Il protocollo consente di misurare la deformazione della microstruttura ossea nell’intero femore umano prossimale e la sua tenacità combinando la scansione micro-TC di grandi volumi, uno stadio compressivo personalizzato e strumenti avanzati di elaborazione delle immagini.
L’imaging della microstruttura ossea sotto carichi progressivamente crescenti consente di osservare il comportamento di cedimento microstrutturale dell’osso. In questo articolo descriviamo un protocollo per ottenere una sequenza di immagini microstrutturali tridimensionali dell’intero femore prossimale in deformazione progressivamente crescente, causando fratture clinicamente rilevanti del collo del femore. Il protocollo è stato dimostrato utilizzando quattro femori di donatrici di età compresa tra 66 e 80 anni all’estremità inferiore della densità minerale ossea nella popolazione (intervallo T-score = da -2,09 a -4,75). Uno stadio di compressione radiotrasparente è stato progettato per caricare i campioni replicando una posizione su una gamba, registrando al contempo il carico applicato durante l’imaging con tomografia microcomputerizzata (micro-CT). Il campo visivo era largo 146 mm e alto 132 mm, e la dimensione isotropa dei pixel era di 0,03 mm. L’incremento della forza si basava su previsioni agli elementi finiti del carico di frattura. La fase di compressione è stata utilizzata per applicare lo spostamento al provino e attuare gli incrementi di forza prescritti. Le fratture sub-capitali dovute all’apertura e al taglio del collo del femore si sono verificate dopo quattro o cinque incrementi di carico. Le immagini micro-TC e le misurazioni della forza di reazione sono state elaborate per studiare la deformazione ossea e la capacità di assorbimento dell’energia. L’instabilità della corteccia è apparsa nelle prime fasi di carico. L’osso subcondrale della testa del femore presentava grandi deformazioni che raggiungevano il 16% prima della frattura, e un progressivo aumento della capacità di sostegno fino alla frattura. L’energia di deformazione aumentava linearmente con lo spostamento fino alla frattura, mentre la rigidezza diminuiva a valori prossimi allo zero immediatamente prima della frattura. Tre quarti dell’energia di frattura sono stati prelevati dal provino durante l’incremento finale della forza del 25%. In conclusione, il protocollo sviluppato ha rivelato una notevole capacità di assorbimento dell’energia, o tolleranza al danno, e un’interazione sinergica tra l’osso corticale e quello trabecolare in età avanzata del donatore.
Le fratture del collo del femore sono un onere importante per la popolazione anziana. L’imaging con tomografia microcomputerizzata (micro-TC) e i conseguenti test meccanici consentono di osservare la microstruttura ossea e di studiarne la relazione con la resistenza ossea, i cambiamenti legati all’età e gli spostamenti sotto carico 1,2. Tuttavia, fino a poco tempo fa, gli studi di micro-TC dell’osso sotto carico erano limitati ai nuclei ossei asportati3, ai piccoli animali4 e alle unità della colonna vertebrale umana5. Il presente protocollo è in grado di quantificare lo spostamento della microstruttura dell’intero femore umano prossimale sotto carico e dopo una frattura.
Diversi studi sono stati condotti per indagare il cedimento del femore umano e, a volte, questi hanno raggiunto conclusioni contrastanti. Ad esempio, si ritiene che l’assottigliamento delle strutture corticali e trabecolari correlato all’età determini la suscettibilità alla frattura legata all’età causando instabilità elastica dell’osso6,7, che è in apparente contrasto con l’alto coefficiente di determinazione delle previsioni di deformazione corticale e forza femorale assumendo l’assenza di instabilità elastica (R2 = 0,80-0,97)8,9. Ciononostante, tali studi hanno sistematicamente sottostimato la resistenza femorale (del 21%-29%), mettendo così in discussione le risposte ossee fragili e quasi fragili implementate nei modelli 8,10. Una possibile spiegazione per questi risultati apparentemente contrastanti potrebbe risiedere in un diverso comportamento di frattura di intere ossa rispetto ai nuclei ossei isolati. Pertanto, l’osservazione delle risposte alla deformazione e alla frattura della microstruttura ossea in interi femori prossimali può far progredire la conoscenza della meccanica della frattura dell’anca e delle relative applicazioni.
I metodi attuali per l’imaging di intere ossa umane con risoluzione micrometrica sono limitati. Il gantry e le dimensioni del rivelatore devono fornire un volume di lavoro adeguato per ospitare il femore prossimale umano (circa 13 cm x 10 cm, larghezza x lunghezza) e possibilmente una dimensione dei pixel dell’ordine di 0,02-0,03 mm per garantire che le caratteristiche microarchitettoniche rilevanti possano essere catturate11. Queste specifiche possono attualmente essere soddisfatte da alcuni impianti di sincrotrone1 e da alcuni scanner micro-CT di grandi volumi disponibili in commercio12,13. La fase di compressione deve essere radiotrasparente per ridurre al minimo l’attenuazione dei raggi X e generare una forza sufficiente a causare una frattura al femore umano (ad esempio, tra 0,9 kN e 14,3 kN per le donne bianche anziane)14. Questa grande variazione del carico di frattura complica la pianificazione del numero di fasi di carico da fratturare, il tempo complessivo dell’esperimento e la corrispondente quantità di dati prodotti. Per risolvere questo problema, il carico e la posizione della frattura possono essere stimati tramite modellazione agli elementi finiti utilizzando la distribuzione della densità ossea del campione dalle immagini cliniche di tomografia computerizzata (TC) 1,2. Infine, dopo l’esperimento, il grande volume di dati generati deve essere elaborato per studiare i meccanismi di guasto e la capacità di dissipazione dell’energia nell’intero femore umano.
