JoVE Journal > Environment
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
עברית

Automatically Generated
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Environment

בדיקות ציטוטוקסיות עם קווי תאים של דגי זברה

Published: January 06, 2023
doi:
10.3791/64860
, , , , , , , , ,
1Graduate Program in Genetics, Department of Genetics,Federal University of Paraná (UFPR), 2Safety of Product Department,Grupo Boticário, 3Department of Genetics,Federal University of Paraná (UFPR)

Summary

פרוטוקול זה מציג מבחני ציטוטוקסיות נפוצים (Alamar Blue [AB], CFDA-AM, Neutral Red ו-MTT assays) המותאמים להערכת ציטוטוקסיות בעוברים של דגי זברה (ZEM2S) ובקווי תאי כבד (ZFL) בלוחות של 96 בארות.

Abstract

קווי תאי דגים הפכו יותר ויותר בשימוש במחקרי רעילות אקולוגית, ומבחני ציטוטוקסיות הוצעו כשיטות לחיזוי רעילות חריפה של דגים. לפיכך, פרוטוקול זה מציג מבחני ציטוטוקסיות ששונו כדי להעריך את כדאיות התא בדגי זברה (Danio rerio), עובר (ZEM2S) וקווי תאי כבד (ZFL) בלוחות 96 בארות. נקודות הקצה של ציטוטוקסיות שהוערכו הן שלמות מיטוכונדריאלית (מבחני Alamar Blue [AB] ו-MTT), שלמות הממברנה באמצעות פעילות אסטראז (בדיקת CFDA-AM), ושלמות הממברנה הליזוזומלית (בדיקת אדום נייטרלי [NR]). לאחר חשיפת חומרי הבדיקה בצלחת 96 בארות, מבוצעות בדיקות ציטוטוקסיות; כאן, AB ו- CFDA-AM מתבצעים בו זמנית, ואחריו NR על אותה צלחת, בעוד בדיקת MTT מבוצעת על צלחת נפרדת. הקריאות עבור בדיקות אלה נלקחות על ידי פלואורסצנטיות עבור AB ו- CFDA-AM, וספיגה עבור MTT ו- NR. ניתן להשתמש במבחני ציטוטוקסיות המבוצעים עם קווי תאי דגים אלה כדי לחקור את הרעילות החריפה של חומרים כימיים על דגים.

Introduction

חומרים כימיים צריכים להיבדק לגבי בטיחותם לבריאות האדם והסביבה. סמנים ביולוגיים מולקולריים ותאיים נלקחים בחשבון יותר ויותר בהערכות בטיחות כדי לחזות השפעות על אורגניזמים חיים על ידי סוכנויות רגולטוריות ו / או חקיקה (למשל, REACH, OECD, US EPA)1,2, שכן הם יכולים להקדים את התוצאה השלילית in vivo (למשל, הפרעה אנדוקרינית, תגובה חיסונית, רעילות חריפה, פוטוטוקסיות)3,4,5,6,7 . בהקשר זה, ציטוטוקסיות נלקחה כמדד לחיזוי רעילות חריפהשל דגים 5,8; עם זאת, יכולים להיות לה יישומים רבים אחרים במחקרי רעילות אקולוגית, כגון הגדרת ריכוזים תת-ציטוטוקסיים של חומרים כימיים כדי לחקור את מערך ההשפעות המגוון ביותר שלהם על דגים (למשל, השפעות משבשות אנדוקריניות).

במערכות תרבית תאים (מערכות במבחנה ), ציטוטוקסיות של חומרים כימיים יכולה להיקבע על ידי שיטות שונות בסוגי נקודות הקצה. לדוגמה, שיטה ציטוטוקסית יכולה להתבסס על נקודת קצה הקשורה למורפולוגיה ספציפית שנצפתה במהלך תהליך המוות של התא, בעוד ששיטה אחרת יכולה לקבוע ציטוטוקסיות על ידי מדידת מוות תאי, כדאיות ופונקציונליות, מורפולוגיה, מטבוליזם של אנרגיה והתקשרות תאים והתפשטות. חומרים כימיים יכולים להשפיע על כדאיות התא באמצעות מנגנונים שונים, ולכן הערכת ציטוטוקסיות המכסה נקודות קצה שונות של כדאיות התא נחוצה כדי לחזות השפעות כימיות9.

