Summary

ギ酸アンモニウムを用いた改変QuEChERS法による土壌試料中の有機塩素系農薬の分析

Published: January 20, 2023
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Summary

本プロトコルは、土壌サンプル中の有機塩素系農薬残留物の測定を成功させるために、QuEChERSの相分配にギ酸アンモニウムを利用する方法をガスクロマトグラフィー質量分析とともに説明しています。

Abstract

現在、QuEChERSメソッドは、公式および非公式の両方のラボで、さまざまなマトリックスの残留農薬を分析するために世界中で最も広く使用されているサンプル調製プロトコルを表しています。ギ酸アンモニウムを使用するQuEChERS法は、オリジナルおよび2つの公式バージョンと比較して有利であることが以前に証明されています。一方では、サンプル1グラム当たり0.5gのギ酸アンモニウムを添加するだけで、相分離を誘導し、良好な分析性能を達成するのに十分である。一方、ギ酸アンモニウムは、日常的な分析におけるメンテナンスの必要性を低減します。ここでは、ギ酸アンモニウムを用いた修飾QuEChERS法を農業土壌中の有機塩素系農薬(OCP)残留物の同時分析に適用した。具体的には、試料10gを水10mLで水和した後、アセトニトリル10mLで抽出した。次に、5gのギ酸アンモニウムを用いて相分離を行った。遠心分離後、上清を無水硫酸マグネシウム、1級-2級アミン、およびオクタデシルシランによる分散固相抽出クリーンアップ工程に供した。分析技術としてガスクロマトグラフィー-質量分析法を使用した。ギ酸アンモニウムを用いたQuEChERS法は、土壌サンプルからOCP残留物を抽出するための成功した代替手段として実証されています。

Introduction

食糧生産を増やす必要性は、過去数十年にわたって世界中で農薬の集中的かつ広範な使用につながりました。農薬は害虫から作物を保護し、作物の収量を増やすために作物に適用されますが、それらの残留物は通常、土壌環境、特に農業地域に行き着きます1。さらに、有機塩素系農薬(OCP)などの一部の農薬は非常に安定した構造をしているため、残留物は分解しにくく、土壌中に長期間存続します2。一般に、土壌は、特に有機物の含有量が高い場合、残留農薬を蓄積する能力が高い3。その結果、土壌は残留農薬によって最も汚染された環境区画の1つです。一例として、これまでの完全な研究の1つでは、欧州連合全土からの317の農業土壌の83%が1つ以上の残留農薬で汚染されていることがわかりました4

残留農薬による土壌汚染は、残留物の毒性が高いため、食物連鎖を通じて非標的種、土壌機能、および消費者の健康に影響を与える可能性があります5,6。したがって、土壌中の残留農薬の評価は、特に農薬の使用に関する厳格な規制がないため、開発途上国において、環境と人間の健康への潜在的な悪影響を評価するために不可欠です7。これにより、農薬の多残留分析がますます重要になっています。しかし、土壌中の残留農薬の迅速かつ正確な分析は、干渉物質の数が多く、これらの分析対象物の低濃度レベルと多様な物理化学的特性のために困難な課題です4

すべての残留農薬分析法の中で、QuEChERS法は、最も迅速、最も簡単で、最も安価で、最も効果的で、堅牢で、最も安全なオプションになりました8。QuEChERSメソッドには2つのステップがあります。最初のステップでは、水性層とアセトニトリル層の間の塩析による分配に基づくマイクロスケール抽出が行われます。第2工程では、分散固相抽出(dSPE)を用いた洗浄工程が実施される。この技術は、多孔性吸着剤の少量の組み合わせを使用してマトリックス干渉成分を除去し、従来のSPE9の欠点を克服します。したがって、QuEChERSは、非常に正確な結果を提供し、ランダムおよびシステマティックエラーの潜在的な原因を最小限に抑える、無駄になる溶剤/化学物質がほとんどない環境に優しいアプローチです。実際、数百種類の農薬のハイスループットルーチン分析にうまく適用されており、ほぼすべてのタイプの環境、農業食品、および生物学的サンプルに強力に適用できます8,10。この研究は、農業土壌中のOCPを分析するために以前に開発され、GC-MSに結合されたQuEChERS法の新しい修正を適用および検証することを目的としています。

