Summary

Сбор данных о поведении крыс по собственной инициативе для характеристики постинсультного дефицита

Published: March 15, 2024
doi:

Summary

Представлена система получения данных о самоинициируемых индивидуальных поведенческих сессиях в условиях социальной клетки. Эффективность этой системы демонстрируется с помощью автоматизированной квалифицированной оценки охвата, позволяющей охарактеризовать двигательные нарушения после инсульта, потенциальные поведенческие изменения, связанные с мотивацией, циркадные вариации и другие инновационные зависимые переменные.

Abstract

Поведенческое тестирование на крысовых моделях часто используется для различных целей, включая психологические, биомедицинские и поведенческие исследования. Многие традиционные подходы включают в себя индивидуальные сеансы тестирования один на один между одним исследователем и каждым животным в эксперименте. Эта установка может занять очень много времени для исследователя, и их присутствие может повлиять на поведенческие данные нежелательным образом. Кроме того, традиционное содержание в клетке для исследований на крысах требует отсутствия обогащения, упражнений и социализации, которые обычно типичны для вида, и этот контекст также может исказить результаты поведенческих данных. Преодоление этих ограничений может быть целесообразным для нескольких исследовательских приложений, включая изучение приобретенных повреждений головного мозга. Здесь представлен пример метода автоматического обучения и тестирования индивидуального поведения крыс в клетке колонии без присутствия человека. Радиочастотная идентификация может быть использована для адаптации сеансов к конкретной крысе. Валидация этой системы произошла в контексте измерения моторики передних конечностей до и после инсульта. Измеряются традиционные характеристики постинсультных поведенческих нарушений и новые показатели, доступные с помощью системы, включая частоту успеха, различные аспекты силы тяги, анализ схватки, частоту и модели инициации, продолжительность сеанса и циркадные паттерны. Эти переменные могут собираться автоматически с небольшими ограничениями; Несмотря на то, что аппарат устраняет экспериментальный контроль над воздействием, временем и практикой, валидация обеспечила разумную согласованность этих переменных от животного к животному.

Introduction

Поведенческое обучение и тестирование на крысовых моделях важны в бесчисленных областях исследований, от изучения когнитивных процессов до болезненных состоянийи многого другого. Как правило, это обучение и тестирование проводится с отдельными животными в индивидуальных занятиях, при этом исследователь вручную извлекает животное из домашней клетки и временно помещает его в какой-либо аппарат. К сожалению, в этом подходе есть несколько трудностей и ограничений. Во-первых, поведенческое тестирование может занять много времени у исследователей, а когда требуется обучение, это время становится еще больше. Во-вторых, этот подход автоматически влияет на полученные данные или даже потенциально искажает их, как было установлено в другом месте2. Эти путаницы особенно заметны при рассмотрении переменных, связанных с обогащением. В частности, лабораторные крысы традиционно содержатся в небольших клетках, которые достаточно велики для одной или двух крыс, и если не предоставить беговые колеса, они могут всю жизнь не иметь значимых возможностей для физических упражнений. Кроме того, изолированное жилье может быть основным источником стресса у социальных видов, таких как крысы4. Некоторые из этих недостатков, связанных с благополучием, вероятно, влияют на физиологию крыс 5,6, что может предвосхитить развитие типичного для вида поведенческоговыражения4 и повлиять на качество моделей грызунов применительно к человеческому контексту.

В последние годы исследователи искали несколько типов решений этих проблем. Простейшим решением было автоматизировать поведенческое тестирование и обучение 7,8,9,10, тем самым устранив необходимость одного исследователя заниматься одним животным. Дополнительным решением является автоматизация перемещения животных в экспериментальные камеры11,12, что еще больше устраняет необходимость участия человека. Наконец, было исследовано несколько установок, которые позволяют размещать животных в клетках колонии с другими животными и с большим пространством для исследования иобогащения. Несмотря на эти преимущества, такие колонии могут ограничить или усложнить усилия по сбору индивидуально дифференцированных поведенческих данных (хотя см. усилия по использованию компьютерного зрения)14,15. Если требуются индивидуальные поведенческие данные, может быть сложнее или сложнее идентифицировать и извлекать животных из клеток колонии для поведенческих сеансов. В настоящее время существует несколько систем для сбора индивидуальных поведенческих данных из (обогащенных) колоний, в которых содержится 16,17,18.