MTT ו- Alamar Blue (AB) הם מבחנים הקובעים את ההשפעות על כדאיות התא בהתבסס על פעילות מטבולית של תאים. בדיקת MTT מעריכה את הפעילות של האנזים המיטוכונדריאלי סוקצינאט דהידרוגנאז10. ההפחתה של 3-[4,5-dimethylthiazol-2yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) לכחול formazan מתרחשת רק בתאים בני קיימא, והצפיפות האופטית שלו עומדת ביחס ישר למספר התאים הקיימים10. בדיקת AB היא אינדיקטור רגיש להפחתת חמצון, המתווך על ידי אנזימים מיטוכונדריאליים המפליאים ומשנים את צבעם בעת הפחתת רזזורין לרסורופין על ידי תאים חיים11; עם זאת, אנזימים ציטוסוליים ומיקרוזומליים תורמים גם הם להפחתת AB ו- MTT12. אנזימים אלה עשויים לכלול מספר רדוקטאזים, כגון אלכוהול ואלדהיד אוקסידוקטאז, NAD(P)H: quinone oxidoreductase, flavin reductase, NADH dehydrogenase, ו cytochromes11.

בדיקת אדום נייטרלי (NR) היא בדיקת כדאיות תאים המבוססת על שילוב צבע זה בליזוזומים של תאים בני קיימא13. ספיגת NR תלויה ביכולת התאים לשמור על שיפועי pH. שיפוע הפרוטון בתוך הליזוזומים שומר על pH נמוך יותר מהציטופלסמה. ב-pH פיזיולוגי תקין, ה-NR מציג מטען נטו של כאפס, המאפשר לו לחדור לקרומי התא. לכן, הצבע הופך טעון ונשמר בתוך הליזוזומים. כתוצאה מכך, ככל שכמות ה-NR השמור גדולה יותר, כך גדל מספר התאים בני הקיימא14. חומרים כימיים הפוגעים בפני השטח של התא או בקרומים הליזוזומליים פוגעים בספיגה של צבע זה.

בדיקת CFDA-AM היא בדיקת כדאיות תאים פלואורומטרית המבוססת על שימור 5-carboxyfluorescein diacetate acetoxymethyl ester (CFDA-AM)15. 5-CFDA-AM, מצע אסטראז, מומר לקרבוקסיפלואורסצאין, חומר פלואורסצנטי שהוא קוטבי ובלתי חדיר על ידי ממברנות של תאים חיים15; לכן, הוא נשמר בצד הפנימי של קרום התא שלם, המציין תאים קיימא.

לאחרונה, שלוש בדיקות ציטוטוקסיות (CFDA-AM, NR ו- AB assays) שולבו בהנחיית ISO (ארגון התקינה הבינלאומי) מאומתת (ISO 21115:2019)16 ובשיטת הבדיקה של OECD (הארגון לשיתוף פעולה ופיתוח כלכלי) (OECD TG 249) להערכת רעילות חריפה של דגים באמצעות קו התאים RTgill-W1 (קו תאים קבוע מפורל הקשת [Oncorhynchus mykiss] gill) בצלחות 24 בארות17 . למרות שקיימת שיטה מבוססת תאים לחיזוי רעילות חריפה של דגים, הושקעו מאמצים בפיתוח שיטות דומות עם מיני דגים אחרים ובהגדלת התפוקה של השיטה. כמה דוגמאות כוללות פיתוח של קווי תאי ZFL הנגועים בגנים של כתב עבור מסלולי רעילות ספציפיים18,19, בדיקות פוטוטוקסיות בקו תאי RTgill-W120, והשימוש בקווי תאים ZFL ו- ZF4 (פיברובלסטי של דגי זברה שמקורם בעוברים בני יום אחד) כדי להעריך רעילות על ידי מספר בדיקות ציטוטוקסיות21.

