Summary

脳卒中後の欠損を特徴付けるための自発的なラット行動データの収集

Published: March 15, 2024
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Summary

社会的コロニーケージ設定内で自己開始された個人行動セッションからデータを取得するためのシステムが提示されます。このシステムの有効性は、自動化された熟練したリーチ評価を使用して実証され、脳卒中後の運動障害、モチベーションに関連する潜在的な行動変化、概日変動、およびその他の革新的な従属変数の特性評価を可能にします。

Abstract

ラットモデルでの行動試験は、心理学的、生物医学的、行動学的研究など、さまざまな目的で頻繁に利用されています。従来のアプローチの多くは、実験において、1人の研究者と各動物との間で1対1の個別の試験セッションを行うものです。この設定は研究者にとって非常に時間がかかる可能性があり、それらの存在は望ましくない方法で行動データに影響を与える可能性があります。さらに、ラット研究のための従来のケージは、通常種に典型的である濃縮、運動、および社会化の欠如を課し、この文脈は行動データの結果を歪める可能性もあります。これらの制限を克服することは、後天性脳損傷の研究を含むいくつかの研究用途にとって価値があるかもしれません。ここでは、ヒトがいないコロニーケージ内で個々のラットの行動を自動的に訓練およびテストするための方法の例が示されています。無線周波数識別を利用して、個々のラットに合わせてセッションを調整することができます。このシステムの検証は、脳卒中前後の熟練した前肢運動能力を測定する例のコンテキストで行われました。脳卒中後の行動障害の従来の特性と、成功率、引っ張り力のさまざまな側面、発作分析、開始率とパターン、セッション時間、概日パターンなど、システムによって可能になる新しい測定が測定されます。これらの変数は、いくつかの制限なしに自動的に収集できます。この装置は、曝露、タイミング、および実践の実験的制御を取り除きますが、検証により、動物間でこれらの変数に合理的な一貫性がもたらされました。

Introduction

ラットモデルを用いた行動訓練と試験は、認知過程の探索から病態など、数え切れないほどの研究分野で重要である1。通常、このトレーニングとテストは、研究者が手動で動物を自宅のケージから取り出し、一時的に何らかの装置に入れて、1対1のセッションで1匹の動物で実施されます。残念ながら、このアプローチにはいくつかの困難と制限があります。まず、行動テストは研究者にとって非常に時間がかかる可能性があり、トレーニングが必要な場合、その時間要件はさらに大きくなります。第二に、このアプローチは、他の場所で確立されたように、取得したデータに自動的に影響を与えるか、潜在的に混乱させることさえあります2。これらの交絡は、濃縮関連の変数を考慮するときに特に顕著です。具体的には、実験用ラットは伝統的に1匹または2匹のラットにちょうど十分な大きさの小さなケージに収容されており3、ランニングホイールが提供されない場合、彼らは運動する有意義な機会なしに一生を過ごす可能性があります。さらに、孤立した住居は、ラット4などの社会種の主要なストレス源になる可能性があります。これらの福祉関連の欠点のいくつかは、ラットの生理機能5,6に影響を与える可能性が高く、種に典型的な行動発現4の発達を先取りし、人間の状況に適用されるげっ歯類モデルの質に影響を与える可能性があります。

近年、研究者はこれらの問題に対するいくつかのタイプの解決策を追求してきました。最も単純なタイプの解決策は、行動テストとトレーニングを自動化することでした 7,8,9,10、したがって、1人の研究者が1匹の動物に注意を向ける必要がなくなります。追加の解決策は、実験チャンバー11,12への動物の移動を自動化することで、人間の関与の必要性をさらに排除することである。最後に、動物を他の動物と一緒にコロニーケージに収容し、探索と濃縮のためのより多くの余地を与えることを可能にするいくつかの設定が検討されています13。これらの利点にもかかわらず、このようなコロニーのセットアップは、個別に差別化された行動データを収集する努力を制限したり、複雑にしたりする可能性があります(ただし、コンピュータービジョンを使用する取り組みを参照)14,15。個々の行動データが必要な場合、行動セッションのためにコロニーケージから動物を識別して回収することも、より困難または複雑になる可能性があります。現在、(濃縮された)コロニーハウジング16,17,18から個々の行動データを収集するためのシステムはほとんど存在しない。

これらの欠点は、後天性脳損傷の行動への影響に関する研究に特に影響を与える可能性があります。第一に、人間の存在および/または性別、および取り扱い慣行がげっ歯類の行動に影響を与えることは明らかであり2,19、これらの変数は、以前のラットラットの行動に異なる影響を与える可能性があります。脳卒中後。第二に、脳卒中後の人間の行動結果は、リハビリテーション運動の推奨用量への関与を自発的に減少させることによって悪化する可能性があります20。現在、げっ歯類の実験では、ラットは行動セッションに参加するか棄権するかを自由に選択できないため、この種のコンテキストをモデル化しない傾向があります。

