このプロトコルは、大容量のマイクロCTスキャン、カスタムメイドの圧縮ステージ、および高度な画像処理ツールを組み合わせることにより、近位ヒト大腿骨全体の骨微細構造の変形とその靭性の測定を可能にします。
負荷が徐々に増加した状態で骨の微細構造をイメージングすることで、骨の微細構造の破壊挙動を観察することができます。ここでは、大腿骨頸部の臨床的に関連する骨折を引き起こす、徐々に増加する変形下で大腿骨近位部全体の一連の3次元微細構造画像を取得するためのプロトコルについて説明します。プロトコルは人口の骨のミネラル密度の下端の66-80歳の女性ドナーからの4つの大腿骨を使用して実証される(Tスコアの範囲= −2.09から−4.75)。マイクロコンピュータ断層撮影(マイクロCT)イメージング中に加えられた荷重を記録しながら、片足の姿勢を再現した標本に荷重を載せるために、放射線透過性の圧縮ステージが設計されました。視野は幅146mm、高さ132mmで、等方性画素サイズは0.03mmであった。力の増分は、破壊荷重の有限要素予測に基づいていました。圧縮段階を使用して、試験片に変位を適用し、所定の力増分を適用しました。大腿骨頸部の開口とせん断による亜柱頭骨折は、4〜5回の荷重増分後に発生しました。マイクロCT画像と反力測定値を処理して、骨のひずみとエネルギー吸収能力を調べました。皮質の不安定性は、初期のローディングステップで現れました。大腿骨頭の軟骨下骨は、骨折前に16%に達する大きな変形を示し、骨折まで支持能力が徐々に増加しました。変形エネルギーは、破壊までの変位とともに直線的に増加し、剛性は破壊直前にほぼゼロ値まで減少しました。破壊エネルギーの4分の3は、最後の25%の力増分中に試験片によって取得されました。結論として、開発されたプロトコルは、顕著なエネルギー吸収能力、または損傷耐性、および高齢のドナー年齢での皮質骨と海綿骨の間の相乗的相互作用を明らかにしました。
大腿骨頸部の骨折は、高齢化社会にとって大きな負担となっています。マイクロコンピュータ断層撮影(マイクロCT)イメージングとそれに付随する機械的検査により、骨の微細構造を観察し、骨強度、加齢に伴う変化、および負荷下での変位との関係を研究することができます1,2。しかし、最近まで、負荷がかかった状態での骨のマイクロCT研究は、切除された骨芯3、小動物4、およびヒト脊椎ユニット5に限定されていました。本プロトコルは、荷重下および骨折後の近位ヒト大腿骨全体の微細構造の変位を定量化することができる。
人間の大腿骨の障害を調査するためにいくつかの研究が行われており、時には対照的な結論に達しています。例えば、皮質構造および海綿構造の加齢に伴う薄化は、骨の弾性不安定性を引き起こすことによって加齢に伴う骨折感受性を決定すると考えられており6,7、これは、弾性不安定性がないと仮定した場合の皮質緊張および大腿骨強度予測の高い決定係数(R2 = 0.80-0.97)8,9とは明らかに対照的である.それにもかかわらず、そのような研究は体系的に大腿骨の強度を過小評価しており(21%〜29%)、したがって、モデルで実装された脆性および準脆性骨応答に疑問を投げかけています8,10。これらの明らかに対照的な所見の1つの可能な説明は、孤立した骨コアと比較して骨全体の骨折挙動が異なることにある可能性があります。したがって、大腿骨近位部全体の骨微細構造の変形と骨折応答を観察することは、大腿骨骨折力学および関連するアプリケーションに関する知識を深める可能性があります。
マイクロメトリック分解能で人骨全体をイメージングする現在の方法は限られています。ガントリーと検出器のサイズは、ヒトの大腿骨近位部をホストするのに適した作業容積(約13 cm x 10 cm、幅 x 長さ)と、関連するマイクロアーキテクチャの特徴を確実に捕捉できるように、場合によっては0.02〜0.03 mmのオーダーのピクセルサイズを提供する必要があります11。これらの仕様は、現在、一部の放射光施設1と市販の大容量マイクロCTスキャナー12,13で満たすことができる。圧縮段階は、人間の大腿骨に骨折を引き起こすのに十分な力(例えば、高齢の白人女性の場合0.9 kNから14.3 kNの間)を発生させながら、X線の減衰を最小限に抑えるために、放射線透過性でなければなりません14。この大きな破壊荷重変動は、破砕する荷重ステップ数、全体的な実験時間、およびそれに対応する生成されるデータ量の計画を複雑にします。この問題に対処するために、臨床コンピュータ断層撮影(CT)画像からの標本の骨密度分布を使用して、有限要素モデリングによって破壊荷重と位置を推定できます1,2。最後に、実験後、生成された大量のデータを処理して、人間の大腿骨全体の故障メカニズムとエネルギー散逸能力を研究する必要があります。
ここでは、大腿骨頸部の臨床的に関連する骨折を引き起こす、徐々に増加する変形の下で大腿骨近位部全体の一連の3次元微細構造画像を取得するためのプロトコルについて説明します2。このプロトコルには、検体圧縮の段階的な増分の計画、カスタムの放射線透過性圧縮ステージ を介した ロード、大容量のマイクロCTスキャナー による イメージング、および画像とロードプロファイルの処理が含まれます。
本プロトコルは、股関節骨折の経過時間マイクロメカニクスをex vivoで3次元で研究することを可能にします。人間の大腿骨の近位部に漸進的な変形を加え、反力を測定できる放射線透過性(アルミニウム)圧縮ステージは、カスタム設計、製造、およびテストされています。このプロトコルでは、大容量のマイクロCTスキャナーが採用されており、大腿骨近位部全体をマイクロメトリック?…
The authors have nothing to disclose.