Эти недостатки могут конкретно повлиять на исследования поведенческих эффектов приобретенной черепно-мозговой травмы. Во-первых, ясно, что присутствие и/или пол людей, а также методы обращения с ними влияют на поведение грызунов 2,19, и эти переменные могут по-разному влиять на поведение крыс до и до 2000 года. после инсульта. Во-вторых, поведенческие результаты человека после инсульта могут ухудшиться из-за добровольного снижения вовлеченности в рекомендуемую дозировку реабилитационныхупражнений. В настоящее время эксперименты на грызунах, как правило, не моделируют такой контекст, потому что крысы не свободны в выборе участия или воздержания от поведенческих сеансов.

В этой статье представлен протокол, предназначенный для облегчения индивидуального поведенческого тестирования в рамках обогащенной клетки колоний. Этот подход не только устраняет ограничения, связанные с нынешней практикой, но и открывает возможности для изучения новаторских мер. Был разработан турникет для одной крысы (ОРТ), который может быть прикреплен к клетке колонии, что позволяет животным самостоятельно входить в поведенческие камеры и инициировать свои собственные сеансы обучения и тестирования. Система доступна по цене; каждый ОРТ может быть собран с небольшими затратами (при наличии доступа к 3D-принтеру). В прошлом валидация этой системы проводилась с использованием базовой оперантной камеры, показывая, что животных можно последовательно обучать выполнять простое оперантное нажатие рычага без присутствия экспериментатора16. Тем не менее, вопрос о том, применима ли эта конфигурация к другим сценариям, остается нерешенным. Цель состоит в том, чтобы подтвердить эффективность ранее созданной системы ORT-colony для обучения и количественной оценки квалифицированного поведения, связанного с двигательными нарушениями после инсульта. Конфигурация была использована для создания новых переменных, которые обычно не изучаются в исследованиях инсульта. Эти переменные включают в себя показатели эффективности для задачи по охвату квалифицированных специалистов и измерения самоинициации, которые могут иметь отношение к мотивации и принятию решений. Кроме того, были эффективно обнаружены индуцированные инсультом изменения в циркадных паттернах ежедневной самоинициации в течение всего 24-часового периода.

Protocol

Все процедуры и уход за животными были одобрены институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) Университета Северного Техаса и соответствовали руководству Национальных институтов здравоохранения по уходу и использованию лабораторных животных. Взрослые са…

Representative Results

Животные были обучены и протестированы с четырьмя самками крыс в одной клетке колонии и четырьмя самцами крыс в отдельной клетке колонии. Все крысы научились проходить через ОРТ за четыре дня или меньше. Четыре крысы-самки достигли >85% успешных схваток при требуемой силе 120 g примерно за …

Discussion

Этот протокол имеет множество применений. Во-первых, и это наиболее широко, ОРТ был разработан с целью обеспечения автоматизированного однопредметного поведенческого обучения и сбора данных в контексте социального, обогащенного жилья. В то время как это исследование проверило идею сб…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Эта работа была частично профинансирована Фондом Беатрис Х. Барретт для исследования нейрооперантных отношений в Университете Северного Техаса (UNT). Мы благодарны за вклад и помощь всем сотрудникам Лаборатории нейропластичности и восстановления, особенно Валери Рохас, Мэри Кейт Мур, Кэмерон Скаллон и Ханна Макги.