この記事では、濃縮コロニーケージの枠組みの中で個々の行動テストを容易にするために設計されたプロトコルを紹介します。このアプローチは、現在の慣行の制約に対処するだけでなく、革新的な対策を探求するための道を開きます。1匹のラット回転式改札口(ORT)が開発され、コロニーケージに取り付けることができるため、動物は独立して行動室に入り、独自のトレーニングとテストセッションを開始できます。このシステムは手頃な価格です。各ORTは低コストで組み立てることができます(3Dプリンターへのアクセスがある場合)。過去には、このシステムの検証は、基本的なオペラント室を用いて行われ、実験者の立ち会いなしに、動物が単純なオペラントレバープレスを行うように一貫して訓練され得ることを示した16。それにもかかわらず、この構成が他のシナリオに適用できるかどうかという問題は未解決のままです。目的は、以前に確立されたORTコロニーケージセットアップの有効性を検証することです 脳卒中後の運動障害に関連する熟練したリーチ行動をトレーニングおよび定量化します。この構成は、脳卒中研究では通常調査されない新しい変数を生成するために利用されました。これらの変数には、熟練したリーチタスクのパフォーマンス指標と、モチベーションと意思決定に関連する可能性のある自己開始の測定が含まれます。さらに、脳卒中による24時間にわたる毎日の自己開始の概日パターンの変化が効果的に検出された。

Protocol

すべての手順と動物の世話は、ノーステキサス大学の施設の動物管理および使用委員会(IACUC)によって承認され、実験動物の世話と使用に関する国立衛生研究所のガイドに準拠しています。本研究で使用した成体の雄および雌のLong-Evansラット(400-800 g、1.5歳)をコロニーケージに収容しました。 1.機器の準備 設計ファイルと建設説明書に従って、1ラット…

Representative Results

動物は、1つのコロニーケージで4匹の雌ラット、別のコロニーケージで4匹のオスラットで訓練およびテストされました。すべてのラットは、4日以内にORTを通過することを学びました。4匹の雌ラットは、約6週間の訓練で120gの力の必要量で>85%の成功した発作に達し、雄ラットは10週間で同じ基準に達しました(恵まれないラットでの標準的な訓練では約3週間と比較して)7。こ?…

Discussion

このプロトコルには複数の用途があります。まず、最も広くは、ORTは、社会的で豊かな住宅の文脈で、自動化された単一被験者の行動トレーニングとデータ収集を可能にする目的で開発されました。この研究では、典型的な行動指標を収集し、脳卒中の文脈でそれらを詳しく説明するというアイデアをテストしましたが、他のアプリケーションや行動課題についても同じことができます。こ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

この研究は、ノーステキサス大学(UNT)への神経オペラント関係の研究のためのベアトリスH.バレット基金によって部分的に資金提供されました。神経可塑性および修復研究所のすべてのメンバー、特にValerie Rojas、Mary Kate Moore、Cameron Scallon、Hannah McGeeの意見と支援に感謝します。

Materials

3D printer  Consult with local makerspace
bolt Boltdepot 1346 6-32 or 8-32 by  0.5"
bolt Boltdepot 1348 6-32 or 8-32 by  0.75"
door hinge XJS (Amazon) 43398-16234 1" cabinet stainless steel door hinge set; Optional (if "perfect hinge" is not printed)
drill Any electric drill works
extension spring Nieko (Amazon) 50456A Choose and adjust spring based on ORT sized and desired tension
granulated sugar
lock nuts Boltdepot 2551 6-32 or 8-32
measuring tape
microcontroller Arduino A000066 Arduino Uno
microswitch Sparkfun KW4-Z5F mini microswitch (SPDT-roller lever)
One Rat Turnstile (ORT) Vulintus Contact company to request quote if not self-assembling
Operant Chambers as desired for behavioral assessment: For this experiment we used automated isometric pull chambers from Vulintus  Vulintus No cat #: contact Vulintus Contact Vulintus for quote
PLA filament  OVERTURE (Amazon) UK-MATTEPLA17511
plexiglass Lesnlok (Amazon) B09P74K7BR clear, 1/8" thickness, Cut to size
plexiglass cutter
python program Python Software Foundation software available on request
RFID reader Priority 1 Design RFIDRW-E-USB With antenna
RFID tag Unified Information Devices UC-1485-10
rod Boltdepot 23632 cut to > 3.5"
Rotary tool Used to bore hole in apparatus and colony caging for ORT; any hardware usable
sand paper HSYMQ (Amazon) TOMPOL-1118-1915-11
socket wrench set Any socket wrench set works
soldering iron
super glue 234790
wire Plusivo (Amazon) EAN0721248989789

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Cite This Article
Armshaw, J., Butcher, G., Becker, A. Gathering Self-Initiated Rat Behavioral Data to Characterize Post-Stroke Deficits. J. Vis. Exp. (205), e64967, doi:10.3791/64967 (2024).

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