オーストラリア研究評議会(FT180100338;IC190100020)は感謝して認められます。
Absorbent tissue | N/A | Maintain the bone moisture throughout the experiment | |
Alignment rig | Custom-made | Rig for positioning the specimen in the potting cup | |
Aluminium potting cup | Custom-made | Potting cup | |
Bone saw | N/A | Cut the specimen to size | |
Calibration phantom QCT Pro | Mindways Software, Inc., Austin, USA | CT Calibration 13002 | Calibrate grey levels in the images into equivalent bone mineral (ash) density levels |
Clinical Computed-Tmography scanner | General Electric Medical Systems Co., Wisconsin, USA | Optima CT660 | Preliminary imaging for the prediction of the load step to fracture |
Compressive stage | Custom-made | A 10 kg, radiotransparent compressive stage for applying and maintaining throught imaging a prescribed deformation to the specimen. | |
Dental cement | Soesterberg, The Netherlands | Vertex RS | |
Femur specimen | Science Care, Phoenix, USA | ||
Finite-element analysis software | ANSYS Inc., Canonsburg, USA | ANSYS Mechanical APDL | Finite-element software package |
Freezer | N/A | Store specimens at -20 °C | |
Hard Drive | Dell | Disk space: 500 GB per volume | |
Image bnarization and segmentation software | Skyscan-Bruker, Kontich, Belgium | CT analyzer | Image processing software |
Image elastic segmentation | The University of Sheffield | Bone DVC | https://bonedvc.insigneo.org/dvc/ |
Image processing and automation software | The MathWork Inc. | Matlab | Image processing software |
Image registration software | Skyscan-Bruker, Kontich, Belgium | DataViewer | Image processing software |
Image segmentation and FE modelling software | Simpleware, Exeter, UK | Scan IP | Bone egmentation software |
Image stiching script | Australian syncrotron, Clayton, VIC, AU | The script is available at IMBL | |
Image visualization | Kitware, Clifton Park, NY, USA | Paraview | Image visualization |
Image visualization | Australian National University | Dristhi | Image visualization: doi:10.1117/12.935640 |
Imaging and Medical beamline | Australian syncrotron, Clayton, VIC, AU | Large object micro-CT beamline at the Australian Synchrotron | |
Laptop | Dell Inc., USA | ||
Low-friction x-y table | THK Co., Tokyo, Japan | ||
NI signal acquisition software | National Instruments, Austin, TX | NI-DAQmx | |
Phosphate-buffered saline solution | Custom-made | Maintain the bone moisture throughout the experiment | |
Plastic bag | N/A | Maintain the bone moisture throughout the experiment | |
Rail | SKF Inc., Lansdale, PA, USA | ||
Screw-jack mechanism | Benzlers, Örebro, Sweden | Serie BD (warm gear unit) | stroke: 150 mm, maximal load: 10,000 N, gear ratio: 27:1, a displacement per revolution: 0.148 mm |
Single pco.edge sensor, lens coupled scintillator | Australian syncrotron, Clayton, VIC, AU | Detector Ruby FOV: 141 x 119 mm; 2560 x 2160 px; 55 µm/px; 50 fps | |
Six axis load cell | ME-Meßsysteme GmbH, Hennigsdorf, GE | K6D6 | Maximal measurement error: 0.005%; maximal force: 10000 N; maximal torque: 500 Nm |
Strain amplifier | ME-Meßsysteme GmbH, Hennigsdorf, GE | GSV-1A8USB K6D/M16 |