דג זברה (Danio rerio) הוא אחד ממיני הדגים העיקריים המשמשים בחקר רעילות ימית; לכן, שיטות מבוססות תאים עם שורות תאים של דגי זברה לבדיקת רעילות דגים עשויות להיות שימושיות ביותר. קו תאי ZFL הוא קו תאי הפטוציטים אפיתל של דג זברה המציג את המאפיינים העיקריים של תאים פרנכימליים בכבד ויכול לעכל קסנוביוטיקה 7,22,23,24,25. בינתיים, קו התאים ZEM2S הוא קו תאים פיברובלסטי עוברי של דג זברה הנגזר משלב הבלסטולה שניתן להשתמש בו כדי לחקור השפעות התפתחותיות על דגים26,27. לפיכך, פרוטוקול זה מתאר ארבע בדיקות ציטוטוקסיות (מבחני MTT, AB, NR ו- CFDA-AM), עם שינויים שיש לבצע עם קווי תאים ZFL ו- ZEM2S בלוחות 96 בארות.

Protocol

הערה: עיין בטבלת החומרים לקבלת רשימת החומרים המשמשים בפרוטוקול זה ובטבלה 1 עבור הרכב הפתרונות והמדיה המשמשים בפרוטוקול זה. 1. הכנת תאי ZFL ו- ZEM2S התחל עם בקבוק T75 של תאי ZFL או ZEM2S עם מפגש של 80%, בתרבית בתווך המלא המתאים ב 28 ° C ללא CO2. הסר א?…

Representative Results

איור 3 מראה את הלוחות של מבחני AB, CFDA-AM, NR ו-MTT. עבור בדיקת AB (איור 3A), הבארות והבארות הריקות ללא או מספר מופחת של תאים בני קיימא מראות צבע כחול ופלואורסצנטיות נמוכה, בעוד שהבארות עם מספר גבוה של תאים בני קיימא הן ורדרדות ומציגות ערכי פלואורסצנטיות גבוהים עקב הפי?…

Discussion

מבחני ציטוטוקסיות נמצאים בשימוש נרחב להערכת רעילות חוץ גופית, ומאמר פרוטוקול זה מציג ארבע בדיקות ציטוטוקסיות נפוצות ששונו לביצוע בשורות תאים של דגי זברה (כלומר, צפיפות תאים עבור צלחת 96 בארות, זמן דגירה במבחן MTT, דלדול FBS במהלך מצב החשיפה לכימיקלים, וריכוז מרבי מקובל עבור SC). מכיוון שבדי…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

לזכרו של ד”ר מרסיו לורנצ’יני, מחבר שותף של עבודה זו, חוקר מעולה בתחום הקוסמטיקה ומוקדש לקידום המחקר הקוסמטי בברזיל. המחברים אסירי תודה למעבדה מרובת המשתמשים במחלקה לפיזיולוגיה (UFPR) על זמינות הציוד ועל התמיכה הכספית של התיאום לשיפור כוח האדם להשכלה גבוהה (CAPES, ברזיל) (קוד כספים 001) ו- Grupo Boticario.