In questo articolo descriviamo un protocollo per ottenere una sequenza di immagini microstrutturali tridimensionali dell’intero femore prossimale in deformazione progressivamente crescente, che provoca fratture clinicamente rilevanti del collo del femore2. Il protocollo include la pianificazione dell’incremento graduale della compressione del campione, il caricamento tramite uno stadio di compressione radiotrasparente personalizzato, l’imaging tramite uno scanner micro-CT di grande volume e l’elaborazione delle immagini e dei profili di carico.
Il presente protocollo consente di studiare ex vivo la micromeccanica delle fratture dell’anca in tre dimensioni. Uno stadio di compressione radiotrasparente (alluminio) in grado di applicare una deformazione progressiva alla metà prossimale del femore umano e di misurare la forza di reazione è stato progettato, prodotto e testato su misura. In questo protocollo viene utilizzato uno scanner micro-CT di grande volume per fornire una sequenza temporale di volumi di immagine che visualizzano l’intero femore pross…
The authors have nothing to disclose.
Finanziamento dell’Australian Research Council (FT180100338; IC190100020) è ringraziato.
Absorbent tissue | N/A | Maintain the bone moisture throughout the experiment | |
Alignment rig | Custom-made | Rig for positioning the specimen in the potting cup | |
Aluminium potting cup | Custom-made | Potting cup | |
Bone saw | N/A | Cut the specimen to size | |
Calibration phantom QCT Pro | Mindways Software, Inc., Austin, USA | CT Calibration 13002 | Calibrate grey levels in the images into equivalent bone mineral (ash) density levels |
Clinical Computed-Tmography scanner | General Electric Medical Systems Co., Wisconsin, USA | Optima CT660 | Preliminary imaging for the prediction of the load step to fracture |
Compressive stage | Custom-made | A 10 kg, radiotransparent compressive stage for applying and maintaining throught imaging a prescribed deformation to the specimen. | |
Dental cement | Soesterberg, The Netherlands | Vertex RS | |
Femur specimen | Science Care, Phoenix, USA | ||
Finite-element analysis software | ANSYS Inc., Canonsburg, USA | ANSYS Mechanical APDL | Finite-element software package |
Freezer | N/A | Store specimens at -20 °C | |
Hard Drive | Dell | Disk space: 500 GB per volume | |
Image bnarization and segmentation software | Skyscan-Bruker, Kontich, Belgium | CT analyzer | Image processing software |
Image elastic segmentation | The University of Sheffield | Bone DVC | https://bonedvc.insigneo.org/dvc/ |
Image processing and automation software | The MathWork Inc. | Matlab | Image processing software |
Image registration software | Skyscan-Bruker, Kontich, Belgium | DataViewer | Image processing software |
Image segmentation and FE modelling software | Simpleware, Exeter, UK | Scan IP | Bone egmentation software |
Image stiching script | Australian syncrotron, Clayton, VIC, AU | The script is available at IMBL | |
Image visualization | Kitware, Clifton Park, NY, USA | Paraview | Image visualization |
Image visualization | Australian National University | Dristhi | Image visualization: doi:10.1117/12.935640 |
Imaging and Medical beamline | Australian syncrotron, Clayton, VIC, AU | Large object micro-CT beamline at the Australian Synchrotron | |
Laptop | Dell Inc., USA | ||
Low-friction x-y table | THK Co., Tokyo, Japan | ||
NI signal acquisition software | National Instruments, Austin, TX | NI-DAQmx | |
Phosphate-buffered saline solution | Custom-made | Maintain the bone moisture throughout the experiment | |
Plastic bag | N/A | Maintain the bone moisture throughout the experiment | |
Rail | SKF Inc., Lansdale, PA, USA | ||
Screw-jack mechanism | Benzlers, Örebro, Sweden | Serie BD (warm gear unit) | stroke: 150 mm, maximal load: 10,000 N, gear ratio: 27:1, a displacement per revolution: 0.148 mm |
Single pco.edge sensor, lens coupled scintillator | Australian syncrotron, Clayton, VIC, AU | Detector Ruby FOV: 141 x 119 mm; 2560 x 2160 px; 55 µm/px; 50 fps | |
Six axis load cell | ME-Meßsysteme GmbH, Hennigsdorf, GE | K6D6 | Maximal measurement error: 0.005%; maximal force: 10000 N; maximal torque: 500 Nm |
Strain amplifier | ME-Meßsysteme GmbH, Hennigsdorf, GE | GSV-1A8USB K6D/M16 |