Materials

3D printer  Consult with local makerspace
bolt Boltdepot 1346 6-32 or 8-32 by  0.5"
bolt Boltdepot 1348 6-32 or 8-32 by  0.75"
door hinge XJS (Amazon) 43398-16234 1" cabinet stainless steel door hinge set; Optional (if "perfect hinge" is not printed)
drill Any electric drill works
extension spring Nieko (Amazon) 50456A Choose and adjust spring based on ORT sized and desired tension
granulated sugar
lock nuts Boltdepot 2551 6-32 or 8-32
measuring tape
microcontroller Arduino A000066 Arduino Uno
microswitch Sparkfun KW4-Z5F mini microswitch (SPDT-roller lever)
One Rat Turnstile (ORT) Vulintus Contact company to request quote if not self-assembling
Operant Chambers as desired for behavioral assessment: For this experiment we used automated isometric pull chambers from Vulintus  Vulintus No cat #: contact Vulintus Contact Vulintus for quote
PLA filament  OVERTURE (Amazon) UK-MATTEPLA17511
plexiglass Lesnlok (Amazon) B09P74K7BR clear, 1/8" thickness, Cut to size
plexiglass cutter
python program Python Software Foundation software available on request
RFID reader Priority 1 Design RFIDRW-E-USB With antenna
RFID tag Unified Information Devices UC-1485-10
rod Boltdepot 23632 cut to > 3.5"
Rotary tool Used to bore hole in apparatus and colony caging for ORT; any hardware usable
sand paper HSYMQ (Amazon) TOMPOL-1118-1915-11
socket wrench set Any socket wrench set works
soldering iron
super glue 234790
wire Plusivo (Amazon) EAN0721248989789

