian Rhythms. 6 (1), 1-13 (2008).
  32. Stern, R. A., Bachman, D. L. Depressive symptoms following stroke. The American Journal of Psychiatry. 148 (3), 351-356 (1991).
  33. Rapolienė, J., Endzelytė, E., Jasevičienė, I., Savickas, R. Stroke patients motivation influence on the effectiveness of occupational therapy. Rehabilitation Research and Practice. 2018, (2018).
  34. Robinson, R. G., Jorge, R. E. Post-stroke depression: A review. American Journal of Psychiatry. 173 (3), 221-231 (2016).
  35. Faraji, J., et al. Sex-specific stress and biobehavioral responses to human experimenters in rats. Frontiers in Neuroscience. 16, 965500 (2022).

Play Video

Cite This Article
Armshaw, J., Butcher, G., Becker, A. Gathering Self-Initiated Rat Behavioral Data to Characterize Post-Stroke Deficits. J. Vis. Exp. (205), e64967, doi:10.3791/64967 (2024).

View Video