Materials

5-CFDA, AM (5-Carboxyfluorescein Diacetate, Acetoxymethyl Ester) Invitrogen C1345
Cell culture plate, 96 well plate Sarstedt 83.3924 Surface: Standard, flat base
DMEM Gibco 12800-017 Powder, high glucose, pyruvate
Ham's F-12 Nutrient Mix, powder Gibco 21700026 Powder
HEPES (1 M) Gibco 15630080
Leibovitz's L-15 Medium Gibco 41300021 Powder
Neutral red  Sigma-Aldrich N4638 Powder, BioReagent, suitable for cell culture
Orbital shaker  Warmnest KLD-350-BI 22 mm rotation diameter
Dulbeccos PBS (10X) with calcium and magnesium Invitrogen 14080055
Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL) Gibco 15140122
Resazurin sodium salt  Sigma-Aldrich R7017 Powder, BioReagent, suitable for cell culture
RPMI 1640 Medium Gibco 31800-014 Powder
SFB – Fetal Bovine Serum, qualified, USDA-approved regions Gibco 12657-029
Sodium bicarbonate Sigma-Aldrich S5761 Powder,  bioreagent for molecular biology
Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide  98% Sigma-Aldrich M2128
Trypan blue stain (0.4%) Gibco 15250-061
Trypsin-EDTA (0.5%), no phenol red Gibco 15400054
ZEM2S cell line ATCC CRL-2147 This cell line was kindly donated by Professor Dr. Michael J.
Carvan (University of Wisconsin, Milwaukee, USA)
ZFL cell line BCRJ 256
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. ECHA. Non-Animal Approaches-Current Status of Regulatory Applicability Under the REACH, CLP and Biocidal Products Regulations. ECHA. , (2017).
  2. Alternative Methods Accepted by US Agencies. National Toxicology Program, and US Department of Health and Human Services Available from: https://ntp.niehs.nih.gov/whatwestudy/niceatm/accept-methods/index.html (2022)
  3. Schirmer, K. Proposal to improve vertebrate cell cultures to establish them as substitutes for the regulatory testing of chemicals and effluents using fish. Toxicology. 224 (3), 163-183 (2006).
  4. Scholz, S., et al. Alternatives to in vivo tests to detect endocrine disrupting chemicals (EDCs) in fish and amphibians-screening for estrogen, androgen and thyroid hormone disruption. Critical Reviews in Toxicology. 43 (1), 45-72 (2013).
  5. Tanneberger, K., et al. Predicting fish acute toxicity using a fish gill cell line-based toxicity assay. Environmental Science & Technology. 47 (2), 1110-1119 (2013).
  6. Roesler, R., Lorencini, M., Pastore, G. Brazilian cerrado antioxidant sources: cytotoxicity and phototoxicity in vitro. Food Science and Technology. 30, 814-821 (2010).
  7. Ruyra, A., et al. Zebrafish liver (ZFL) cells are able to mount an anti-viral response after stimulation with Poly (I:C). Comparative Biochemistry and Physiology. Part B, Biochemistry & Molecular Biology. 182, 55-63 (2015).
  8. Natsch, A., Laue, H., Haupt, T., von Niederhäusen, V., Sanders, G. Accurate prediction of acute fish toxicity of fragrance chemicals with the RTgill-W1 cell assay. Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (3), 931-941 (2018).
  9. Freshney, R. I. Cytotoxicity. Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique. , (2005).
  10. Mosmann, T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).
  11. O’Brien, J., Wilson, I., Orton, T., Pognan, F. Investigation of the Alamar Blue (resazurin) fluorescent dye for the assessment of mammalian cell cytotoxicity. European Journal of Biochemistry. 267 (17), 5421-5426 (2000).
  12. Gonzalez, R. J., Tarloff, J. B. Evaluation of hepatic subcellular fractions for Alamar blue and MTT reductase activity. Toxicology In Vitro. 15 (3), 257-259 (2001).
  13. Borenfreund, E., Puerner, J. A. Toxicity determined in vitro by morphological alterations and neutral red absorption. Toxicology Letters. 24 (2-3), 119-124 (1985).
  14. Repetto, G., del Peso, A., Zurita, J. L. Neutral red uptake assay for the estimation of cell viability/cytotoxicity. Nature Protocols. 3 (7), 1125-1131 (2008).
  15. Kamiloglu, S., Sari, G., Ozdal, T., Capanoglue, E. Guidelines for cell viability assays. Food Frontiers. 1 (3), 332-349 (2020).
  16. Water Quality-Determination of Acute Toxicity of Water Samples and Chemicals to a Fish Gill Cell Line (RTgill-W1) (ISO 21115:2019). International Organization for Standardization Available from: https://www.iso.org/standar/69933.html (2019)