References

  1. Whishaw, I. Q., Kolb, B. . The behavior of the laboratory rat: A handbook with tests. , (2004).
  2. Sorge, R. E., et al. Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents. Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).
  3. Ottesen, J. L., Weber, A., Gürtler, H., Mikkelsen, L. F. New housing conditions: Improving the welfare of experimental animals. Alternatives to Laboratory Animals. 32 (Suppl 1B), 397-404 (2004).
  4. Arakawa, H. Ethological approach to social isolation effects in behavioral studies of laboratory rodents. Behavioural Brain Research. 341, 98-108 (2018).
  5. Simpson, J., Kelly, J. P. The impact of environmental enrichment in laboratory rats-behavioural and neurochemical aspects. Behavioural Brain Research. 222 (1), 246-264 (2011).
  6. Van Praag, H., Kempermann, G., Gage, F. H. Neural consequences of enviromental enrichment. Nature Reviews Neuroscience. 1 (3), 191-198 (2000).
  7. Hays, S. A., et al. The isometric pull task: A novel automated method for quantifying forelimb force generation in rats. Journal of Neuroscience Methods. 212 (2), 329-337 (2013).
  8. Wong, C. C., Ramanathan, D. S., Gulati, T., Won, S. J., Ganguly, K. An automated behavioral box to assess forelimb function in rats. Journal of Neuroscience Methods. 246, 30-37 (2015).
  9. Sindhurakar, A., Butensky, S. D., Carmel, J. B. Automated forelimb tasks for rodents: Current advantages and limitations, and future promise. Neurorehabilitation and Neural Repair. 33 (7), 503-512 (2019).
  10. Sindhurakar, A., et al. An automated test of rat forelimb supination quantifies motor function loss and recovery after corticospinal injury. Neurorehabilitation and Neural Repair. 31 (2), 122-132 (2017).
  11. Gallistel, C., et al. Screening for learning and memory mutations: A new approach. Acta psychologica Sinica. 42 (1), 138 (2010).
  12. Fenrich, K. K., et al. Improved single pellet grasping using automated ad libitum full-time training robot. Behavioural Brain Research. 281, 137-148 (2015).
  13. Brenneis, C., et al. Automated tracking of motion and body weight for objective monitoring of rats in colony housing. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 56 (1), 18-31 (2017).
  14. Pereira, T. D., et al. Sleap: A deep learning system for multi-animal pose tracking. Nature Methods. 19 (4), 486-495 (2022).
  15. Lauer, J., et al. Multi-animal pose estimation, identification and tracking with deeplabcut. Nature Methods. 19 (4), 496-504 (2022).
  16. Butcher, G., et al. An apparatus for automatically training and collecting individualized behavioral data with socially housed rodents. Journal of Neuroscience Methods. 365, 109387 (2022).
  17. Winter, Y., Schaefers, A. T. A sorting system with automated gates permits individual operant experiments with mice from a social home cage. Journal of Neuroscience Methods. 196 (2), 276-280 (2011).
  18. Rivalan, M., Munawar, H., Fuchs, A., Winter, Y. An automated, experimenter-free method for the standardised, operant cognitive testing of rats. PLOS One. 12 (1), e0169476 (2017).
  19. Deacon, R. M. Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments. Nature Protocols. 1 (2), 936-946 (2006).
  20. Lang, C. E., Lohse, K. R., Birkenmeier, R. L. Dose and timing in neurorehabilitation: Prescribing motor therapy after stroke. Current Opinion in Neurology. 28 (6), 549 (2015).
  21. Butcher, G., Becker, A., Davidson, A., Baltazar, M., Armshaw, J., Cruz, S. Inventing a supercage for rats. , (2019).
  22. Davidson, A., et al. Engineering an enriched environment operant chamber and its implications. , (2019).
  23. Windle, V., et al. An analysis of four different methods of producing focal cerebral ischemia with endothelin-1 in the rat. Experimental Neurology. 201 (2), 324-334 (2006).
  24. Reppucci, C. J., Veenema, A. H. The social versus food preference test: A behavioral paradigm for studying competing motivated behaviors in rodents. MethodsX. 7, 101119 (2020).
  25. Borland, J. M., et al. A novel operant task to assess social reward and motivation in rodents. Journal of Neuroscience Methods. 287, 80-88 (2017).
  26. Tzschentke, T. M. Review on cpp: Measuring reward with the conditioned place preference (cpp) paradigm: Update of the last decade. Addiction Biology. 12 (3-4), 227-462 (2007).
  27. Salamone, J. D., Correa, M. Neurobiology and pharmacology of activational and effort-related aspects of motivation: Rodent studies. Current Opinion in Behavioral Sciences. 22, 114-120 (2018).
  28. Shull, R. L. Bouts, changeovers, and units of operant behavior. European Journal of Behavior Analysis. 12 (1), 49-72 (2011).
  29. Gottlieb, E., et al. The bidirectional impact of sleep and circadian rhythm dysfunction in human ischaemic stroke: A systematic review. Sleep Medicine Reviews. 45, 54-69 (2019).
  30. Lo, E. H., et al. Circadian biology and stroke. Stroke. 52 (6), 2180-2190 (2021).
  31. Meng, H., Liu, T., Borjigin, J., Wang, M. M. Ischemic stroke destabilizes circadian rhythms. Journal of Circadian Rhythms. 6 (1), 1-13 (2008).
  32. Stern, R. A., Bachman, D. L. Depressive symptoms following stroke. The American Journal of Psychiatry. 148 (3), 351-356 (1991).
  33. Rapolienė, J., Endzelytė, E., Jasevičienė, I., Savickas, R. Stroke patients motivation influence on the effectiveness of occupational therapy. Rehabilitation Research and Practice. 2018, (2018).
  34. Robinson, R. G., Jorge, R. E. Post-stroke depression: A review. American Journal of Psychiatry. 173 (3), 221-231 (2016).
  35. Faraji, J., et al. Sex-specific stress and biobehavioral responses to human experimenters in rats. Frontiers in Neuroscience. 16, 965500 (2022).

Play Video

Cite This Article
Armshaw, J., Butcher, G., Becker, A. Gathering Self-Initiated Rat Behavioral Data to Characterize Post-Stroke Deficits. J. Vis. Exp. (205), e64967, doi:10.3791/64967 (2024).

View Video