Protocol

1.原液の調製 注意: プロトコル全体を通して、ニトリル手袋、白衣、および安全メガネを着用することをお勧めします。 25 mLメスフラスコ内のヘキサン:トルエン(1:1)溶液2,000 mg/LのOCP( 材料表を参照)の市販ミックスから、400 mg/Lのアセトン溶液を準備します。 表 1 に、選択した各 OCP を示します。 その後のストック溶液?…

Representative Results

分析方法の完全な検証は、直線性、マトリックス効果、回復率、および再現性の観点から実行されました。 直線性評価には、6つの濃度レベル(5 μg/kg、10 μg/kg、50 μg/kg、100 μg/kg、200 μg/kg、および400 μg/kg)のスパイクブランクサンプルを使用したマトリックスマッチング検量線を使用しました。決定係数(R2)は、すべてのOCPで0.99以上でした。最低校正レベル(LCL)は5 ?…

Discussion

QuEChERS法の元の9と2つの公式バージョン13,14は、硫酸マグネシウムを塩化ナトリウム、酢酸塩、またはクエン酸塩と一緒に使用して、抽出中のアセトニトリル/水混合物の分離を促進します。ただし、これらの塩は質量分析(MS)ソースの表面に固体として堆積する傾向があり、液体クロマトグラフィー(LC)-MSベースの方法のメンテナン?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

ハビエル・エルナンデス・ボルヘスとセシリア・オルテガ・サモラの貴重なサポートに感謝します。また、EAN大学とララグーナ大学にも感謝したいと思います。

Materials

15 mL disposable glass conical centrifuge tubes PYREX 99502-15
2 mL centrifuge tubes Eppendorf 30120094
50 mL centrifuge tubes with screw caps VWR 21008-169
5977B mass-selective detector Agilent Technologies 1617R019
7820A gas chromatography system Agilent Technologies 16162016
Acetone Supelco 1006582500
Acetonitrile VWR 83642320
Ammonium formate VWR 21254260
Automatic shaker KS 3000 i control IKA 3940000
Balance Sartorius Lab Instruments Gmbh & Co ENTRIS224I-1S
Bondesil-C18, 40 µm Agilent Technologies 12213012
Bondesil-PSA, 40 µm Agilent Technologies 12213024
Cyclohexane VWR 85385320
EPA TCL pesticides mix Sigma Aldrich 48913
Ethyl acetate Supelco 1036492500
G4567A automatic sampler Agilent Technologies 19490057
HP-5ms Ultra Inert (5%-phenyl)-methylpolysiloxane 30 m x 250 µm x 0.25 µm column Agilent Technologies 19091S-433UI
Magnesium sulfate monohydrate Sigma Aldrich 434183-1KG
Mega Star 3.R centrifuge VWR 521-1752
Milli-Q gradient A10 Millipore RR400Q101
p,p'-DDE-d8 Dr Ehrenstorfer DRE-XA12041100AC
Pipette tips 2 – 200 µL BRAND 732008
Pipette tips 5 mL BRAND 702595
Pipette tips 50 – 1000 uL BRAND 732012
Pippette Transferpette S variabel 10 – 100 µL BRAND 704774
Pippette Transferpette S variabel 100 – 1000 µL BRAND 704780
Pippette Transferpette S variabel 20 – 200 µL BRAND 704778
Pippette Transferpette S variabel 500 – 5000 µL BRAND 704782
Vials with fused-in insert Sigma Aldrich 29398-U
OCPs CAS registry number
α-BHC 319-84-6
β-BHC 319-85-7
Lindane 58-89-9
δ-BHC 319-86-8
Heptachlor 76-44-8
Aldrin 309-00-2
Heptachlor epoxide 1024-57-3
α-Endosulfan 959-98-8
4,4'-DDE-d8 (IS) 93952-19-3
4,4'-DDE 72-55-9
Dieldrin 60-57-1
Endrin 72-20-8
β-Endosulfan 33213-65-9
4,4'-DDD 72-54-8
Endosulfan sulfate 1031-07-8
4,4'-DDT 50-29-3
Endrin ketone 53494-70-5
Methoxychlor 72-43-5

References

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Cite This Article
González-Curbelo, M. Á. Analysis of Organochlorine Pesticides in a Soil Sample by a Modified QuEChERS Approach Using Ammonium Formate. J. Vis. Exp. (191), e64901, doi:10.3791/64901 (2023).

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