  17. Organisation for Economic Co-operation and Development. . Test Guideline No. 249: Fish Cell Line Acute Toxicity-The RTgill-W1 Cell Line Assay. OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2. Effects on Biotic Systems. , (2021).
  18. Lungu-Mitea, S., Lundqvist, J. Potentials and pitfalls of transient in vitro reporter bioassays: interference by vector geometry and cytotoxicity in recombinant zebrafish cell lines. Archives of Toxicology. 94 (8), 2769-2784 (2020).
  19. Lungu-Mitea, S., Han, Y., Lundqvist, J. Development, scrutiny, and modulation of transient reporter gene assays of the xenobiotic metabolism pathway in zebrafish hepatocytes. Cell Biology and Toxicology. , 1-23 (2021).
  20. Schirmer, K., Chan, A. G., Greenberg, B. M., Dixon, D. G., Bols, N. C. Methodology for demonstrating and measuring the photocytotoxicity of fluoranthene to fish cells in culture. Toxicology In Vitro. 11 (1-2), 107-119 (1997).
  21. Lungu-Mitea, S., et al. Modeling bioavailable concentrations in zebrafish cell lines and embryos increases the correlation of toxicity potencies across test systems. Environmental Science & Technology. 55 (1), 447-457 (2021).
  22. Cavalcante, D. G. S. M., et al. Cytotoxic, biochemical and genotoxic effects of biodiesel produced by different routes on ZFL cell line. Toxicology In Vitro. 28 (6), 1117-1125 (2014).
  23. Meng, Q., Yeung, K., Chan, K. M. Toxic effects of octocrylene on zebrafish larvae and liver cell line (ZFL). Aquatic Toxicology. 236, 105843 (2021).
  24. Kwok, M. L., Chan, K. M. Oxidative stress and apoptotic effects of copper and cadmium in the zebrafish liver cell line ZFL. Toxicology Reports. 7, 822-835 (2020).
  25. Yang, J., Chan, K. M. Evaluation of the toxic effects of brominated compounds (BDE-47, 99, 209, TBBPA) and bisphenol A (BPA) using a zebrafish liver cell line, ZFL. Aquatic Toxicology. 159, 138-147 (2015).
  26. Bradford, C. S., Sun, L., Collodi, P., Barnes, D. W. Cell cultures from zebrafish embryos and adult tissues. Journal of Tissue Culture Methods. 16 (2), 99-107 (1994).
  27. He, S., et al. Genetic and transcriptome characterization of model zebrafish cell lines. Zebrafish. 3 (4), 441-453 (2006).
  28. Mansoury, M., Hamed, M., Karmustaji, R., Al Hannan, F., Safrany, S. T. The edge effect: A global problem. The trouble with culturing cells in 96-well plates. Biochemistry and Biophysics Reports. 26, 100987 (2021).
  29. Funk, D., Schrenk, H. -. H., Frei, E. Serum albumin leads to false-positive results in the XTT and the MTT assay. BioTechniques. 43 (2), 178 (2007).
  30. Dayeh, V. R., Bols, N. C., Tanneberger, K., Schirmer, K., Lee, L. E. J. The use of fish-derived cell lines for investigation of environmental contaminants: An update following OECD’s fish toxicity testing framework no. 171. Current Protocols in Toxicology. 1, (2013).
  31. Stepanenko, A. A., Dmitrenko, V. V. Pitfalls of the MTT assay: Direct and off-target effects of inhibitors can result in over/underestimation of cell viability. Gene. 574 (2), 193-203 (2015).
  32. Ulukaya, E., Colakogullari, M., Wood, E. J. Interference by anti-cancer chemotherapeutic agents in the MTT-tumor chemosensitivity assay. Chemotherapy. 50 (1), 43-50 (2004).
  33. Sebaugh, J. L. Guidelines for accurate EC50/IC50 estimation. Pharmaceutical Statistics. 10 (2), 128-134 (2011).
  34. Weimer, M., et al. The impact of data transformations on concentration-response modeling. Toxicology Letters. 213 (2), 292-298 (2012).
  35. Green, J. W., Holbech, T. A., Henrik, Chapter 4: Analysis of Continuous Data (Regression). Statistical Analysis of Ecotoxicity Studies. , (2018).
  36. Proença, S., et al. Effective exposure of chemicals in in vitro cell systems: A review of chemical distribution models. Toxicology In Vitro. 73, 105133 (2021).
  37. Guidony, N. S., et al. ABC proteins activity and cytotoxicity in zebrafish hepatocytes exposed to triclosan. Environmental Pollution. 271, 116368 (2021).
  38. da Silva, N. D. G., et al. Interference of goethite in the effects of glyphosate and Roundup® on ZFL cell line. Toxicology In Vitro. 65, 104755 (2020).
  39. Yang, Y., et al. Temperature is a key factor influencing the invasion and proliferation of Toxoplasma gondii in fish cells. Experimental Parasitology. 217, 107966 (2020).
  40. Lopes, F. M., Sandrini, J. Z., Souza, M. M. Toxicity induced by glyphosate and glyphosate-based herbicides in the zebrafish hepatocyte cell line (ZF-L). Ecotoxicology and Environmental Safety. 162, 201-207 (2018).
  41. Lachner, D., Oliveira, L. F., Martinez, C. B. R. Effects of the water soluble fraction of gasoline on ZFL cell line: Cytotoxicity, genotoxicity and oxidative stress. Toxicology In Vitro. 30, 225-230 (2015).
  42. Morozesk, M., et al. Effects of multiwalled carbon nanotubes co-exposure with cadmium on zebrafish cell line: Metal uptake and accumulation, oxidative stress, genotoxicity and cell cycle. Ecotoxicology and Environmental Safety. 202, 110892 (2020).
  43. Dognani, G., et al. Nanofibrous membranes for low-concentration Cr VI adsorption: kinetic, thermodynamic and the influence on ZFL cells viability. Materials Research. , 24 (2021).
  44. ZEM2S (ATCC®CRL-2147™). American Type Culture Collection Available from: https://www.atcc.org/products/crl-2147 (2023)
  45. Chen, Y., et al. Acute toxicity of the cationic surfactant C12-benzalkonium in different bioassays: how test design affects bioavailability and effect concentrations. Environmental Toxicology and Chemistry. 33 (3), 606-615 (2014).
  46. Pomponio, G., et al. In vitro kinetics of amiodarone and its major metabolite in two human liver cell models after acute and repeated treatments. Toxicology In Vitro. 30, 36-51 (2015).
  47. Mori, M., Wakabayashi, M. Cytotoxicity evaluation of chemicals using cultured fish cells. Water Science and Technology. 42 (7-8), 277-282 (2000).
  48. Caminada, D., Escher, C., Fent, K. Cytotoxicity of pharmaceuticals found in aquatic systems: comparison of PLHC-1 and RTG-2 fish cell lines. Aquatic Toxicology. 79 (2), 114-123 (2006).
  49. Giltrap, M., et al. In vitro screening of organotin compounds and sediment extracts for cytotoxicity to fish cells. Environmental Toxicology and Chemistry. 30 (1), 154-161 (2011).
  50. Hollert, H., Duerr, M., Erdinger, L., Braunbeck, T. Cytotoxicity of settling particulate matter and sediments of the Neckar River (Germany) during a winter flood. Environmental Toxicology and Chemistry. 19 (3), 528-534 (2000).
  51. Pannetier, P., et al. Toxicity assessment of pollutants sorbed on environmental sample microplastics collected on beaches: Part I-adverse effects on fish cell line. Environmental Pollution. 248, 1088-1097 (2019).
  52. Ternjej, I., Srček, V. G., Mihaljević, Z., Kopjar, N. Cytotoxic and genotoxic effects of water and sediment samples from gypsum mining area in channel catfish ovary (CCO) cells. Ecotoxicology and Environmental Safety. 98, 119-127 (2013).
  53. Hamid, R., Rotshteyn, Y., Rabadi, L., Parikh, R., Bullock, P. Comparison of alamar blue and MTT assays for high throughput screening. Toxicology In Vitro. 18 (5), 703-710 (2004).
  54. Vistica, D. T., et al. Tetrazolium-based assays for cellular viability: a critical examination of selected parameters affecting formazan production. Cancer Research. 51 (10), 2515-2520 (1991).
  55. Knauer, K., Lampert, C., Gonzalez-Valero, J. Comparison of in vitro and in vivo acute fish toxicity in relation to toxicant mode of action. Chemosphere. 68 (8), 1435-1441 (2007).
  56. Stadnicka-Michalak, J., Tanneberger, K., Schirmer, K., Ashauer, R. Measured and modeled toxicokinetics in cultured fish cells and application to in vitro-in vivo toxicity extrapolation. PLoS One. 9 (3), 92303 (2014).

Tags

Cytotoxicity AssayZebrafish Cell LinesZEM2SZFL96-well PlateCell ViabilityAcute ToxicityEcotoxicityAlternative Fish AssaysHepatocytesEmbryonic CellsCell SuspensionMulti-channel PipetteTest ChemicalsTriton X-100Exposure Media

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Rodrigues de Souza, I., Wilke Sivek, T., Vaz de Oliveira, J. B., Di Pietro Micali Canavez, A., de Albuquerque Vita, N., Cigaran Schuck, D., Rodrigues de Souza, I., Cestari, M. M., Lorencini, M., Leme, D. M. Cytotoxicity Assays with Zebrafish Cell Lines. J. Vis. Exp. (191), e64860, doi:10.3791/64860 (2023).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image